表觀遺傳是指在基因組序列保持不變的情況下,因?yàn)樾揎椬兓鴮?dǎo)致的可遺傳性狀變化的過程。它包括組蛋白修飾、DNA修飾、RNA修飾等。DNA的甲基化與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。DNMT是一種DNA甲基轉(zhuǎn)移酶,可以將把C原子加到CpG位點(diǎn)的C原子上形成5甲基胞嘧啶,它通過招募抑制因子或阻斷與轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合來抑制腫瘤抑制基因的表達(dá)。TET蛋白是一種羥甲基化蛋白,可以將5-甲基胞嘧啶(5mc)轉(zhuǎn)化為5-羥甲基胞嘧啶(5hmc),然后還原成胞嘧啶,以達(dá)成DNA去甲基化的效果。肺癌是惡性程度最高的癌癥之一。死亡率排在惡性腫瘤的前三位。研究課題在非小細(xì)胞肺癌A549的基礎(chǔ)上,敲低DNMT1與TET1,通過生長曲線、侵襲實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)等功能性實(shí)驗(yàn)觀察其對(duì)細(xì)胞的影響,通過PCR、Western等試驗(yàn)觀察其相互作用。初步結(jié)果為DNMT1促進(jìn)肺癌細(xì)胞的生長,敲低DNMT1以后細(xì)胞的侵襲效率降低明顯,TET1抑制肺癌細(xì)胞的生長,DNMT1促進(jìn)TET1的表達(dá),而TET1抑制DNMT1的表達(dá)。敲低DNMT1以后,DOTBLOT實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了全基因組的甲基化程度降低,而敲低TET1以后全基因組甲基化的程度增加,雙敲低DNMT1和TET1后,結(jié)果在兩個(gè)單敲低之間。敲低DNMT1以后,一些高甲基化的基因并沒有發(fā)生甲基化的缺失。實(shí)驗(yàn)研究證明,DNMT1/3A/3B與TET1之間存在相互調(diào)控關(guān)系,而甲基化是肺癌的致病因素之一,研究甲基化及其敲低對(duì)細(xì)胞的影響,可以為肺癌的治療提供新的思路。但具體由什么基因的甲基化異常導(dǎo)致肺癌的發(fā)生,還需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
【學(xué)位單位】：北京工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：Q34
【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮寫詞
第1章 緒論
    1.1 表觀遺傳
    1.2 TET蛋白
    1.3 DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶
        1.3.1 甲基化轉(zhuǎn)移酶的去甲基化及去羥甲基化作用
    1.4 DNA甲基化與肺癌
    1.5 組蛋白修飾與肺癌
    1.6 非編碼RNA與肺癌
        1.6.1 miRNA與肺癌的診斷
        1.6.2 lncRNA與肺癌
    1.7 SOCS甲基化與肺癌
    1.8 研究內(nèi)容與意義
第2章 DNMT1對(duì)肺癌細(xì)胞的影響
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 儀器設(shè)備
        2.2.2 試劑
        2.2.3 引物的設(shè)計(jì)合成
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3.2 質(zhì)粒的熱激轉(zhuǎn)化
        2.3.3 質(zhì)粒的提取
        2.3.4 DNA回收
        2.3.5 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.6 MTT法細(xì)胞毒檢測(cè)
        2.3.7 RNA提取及RTPCR實(shí)驗(yàn)
        2.3.8 蛋白質(zhì)提取及Western檢測(cè)
        2.3.9 轉(zhuǎn)染
        2.3.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 DNMT在肺癌中有較高的臨床表達(dá)
        2.4.2 DNMT蛋白之間存在互作
        2.4.3 DNMT1促進(jìn)肺癌細(xì)胞中TET1的表達(dá)
        2.4.4 DNMT1與肺癌的不良預(yù)后有關(guān)
        2.4.5 敲低DNMT1基因抑制肺癌細(xì)胞的增殖與遷移
        2.4.6 敲低DNMT1對(duì)一些高甲基化基因的甲基化沒有影響
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第3章 TET1對(duì)肺癌細(xì)胞的影響
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 RNA提取及RTPCR實(shí)驗(yàn)
        3.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 TET1在肺癌中的臨床表達(dá)
        3.3.2 TET與DNMT之間存在相互作用
        3.3.3 TET1抑制肺癌細(xì)胞DNMT1的表達(dá)
        3.3.4 TET1與肺癌的不良預(yù)后有關(guān)
        3.3.5 TET1抑制肺癌細(xì)胞的增殖
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝

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本文編號(hào)：2877669