印度南瓜(Cucurbita maxima Duch.),為葫蘆科南瓜屬重要的蔬菜作物,世界范圍內(nèi)廣泛栽植,我國(guó)的南瓜種植面積及產(chǎn)量均居世界前列。強(qiáng)雌性狀的利用可以顯著增加南瓜田間產(chǎn)量,有效提高制種效率和種子的純度,降低生產(chǎn)成本,提高種植效益,是南瓜作物中重要的育種目標(biāo)之一。而目前,由于印度南瓜強(qiáng)雌性狀為隱形基因控制,利用較為困難,且其產(chǎn)生的分子機(jī)理也不清楚。而對(duì)印度南瓜強(qiáng)雌性狀控制基因的精細(xì)定位,進(jìn)而克隆目標(biāo)基因,并通過(guò)分子標(biāo)記輔助選擇進(jìn)行利用,是提高南瓜育種效率的有效手段,也是解析強(qiáng)雌性狀分子機(jī)理的必要途徑。目前,對(duì)印度南瓜強(qiáng)雌性狀基因定位的報(bào)道僅有兩篇,存在定位區(qū)間較大,分子標(biāo)記與目標(biāo)基因連鎖不夠緊密等問(wèn)題,而且候選基因尚未被克隆分析。所以我們?cè)谝延醒芯炕A(chǔ)上進(jìn)一步利用重測(cè)序等技術(shù)手段對(duì)印度南瓜強(qiáng)雌基因進(jìn)行精細(xì)定位,預(yù)測(cè)候選基因,并對(duì)候選基因進(jìn)行表達(dá)分析,同時(shí)將基因定位結(jié)果應(yīng)用于南瓜育種中的強(qiáng)雌單株篩查與優(yōu)良自交系的創(chuàng)制。本論文取得的主要結(jié)果如下:1、利用重測(cè)序技術(shù)分別獲得強(qiáng)雌性狀定位群體雙親各8G左右的序列數(shù)據(jù)對(duì)印度南瓜強(qiáng)雌性狀定位群體雙親“強(qiáng)雌無(wú)杈150”與“小粒日母162-2”進(jìn)行高通量重測(cè)序,以印度南瓜基因組序列作為參考基因組,分別獲得8.6G和8.4G的測(cè)序數(shù)據(jù)。在本實(shí)驗(yàn)室前期該性狀初定位的基礎(chǔ)上,對(duì)初定位附近3 Mb區(qū)域內(nèi)的序列進(jìn)行了高質(zhì)量拼接,并篩查獲得了雙親間分布于該區(qū)域的1015個(gè)InDel標(biāo)記位點(diǎn)和3258個(gè)SNP標(biāo)記位點(diǎn)。2、印度南瓜強(qiáng)雌基因精細(xì)定位在第二染色的48 Kb區(qū)域內(nèi)利用獲得的InDel分子標(biāo)記,對(duì)包含177株F_2群體及97株BC_1群體的強(qiáng)雌性狀分離群體進(jìn)行分析,將強(qiáng)雌性狀控制基因定位在印度南瓜第二染色體48Kb的區(qū)域內(nèi),兩側(cè)標(biāo)記為Cma02_05和Cma02_09。3、定位區(qū)域包內(nèi)有29個(gè)編碼基因,Cma3_0000021基因可能為控制印度南瓜強(qiáng)雌性狀的候選基因利用印度南瓜全基因組注釋結(jié)果對(duì)定位區(qū)域內(nèi)的基因進(jìn)行分析,該區(qū)域包含29個(gè)編碼基因,其中基因Cma3_0000021與赤霉素調(diào)控相關(guān),可能為控制強(qiáng)雌性狀的候選基因。該基因序列在強(qiáng)雌與正常植株中存在2個(gè)SNP位點(diǎn),導(dǎo)致蛋白編碼提前終止。4、候選基因Cma3_0000021的表達(dá)譜分析對(duì)候選基因Cma3_0000021進(jìn)行了表達(dá)譜分析,結(jié)果表明,該基因在植株雌花中表達(dá)豐度最高。在莖葉中也有少量表達(dá),在根中不表達(dá)。5、利用與強(qiáng)雌性狀共分離的分子標(biāo)記Cma02-08進(jìn)行標(biāo)記輔助選擇育種利用與強(qiáng)雌性狀共分離的分子標(biāo)記Cma02-08進(jìn)行印度南瓜強(qiáng)雌性狀的苗期篩查,輔助選育強(qiáng)雌自交系。根據(jù)對(duì)近1500株材料的篩查種植結(jié)果分析,篩選植株田間強(qiáng)雌性狀表型一致。這種鑒定方法快速、可靠,大大節(jié)約了育種工作量。
【學(xué)位單位】：河北工程大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S642.1;Q943.2
【部分圖文】：

Nanodrop峰圖

圖 2-1 DNA 質(zhì)量檢測(cè)瓊脂糖凝膠電泳左， TAKARA λ-Hind III digest 電泳條帶分布示意圖；右，重測(cè)序樣品 DNAFigure 2-1 DNA quality test using agarose gel electrophoresis， Electrophoresis strip distribution after TAKARA λ-Hind III digesting；right, DNA usedfor genome re-sequencing

