類(lèi)黃酮化合物是茶葉中最主要的多酚物質(zhì),它在茶葉苦澀味的形成中起到了關(guān)鍵性的作用,對(duì)決定茶葉品質(zhì)及其健康功效具有重要作用。植物多酚化合物的生物合成主要受到MYB-bHLH-WD40(MBW)三元復(fù)合體的調(diào)控。茶樹(shù)是高多酚積累植物,然而,茶樹(shù)中的CsWD40蛋白在茶樹(shù)多酚合成積累中的作用尚不清楚。本文從茶樹(shù)中克隆了一條與擬南芥TTG1同源的CsWD40基因,該條CsWD40基因的ORF包含1029個(gè)堿基,可以編碼342個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì),預(yù)測(cè)分子量38.348kD。進(jìn)化分析和氨基酸序列比對(duì)分析顯示,茶樹(shù)CsWD40與蘋(píng)果MdTTG1近源關(guān)系最為相近,二者氨基酸一致性達(dá)到了79.62%。酵母雙雜技術(shù)表明CsWD40與bHLH轉(zhuǎn)錄因子(CsGL3,CsTT8)和MYB轉(zhuǎn)錄因子(CsAN2,CsMYB5e)之間體外互作。轉(zhuǎn)基因擬南芥ttg1::CsWD40葉表面恢復(fù)了毛狀體性狀,收獲的種子的種皮色澤較突變體ttg1加深,較野生型種皮顏色淺。CsWD40轉(zhuǎn)基因煙草花色加深,花青素含量顯著上升。但是DMACA顯色表明,CsWD40轉(zhuǎn)基因煙草花瓣中原花青素含量變化不大。qRT-PCR分析顯示CsWD40轉(zhuǎn)基因煙草花瓣中的類(lèi)黃酮結(jié)構(gòu)基因NtCHS,NtF3’H,NtFLS,NtDFR,NtANS以及花青素代謝相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子NtAN2和NtAN1b都顯著上調(diào)。在CsWD40和CsMYB5e共表達(dá)轉(zhuǎn)基因煙草花瓣中花青素和原花青素都顯著高于對(duì)照組�；虮磉_(dá)分析顯示類(lèi)黃酮下游基因NtLAR,NtANS,NtANR都顯著上調(diào),其中,NtANS和NtANR上調(diào)分別超過(guò)約4倍和5倍。在茶樹(shù)體內(nèi)CsWD40的表達(dá)情況體現(xiàn)出明顯的組織特異性,主要特點(diǎn)是在葉和根中表達(dá)量相對(duì)較高,這與茶樹(shù)類(lèi)黃酮的積累特點(diǎn)具有一定的相關(guān)性。在茶樹(shù)經(jīng)受不同非生物脅迫過(guò)程中,CsWD40在脫落酸和蔗糖處理下的表達(dá)水平相比對(duì)照組分別提高了將近2倍和6倍。相反,在氯化鈉,甘露醇和水楊酸處理的結(jié)果中,CsWD40表達(dá)水平與對(duì)照組相比較較低;不同溫度處理過(guò)程中,CsWD40表達(dá)受溫度調(diào)控影響不顯著。研究結(jié)果表明茶樹(shù)CsWD40通過(guò)形成的MBW三元復(fù)合體調(diào)節(jié)茶樹(shù)花青素和原花青素的生物合成。此外,CsWD40不僅參與茶樹(shù)類(lèi)黃酮化合物的代謝,還參與茶樹(shù)響應(yīng)非生物脅迫應(yīng)答。
【學(xué)位單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：S571.1
【部分圖文】：

4.結(jié)果與分析克隆和序列分析選與克隆與了植物類(lèi)黃酮的合成調(diào)控[31]。本文在茶 同 源 基 因 ， 命 名 為 CsWD40 。 結(jié)db.com/tea_tree/)和轉(zhuǎn)錄組 CsWD40 序列信片的 cDNA 為模板，進(jìn)行高保真 PCR，最序列。結(jié)果如圖 4.1 所顯示。編碼框長(zhǎng)度為預(yù)測(cè)分子量 38.348 KD。

19圖 4.3 CsWD40 與其它物種 WD40 的氨基酸序列比對(duì)Fig 4.3 Multiple Sequences alignment of CsWD40 with others WD40s from plant speciesote：The GenBank accession numbers are as follows: PhAN11 from Petunia hybrida (AAC18914), GhTTG1 from Gossypium hirsutum (AAK19614), AtTTG1 fArabidopsis thaliana (Q9XGN1), InWD from Ipomoea nil (ABW69689), PfWD from Perilla frutescens (AB059642), VvWDRl from Vitis vinifera(ABF66626),VvWDR2 from Vitis vinifera (ABF66625), MtWD from Medicago truncatula (ABW08112), ZmPACl from Zea mays (AY115485), MdTTG1 from Malus domestica(GU173813), PpTTG1 from Prunus persica (ACQ65867), MiTTG1 from Matthiola incana (CAE53274), PgWD40 from Punica granatum (HQ199314).

圖 4.2 茶樹(shù)中 CsWD40 與其他物種的 WD 進(jìn)化樹(shù)分析Fig 4.2 Phylogenetic tree of CsWD40s from tea plants and the other WD from other spec
【參考文獻(xiàn)】

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1 Xin NIE;Yang ZHAO;Li ZHANG;Yi TANG;Juan WANG;Zhiping ZHAO;;Mechanisms of MYB-bHLH-WD40 Complex in the Regulation of Anthocyanin Biosynthesis in Plants[J];Agricultural Biotechnology;2015年03期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 李潔;棉花GhWD40基因的克隆及功能驗(yàn)證[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2868049