目的:探究骨碎補(bǔ)總黃酮(RDTF)對(duì)骨質(zhì)疏松(OP)大鼠的療效,并通過ELISA、RT-PCR、免疫組化等方法探究RDTF對(duì)大鼠肝臟鐵調(diào)素(HEPC)基因表達(dá)的影響。方法:選取60只成年SD雌性大鼠,隨機(jī)分為20只假手術(shù)(SHAM)組,40只去卵巢(OVX)組,采用經(jīng)典的去勢(shì)法切除其雙側(cè)卵巢,制備OP模型,SHAM組切取同體積脂肪組織。常規(guī)飼養(yǎng)3個(gè)月后隨機(jī)抽取SHAM組10只、OVX組10只大鼠處死。檢測(cè)造模成功后,再次將OP模型大鼠隨機(jī)分為3組,分別為去勢(shì)空白組(OVX+B)、中藥低劑量組(OVX+L)、中藥高劑量組(OVX+H),每組10只。兩個(gè)中藥組分別予以RDTF(低劑量組100mg/kg/d,高劑量組200mg/kg/d)灌服,對(duì)照及模型組灌服同體積的雙蒸水。4周后取血,肝臟和右側(cè)股骨,進(jìn)行血清學(xué)、基因?qū)W、骨組織形態(tài)及病理學(xué)等方面的檢測(cè):①檢測(cè)骨密度(BMD);②檢測(cè)血清鈣、鐵的含量;③ELISA測(cè)定血清HEPC的含量;④RT-PCR測(cè)定肝臟HEPC mRNA的表達(dá);⑤光鏡觀察經(jīng)HE染色的股骨中段切片;⑥免疫組化檢測(cè)BMP-6在肝臟的表達(dá)情況。結(jié)果:①檢測(cè) BMD 值:SHAM 組OVX+H 組OVX+L 組OVX+B 組。SHAM 組與 OVX+H 組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);其余各組兩兩比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。②三組血清鈣水平低于假手術(shù)組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而這三組組間比較,差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);血清鐵情況完全相同。③血清HEPC含量:SHAM組、OVX+L組高于OVX+B組、OVX+H組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);SHAM組與OVX+L組差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);OVX+B組與OVX+H組差異也不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。④肝臟HEPC mRNA相對(duì)定量結(jié)果:OVX+H組SHAM組OVX+L組OVX+B組。SHAM組、OVX+L組、OVX+H組與OVX+B組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);OVX+L組、OVX+H組與SHAM組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);OVX+L組與OVX+H組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。⑤光鏡觀察HE切片:骨板致密程度:SHAM組OVX+H組OVX+L組OVX+B組;骨凹陷大小:OVX+B組OVX+L組OVX+H組＞SHAM組;骨細(xì)胞數(shù)目:SHAM組OVX+H組OVX+L組OVX+B組;皮質(zhì)表面平整度:SHAM組OVX+H組OVX+L組OVX+B組。⑥肝臟BMP-6免疫組化結(jié)果:BMP-6陽性表達(dá)率:OVX+H組SHAM組OVX+L組OVX+B組。SHAM組與OVX+H組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);其余各組兩兩比較,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:①RDTF對(duì)大鼠OP有改善作用,且量效關(guān)系成正比。②OVX能夠降低血清鈣、鐵的含量,但RDTF并不能影響血清鈣、鐵的水平。③RDTF對(duì)大鼠血清HEPC含量有影響,在低濃度時(shí)促進(jìn)血清HEPC的表達(dá),高濃度時(shí)效果效果不顯。④OVX能夠抑制肝臟HEPC的表達(dá),而RDTF能上調(diào)肝臟HEPC的表達(dá),且量效關(guān)系成正比。⑤RDTF能夠上調(diào)肝臟BMP-6的表達(dá),且量效關(guān)系成正比。
【學(xué)位單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略詞表
前言
第一部分 理論研究
    1. 祖國醫(yī)學(xué)對(duì)骨質(zhì)疏松的研究
        1.1 骨質(zhì)疏松的中醫(yī)病名
        1.2 骨質(zhì)疏松的病因病機(jī)
        1.3 中醫(yī)治療骨質(zhì)疏松的研究進(jìn)展
    2. 傳統(tǒng)中藥骨碎補(bǔ)的研究進(jìn)展
        2.1 骨碎補(bǔ)的現(xiàn)代藥理學(xué)研究
        2.2 骨碎補(bǔ)總黃酮改善骨質(zhì)疏松作用機(jī)制研究
    3. 鐵調(diào)素的研究進(jìn)展
        3.1 鐵調(diào)素的生成和調(diào)節(jié)機(jī)制
        3.2 鐵調(diào)素改善骨質(zhì)疏松的相關(guān)機(jī)制
第二部分 實(shí)驗(yàn)研究
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 實(shí)驗(yàn)藥品及試劑
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型的建立
        2.2 分組及給藥
        2.3 實(shí)驗(yàn)樣本的采集
        2.4 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)及檢測(cè)途徑
        2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析
        3.1 股骨骨密度值分析
        3.2 血清鈣、鐵含量的分析
        3.3 血清鐵調(diào)素含量的分析
        3.4 肝臟鐵調(diào)素mRNA表達(dá)結(jié)果的分析
        3.5 骨組織HE染色切片的觀察
        3.6 肝臟中BMP-6表達(dá)結(jié)果的分析
第三部分 討論
    1. 不同造模方法的優(yōu)劣比較
    2. 骨碎補(bǔ)總黃酮調(diào)控鐵調(diào)素機(jī)制探討
    3. 藥物治療骨質(zhì)疏松回顧與展望
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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