解情況 污染情況OD260/280O度降解無(wú)明顯雜質(zhì)污染2.12 度降解無(wú)明顯雜質(zhì)污染2.13 DNA 提取質(zhì)量，結(jié)果如下：定位所需雙親（150和 162-2量，結(jié)果如下：：ul 體積（ul） 質(zhì)100 A100 A
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 范愛(ài)麗;張曼;周建輝;劉文君;黃鳳嬋;高忠奎;;廣西印度南瓜冬閑田栽培技術(shù)[J];北方園藝;2017年02期

2 崔世茂，陳源閩，薛河儒，趙清巖，王若青;印度南瓜單瓜產(chǎn)籽數(shù)與影響因素分析[J];華北農(nóng)學(xué)報(bào);1996年01期

3 林德佩,華啟衡,房超;印度南瓜及其雜種一代[J];長(zhǎng)江蔬菜;1997年10期

4 丁凱;印度南瓜大得出奇[J];蔬菜;1994年06期

5 貝珠潮，李茂哉，朱紅斌，趙岷陽(yáng);特大型印度南瓜生物學(xué)特性及栽培技術(shù)要點(diǎn)[J];甘肅農(nóng)業(yè)科技;1994年10期

6 崔世茂，陳源閩，薛和如;印度南瓜主要農(nóng)藝性狀與產(chǎn)量的通徑分析[J];內(nèi)蒙古農(nóng)牧學(xué)院學(xué)報(bào);1995年04期

7 ;高產(chǎn)飼料——印度南瓜[J];科技簡(jiǎn)報(bào);1975年23期

8 侯棟;岳宏忠;曲亞英;張東琴;郭蘭香;;短蔓紅皮印度南瓜新品種甘紅栗[J];中國(guó)蔬菜;2010年07期

9 貝珠潮，李茂哉，朱紅斌，趙岷陽(yáng);特大型印度南瓜引種試驗(yàn)[J];甘肅農(nóng)業(yè)科技;1994年08期

10 閆春冬;王云莉;田金麗;劉陽(yáng)萍;徐文龍;屈淑平;;肉用印度南瓜營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的簡(jiǎn)易鑒定方法[J];北方園藝;2018年21期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 Neelam Ara(尼蘭);印度南瓜、中國(guó)南瓜及其種間重組自交系耐熱機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2014年

2 秦錦霞;小麥表皮蠟質(zhì)抑制基因的精細(xì)定位與物理圖譜構(gòu)建[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 王洋坤;陸地棉高強(qiáng)纖維QTL（qFS_(D03)）的精細(xì)定位與候選基因的克隆[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 盧全偉;陸海漸滲系纖維長(zhǎng)度QTL（qFL-12-2）精細(xì)定位與候選基因鑒定[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

5 李威亞;玉米株型關(guān)鍵基因ZmCSLD1分子機(jī)制解析及葉夾角qLA2-1精細(xì)定位[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2019年

6 謝小芳;水稻細(xì)條病抗性QTL qBlsr5a的進(jìn)一步精細(xì)定位及候選基因分析[D];福建農(nóng)林大學(xué);2013年

7 劉立龍;野生稻長(zhǎng)芒新基因Awn8的精細(xì)定位和候選基因分析[D];廣西大學(xué);2018年

8 蘇曉梅;番茄抗灰葉斑病基因Sm的精細(xì)定位與克隆[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

9 朱吉風(fēng);菜豆普通細(xì)菌性疫病抗性基因精細(xì)定位與候選基因分析[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2018年

10 馬洪麗;水稻穗頸伸長(zhǎng)基因EUI1的精細(xì)定位與候選基因的克隆[D];福建農(nóng)林大學(xué);2004年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 孫劍飛;印度南瓜（Cucurbita maxima Duch.）強(qiáng)雌基因精細(xì)定位及候選基因克隆與育種應(yīng)用[D];河北工程大學(xué);2018年

2 鄒冰雪;印度南瓜ACS基因家族的克隆與表達(dá)分析[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

3 陳爍;印度南瓜（Cucurbita maxima）長(zhǎng)短蔓SSR分子標(biāo)記的研究[D];黑龍江大學(xué);2018年

4 楊曉霞;乙烯在印度南瓜（Cucurbita maxima）花發(fā)育中的作用機(jī)制研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 單文琪;印度南瓜雌性性狀的遺傳分析與基因定位的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

6 魯曉曉;印度南瓜離體再生與遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化[D];河南科技學(xué)院;2017年

7 張巖;內(nèi)蒙古地區(qū)籽用南瓜種質(zhì)資源調(diào)查與評(píng)價(jià)研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

8 李海英;南瓜種質(zhì)資源親緣關(guān)系的RAPD分析[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

9 向成鋼;印度南瓜皮色、節(jié)間長(zhǎng)、籽粒大小的遺傳分析及遺傳圖譜構(gòu)建[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

10 劉超;籽用南瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2882092