發(fā)布時間：2020-11-11 21:08

　　 MicroRNAs在正常細胞的自我更新,分化和腫瘤發(fā)生發(fā)展中扮演著十分重要的角色。MircroRNA100(MiR100)在2002年首次被發(fā)現(xiàn),其位于11號染色體的q24.1區(qū)域(內(nèi)含子2號),與let7a-2共轉錄。MiR1OO在許多癌癥中表現(xiàn)出抑制增殖的功能。我們已經(jīng)證明在乳腺癌細胞系和正常的乳腺細胞系中含有具有干細胞特性的一小類細胞,其可以通過Aldefluor分析實驗將更具有Aldehyde dehydrogenase(ALDH)酶活性的細胞分離出。通過對ALDH陽性(干細胞)和陰性乳腺癌細胞中的microRNAs分析發(fā)現(xiàn),MiR1OO可能對干細胞發(fā)揮重要作用。我們發(fā)現(xiàn)MiR100在ALDH陰性細胞中比ALDH陽性細胞中顯著低表達。利用一種四環(huán)素誘導的MiR100慢病毒過表達系統(tǒng),我們發(fā)現(xiàn)過表達MiR100可以在乳腺癌細胞系和小鼠異種移植瘤模型中減少ALDH陽性細胞比例,并且可以抑制腫瘤的生長和轉移。這其中的機制是由于MiR100直接下調(diào)了BMPR2和一系列干細胞相關的調(diào)控基因和染色體重構基因的表達,如SMARCA5,SMARCD1,BAZ2A,FGFR and IGFR。內(nèi)源性抑制MiR1OO可以促進小鼠異種移植模型中腫瘤的發(fā)展。這些結果表明MiR1OO可以調(diào)控乳腺癌中的腫瘤干細胞的自我更新和腫瘤發(fā)展,其在生物學和臨床上都具有十分重要的應用前景。后續(xù)的研究我們發(fā)現(xiàn),N端豆蔻�；窷MT1是MiR1OO的下游靶標之一。豆蔻�；堑鞍追g時和翻譯后的一種修飾,其在細胞內(nèi)信號轉導和腫瘤生成中扮演著十分重要的角色。近年來的證據(jù)表明,針對豆蔻�；闹委熓且环N有效清除癌癥的新方法。然而,對其機制的研究尚不清楚。我們在研究中發(fā)現(xiàn),shRNA介導的NMT1敲低在體外和體內(nèi)模型中抑制乳腺腫瘤的起始,增殖和發(fā)展。我們發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)活性氧可以負調(diào)NMT1的表達,反過來NMT1的敲低會進一步增強細胞內(nèi)氧化應激反應,從而形成一種正反饋調(diào)節(jié)機制。進一步的研究發(fā)現(xiàn),抑制NMT1會導致降解蛋白的聚集和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應,后者可以和線粒體互相作用從而產(chǎn)生更多的活性氧。產(chǎn)生的氧化應激反應和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應繼而可以激活JNK通路,產(chǎn)生自噬等反應抑制了三陰性乳腺腫瘤的發(fā)展。這些研究為靶向NMT1治療乳腺癌提供了理論依據(jù)。
【學位單位】：中國科學技術大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R737.9
【部分圖文】：

２．２．２質(zhì)粒構建和病毒感染??一種高效的可誘導型的慢病毒載體ｐＴＲＩＰＺ用來過表達ＭｉＲｌＯＯ，其示意圖??如圖２．１所示。其中有兩個重要組件使得其為可誘導型的，一個是ＴＲＥ，即為??四環(huán)素響應原件，一個是ｒｔＴＡ３，反式四環(huán)素激活因子，當存在四環(huán)素時其可以??促進反式四環(huán)素誘導因子去結合四環(huán)素響應原件，從而起始ＭｉＲｌＯＯ的表達。??其中又有紅色熒光蛋白指示ＭｉＲｌＯＯ的表達有無。??ＴＲＥ?ＵＢＣ??ｍｉｒ１０°??髮?ｐＴＲＩＰＺ?Ｉ??＾＿ｍｍｍｍ匪！；謂￣）??圖２．１?ｐＴＲＩＰＺ質(zhì)粒示意圖??１０??

