目的:膽管癌是一種起源于膽管上皮細胞的,發(fā)病率位于原發(fā)性肝癌第二位的惡性腫瘤,由于其缺乏早期診斷指標及易早期侵襲的特點,導致膽管癌死亡率高居不下。eIF3d基因是一種在翻譯起始階段起重要作用的基因,目前已經(jīng)有很多關(guān)于eIF3d基因在腫瘤中的研究,并且它被發(fā)現(xiàn)有不同程度的促癌作用,然而其在膽管癌發(fā)病過程中起到的作用尚未明確。本研究主要通過慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)敲減膽管癌細胞中eIF3d基因的表達,進而研究其對于膽管癌細胞株增殖,遷移,及細胞周期,細胞體內(nèi)成瘤情況的影響。從而探討e IF3d基因能否影響膽管癌細胞生長及在細胞生長中發(fā)揮的作用,推測其對膽管癌發(fā)生發(fā)展的影響。方法:1.構(gòu)建慢病毒并轉(zhuǎn)染獲得穩(wěn)定的低表達eIF3d基因的膽管癌HCC-9810及RBE細胞系。2.進行體外細胞實驗如,克隆形成實驗,MTT實驗,Transwell實驗,驗證了體外eIF3d基因?qū)τ谀懝馨┘毎鲋尺w移影響,流式細胞儀檢測敲減eIF3d基因?qū)τ谀懝馨┘毎芷诘挠绊�。通過Western-blot（過蛋白印記實驗）檢測細胞轉(zhuǎn)移及周期相關(guān)蛋白表達改變情況。3.設(shè)計體內(nèi)實驗,構(gòu)建裸鼠成瘤模型,探究eIF3d基因在裸鼠體內(nèi)對膽... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學山西省

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

pLKO.1–TRC質(zhì)粒DNA圖譜

圖 2. (A)慢病毒轉(zhuǎn)染 48h 后鏡下觀測到的綠色熒光蛋白顯色情況。（B）Western-bolt 實驗檢測 eIF3d 在 eIF3d 敲減病毒（shRNA-eIF3d）組及轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒慢病毒對照組（Control）分別HCCC-9810 及 RBE 的表達情況我們通過使用慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)，分別于膽管癌 HCCC-9810 及 RBE 細胞系中轉(zhuǎn)染 eIF3d 敲減病毒（shRNA-eIF3d）及空質(zhì)粒慢病毒（Control）,同時在慢病毒轉(zhuǎn)染后的 48 小時觀察細胞中 GFP（綠色熒光蛋白）的表達情況來推測其轉(zhuǎn)染效率（結(jié)果如圖 2 所示），兩株細胞均達到很好的轉(zhuǎn)染效率。接著通過 Western-bolt進一步驗證 eIF3d 敲減病毒（shRNA-eIF3d）的敲減效率，對敲減組細胞及其對照組進行檢測，從而進一步對慢病毒轉(zhuǎn)染后的實際敲減效率進行驗證，Western-bolt 結(jié)果顯示，與對照組相比，eIF3d 敲減病毒組的蛋白表達水平明顯降低。通過使用慢病毒轉(zhuǎn)染法獲得了較高的轉(zhuǎn)染效率，并且能夠有效的降低其在細胞中的表達量，同時獲得了穩(wěn)定低表達 eIF3d 基因的膽管癌 HCCC-9810 及 RBE 細胞系。

山西醫(yī)科大學（博）碩士學位論文2.2 抑制 eIF3d 基因可以顯著抑制膽管細胞體外增殖能力。由于很多研究都發(fā)現(xiàn)了eIF3d基因在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起促進作用，基于這些，我們推測 eIF3d 基因很可能在膽管癌細胞增殖和運動侵襲中起到了一定的調(diào)控促進功能。為了驗證 eIF3d 對于膽管癌細胞增殖能力的影響，我們設(shè)計了兩個實驗分別從細胞群及單個細胞驗證其對于膽管癌細胞增殖能力的影響


本文編號：2898417