發(fā)布時(shí)間：2020-11-13 17:20

　　 研究背景:結(jié)直腸癌(Colorectal cancer CRC)是全球常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一,近幾年其發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢(shì),已成為嚴(yán)重威脅我國(guó)人民健康的主要腫瘤之一。PIK3CA基因突變(phosphatidylinositol-4 5-bisphosphate 3-kinase,催化亞基α)已被證明與CRC的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后有相關(guān)性。然而,由于目前臨床的檢測(cè)方法靈敏度低,操作過(guò)程繁瑣,使得PIK3CA基因突變的檢測(cè)受到限制。方法:我們建立了一個(gè)超敏感的肽核酸鉗制PCR技術(shù)(PNA-PCR技術(shù))去檢測(cè)血液游離DNA中PIK3CA基因在第9、20外顯子發(fā)生的突變。而且,使用這種技術(shù)檢測(cè)128位結(jié)直腸癌患者血液PIK3CA基因突變狀態(tài),與Sanger測(cè)序法對(duì)比,確定該技術(shù)的準(zhǔn)確度。此外,隨訪了6名接受靶向治療的CRC患者監(jiān)測(cè)PIK3CA基因突變狀態(tài)。結(jié)果:PNA-PCR技術(shù)的敏感度高,在檢測(cè)第9和20外顯子時(shí)分別為0.1%和0.2%。當(dāng)128名結(jié)直腸癌患者的血液PIK3CA基因突變狀態(tài)由PNA-PCR聯(lián)合Sanger測(cè)序進(jìn)行檢測(cè)時(shí),共有33名檢測(cè)到E545K位點(diǎn)突變,29名檢測(cè)到H1047R位點(diǎn)突變,這些病人中有13名是E545K和H1047R位點(diǎn)突變雙陽(yáng)性的,79位是兩突變位點(diǎn)雙陰性。總而言之,共有38.3%(49/128)的CRC患者發(fā)現(xiàn)E545K位點(diǎn)或H1047R位點(diǎn)至少一個(gè)位點(diǎn)存在突變。患者的臨床參數(shù),年齡(P=0.358),性別(P=0.622),疾病分期(P=0.353),疾病位置(P=0.307)及CEA狀態(tài)(P=0.414)等都與PIK3CA基因突變狀態(tài)沒(méi)有相關(guān)性。在連續(xù)監(jiān)測(cè)研究中,發(fā)現(xiàn)血液循環(huán)PIK3CA基因突變狀況是可以預(yù)測(cè)EGFR單抗療效的生物學(xué)標(biāo)志物。因此,在CRC患者治療過(guò)程中連續(xù)監(jiān)測(cè)PIK3CA基因突變情況,能夠指導(dǎo)患者正確的臨床用藥,使患者最大獲益。當(dāng)PIK3CA基因突變狀態(tài)只由PNA-PCR方法確定時(shí),ΔCp值與突變DNA占DNA總量比率之間有良好的線(xiàn)性關(guān)系。PNA-PCR與“金標(biāo)準(zhǔn)”測(cè)序相比,其準(zhǔn)確性分別為93.75%和92.25%,當(dāng)設(shè)定第9、20外顯子ΔCp值的cut-off值分別為9.0和8.0時(shí)。結(jié)論:經(jīng)過(guò)上述研究,開(kāi)發(fā)了一種簡(jiǎn)單的、非侵入性的、超敏感的PNA-PCR技術(shù),此技術(shù)尤其適用于含微量腫瘤DNA的血液樣本檢測(cè)。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)患者腫瘤基因突變狀態(tài)是可以預(yù)測(cè)EGFR單抗療效的生物學(xué)標(biāo)志物。
【學(xué)位單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類(lèi)】：R735.34
【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要符號(hào)表
第一章 緒論
第二章 材料和方法
    2.1 臨床標(biāo)本收集及處理
    2.2 材料與試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
第三章 結(jié)果
    3.1 DLD-1、HCT116和A549細(xì)胞PI3KCA基因的突變分析
    3.2 PIK3CA基因E545K和H1047R位點(diǎn)突變的檢測(cè)限度
    3.3 PNA-PCR聯(lián)合Sanger測(cè)序法檢測(cè)血液循環(huán)PI3KCA基因突變
    3.4 血液循環(huán)PIK3CA基因突變與結(jié)直腸病人臨床參數(shù)的相關(guān)性
    3.5 PNA-PCR技術(shù)直接檢測(cè)血液循環(huán)PIK3CA基因突變
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝

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