進行表達譜的測序分析。我們發(fā)現(xiàn)了一系列的ＭｉＲＮＡｓ在這兩類細胞群??中出現(xiàn)明顯差異表達，其中ＭｉＲｌＯＯ的表達量在ＡＬＤＨ陰性細胞群中明顯要高??于ＡＬＤＨ陽性細胞群（圖３．１．Ａ）。為了驗證測序結果，我們對ＳＵＭ１５９中的??ＡＬＤＨ陽性和陰性群體進行了?Ｑ－ＰＣＲ驗證，實驗結果表明ＳＵＭ１５９中的ＡＬＤＨ??陰性細胞群中ＭｉＲｌＯＯ的表達量更高（圖３．１．Ｂ）。此結果表明，在ＳＵＭ１５９細??胞系中，ＭｉＲｌＯＯ的表達在乳腺腫瘤干細胞中是顯著下調(diào)的。??Ａ?Ｂ??繼?ｍｉｒ－２００ｃ?０?７?＊?＇?＊?＇??ｉ?？｜Ｅ：??美各遍祕丨一ｔ７ａ?！�。骸浚�?■??泛?０?Ｈｉｎｒ—?，??ｔ??＾?’?ＳＵＭ１５９ＡＬＤＨ＋?ＳＵＭ１６９ＡＬＤＨ．??圖３．１?ＭｉＲｌＯＯ在ＳＵＭ１５９中的ＡＬＤＨ＋乳腺腫瘤干細胞中低表達??Ａ．氣泡圖呈現(xiàn)出不同種ＭｉＲＮＡｓ在ＳＵＭ１５９ＡＬＤＨ＋與ＡＬＤＨ－中的表達豐富與差異的??顯著性；Ｂ．通過ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測ＭｉＲｌＯＯ在ＳＵＭ１５９?ＡＬＤＨ＋與ＡＬＤＨ－細胞群中的表達??量。Ｅｒｒｏｒ?ｂａｒｓ＝?Ｍｅａｎ土?ＳＴＤＥＶ．?＊，戶?＜?０．０５。??３．２?ＭｉＲｌＯＯ在乳腺癌ＡＬＤＨ陽性干細胞群中低表達??接下來，我們想驗證上述結果是否對不同分子類別的乳腺癌具有普適性。??我們按照同樣的分離方法，分離了管腔型乳腺癌細胞系ＭＣＦ７，基底型乳腺癌??細胞系ＳＵＭ１４９以及三種人乳腺癌移植瘤模型ＵＭ２

??ＵＭ２來自于基底型乳腺癌）。如圖３．２所示，這些細胞中分離得到的結果與??ＳＵＭ１５９中相一致，即ＭｉＲｌＯＯ在具有腫瘤干細胞特性的ＡＬＤＨ陽性乳腺癌細??胞群體中表達量低。??０．１５?，??〇?？￣￣１￣？?０?０８?１??ｉｒ?ｉ〇．１?－?ｍＬｈ?？?？?０．０６?．??Ｉ｜〇＊＇?Ｉ?ｉｆ?０?０４?■??復?〇ｌ．■■■■■＿ｍｍ?，??ＭＣＦ７ＡＬＯＨ＋?ＭＣＦ７?ＡＬＤＨ－?ＳＵＭ?１４９?ＡＬＯＨ－ｆ?ＳＵＭ１４９?ＡＬＤＨ－??＿?°００２６?■ｍｒｆ－ｌＯＯ?ｆ?〇?〇３?？ｍｉｒ－１００?－?＿?０?０４?＊ｍ＞ｆ?＾?？??Ｉｆ０００２?＇＾ｉ｜＃ｗ６＇?＇ｉ｜°〇０３Ｍ６：??§?§０．００１５?？?■■?ｇ?§?０．０２?－?９Ｈ?８?§?０．０２Ｓ?＇??１§?■?ｉ?？?０．０１６．?■?｜｜?０．０２?Ｔ??ｆＬｉｌＪＬ??Ｌ＾ｉｌｉ?Ｉ??ＵＭ２ＡＬＤＨ＋?ＵＭ２?ＡＬＤＨ－?ＭＣＩ?ＡＬＤＨ＋?ＭＣ１?ＡＬＤＨ－?ＵＭ１?ＡＬＤＨ＋?ＵＭ１?ＡＬＯＨ－??圖３．２?ＭｉＲｌＯＯ在不同種乳腺腫瘤干細胞中低表達??ｑＲＴ－ＰＣＲ檢測ＭｉＲｌＯＯ在不同類型的乳腺癌細胞系和移植瘤模型中ＡＬＤＨ＋與ＡＬＤＨ－??細胞群中的表達量。Ｅｒｒｏｒｂａｒｓ＝?Ｍｅａｎ土ＳＴＤＥＶ．?＊，尸?＜?０．０５。??３．３?ＭｉＲｌＯＯ表達量與細胞系分型無明顯關系??基于上述的結果，我們先猜測ＭｉＲｌＯＯ表達量可能與乳腺癌細胞系的分子??類型或者細胞中所含有的ＡＬＤＨ陽性細胞群的比例有關。如圖３．３．Ａ所示，??Ａ?Ｂ??１０??０６?ｌ?？?９??．．．」
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