異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)是亞洲最受歡迎的食用魚類,鯉皰疹病毒Ⅱ型(cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)是唯一已知的鯽魚病毒病原體。I型干擾素基因在病毒核酸被宿主細(xì)胞識別時(shí)誘導(dǎo),被公認(rèn)為在提供針對各種生物體中的病毒的局部或全身保護(hù)中的發(fā)揮重要作用。在轉(zhuǎn)錄組分析中發(fā)現(xiàn)部分異育銀鯽基因響應(yīng)CyHV-2感染的差異表達(dá),部分干擾素轉(zhuǎn)錄物在被感染的異育銀鯽腎中顯著上調(diào),該干擾素在本實(shí)驗(yàn)中被命名為異育銀鯽IFNc(ccIFNc)。IκBα(Inhibitor of NF-κB),Rab21(Rab GTPase21)在先天免疫中起重要作用,它們被抑制消減雜交(Suppression Subtractive Hybridization,SSH)證實(shí)為感染鯉皰疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)的異育銀鯽中差異表達(dá)的免疫相關(guān)基因。通過RACE技術(shù)進(jìn)一步確定了異育銀鯽IFNc,IκBα,Rab21的完整ORF,IFNc的全長cDNA包含一個(gè)549 bp的開放閱讀框(ORF),編碼182個(gè)氨基酸的蛋白(GenBank登錄號BankIt2033924),異育銀鯽IκBα的全長cDNA包含一個(gè)933bp的開放閱讀框(ORF),編碼310個(gè)氨基酸的蛋白(GenBank登錄號KJ784543),Rab21的全長cDNA包含一個(gè)648 bp的開放閱讀框(ORF),編碼215個(gè)氨基酸的蛋白(GenBank登錄號KJ784545)。系統(tǒng)發(fā)育分析表明,ccIFNc與來自其他水生生物的已知I型IFN基因聚類,IκBα,Rab21顯示出與其他硬骨魚中的轉(zhuǎn)錄物高度同源。定量RT-PCR分析表明,健康異育銀鯽中,IκBα,Rab21在所檢測的所有鯽魚組織中均以低水平表達(dá),這些基因在CyHV-2感染后6-24小時(shí)在腎中顯著上調(diào)(P0.01),數(shù)據(jù)表明IκBa,Rab21可能有潛在的抗病毒功能,IκBα和Rab21可作為宿主對CyHV-2感染免疫反應(yīng)的免疫標(biāo)記。健康異育銀鯽中,ccIFNc在脾,鰓,腎和肌肉中具有相對較高的表達(dá)水平。在CyHV-2的攻擊下,ccIFNc的轉(zhuǎn)錄水平在所有組織中都有明顯上調(diào),尤其是在脾和鰓中,分別增加了436和158倍。肌肉(i.m.)注射編碼ccIFNc的真核表達(dá)質(zhì)粒(pEGFP-cIFNc)觀察到ccIFNc表達(dá)明顯增加高于對照細(xì)胞15倍,CyHV-2的復(fù)制效率顯著低于對照組,過表達(dá)IFNc的異育銀鯽總體死亡率降低了30%,死亡時(shí)間有所延遲,本文研究表明,ccIFNc屬于I型干擾素家族,在對抗鯽魚CyHV-2感染方面具有潛在的作用。
【學(xué)位單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S943
【部分圖文】：

圖 2-1 基因全長 cDNA 擴(kuò)增線路圖Fig2-1具體操作如下：總 RNA 提取后，按照試劑盒的說明合成 cDNA 第一條鏈(1) 在 0.5ml 微型離心管中加入下列試劑：(2) 在分別取兩個(gè)離心管加入如下試劑

圖 2-2 Rab21 的全長核苷酸序列Fig. 2-2 Full-length nucleotide sequence of Rab21DNAMAN 軟件來自不同生物體的 Rab21 氨基酸序列進(jìn)行多。Rab21 通過 NJ 方法得到的所有可用的動物序列的進(jìn)化樹 MEGA5 程序進(jìn)行。Rab21 的進(jìn)化樹分析表明其有兩個(gè)集 。異育銀鯽的 Rab21 屬于集群 I, 包括背天使（Pundamilia（Neolamprologus brichardi），斑馬宮麗魚（Maylandia z（Haplochromis burtoni）。異育銀鯽的 Rab21 和斑馬魚很

17圖 2-3 Rab21 的多序列比對(A)，3D 蛋白結(jié)構(gòu)(B)和系統(tǒng)發(fā)育樹分析(C)Fig.2-3 multiple sequence alignments(A) ,3D protein structureand (B)phylogenetic tree analysis ofccIFNc(C).2.2.2 IκBα 的全長及序列分析特定的免疫相關(guān)基因的引物設(shè)計(jì)和通過 RACE-PCR 獲得 5’和 3’cDNA 全長，該基因(GenBank accession no.244 KJ784543)全長 1,388 bp.由一個(gè) 40bp 的 5’非編碼區(qū)，933bp 的開放閱讀框，和一個(gè)包含 polyA 的 413bp 的 3’非編碼區(qū)，IκBα 開放閱讀框編碼多肽含有 310 個(gè)氨基酸(aa)。高度保守的特征域被確定,IκBα 基因具有對 NF-kb 信號通路多種抑制功能，包括利用封閉核酸的遷移，DNA 的結(jié)合以及利用蛋白酶 A 磷酸化 NF-kb 蛋白。鯽魚 IκBα 基因分子水平的
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫安盈;池塘(主)混養(yǎng)異育銀鯽高產(chǎn)高效技術(shù)[J];漁業(yè)現(xiàn)代化;2001年02期

2 陳志平;異育銀鯽親本流產(chǎn)之原因及對策[J];漁業(yè)致富指南;2001年07期

3 姜祖蓓;異育銀鯽繁育中一些問題之管見[J];水產(chǎn)科技情報(bào);1998年05期

4 宋長太;提高異育銀鯽養(yǎng)殖效益的途徑[J];水產(chǎn)養(yǎng)殖;1998年06期

5 倪嘯,宋國光,姚慧棣;異育銀鯽半自行受精和人工授精繁殖的研究[J];水產(chǎn)科學(xué);1988年02期

6 陶乃紓,戚少燕,趙從鈞;以一齡異育銀鯽放養(yǎng)為主的池養(yǎng)試驗(yàn)[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);1988年02期

7 唐軍清;;異育銀鯽養(yǎng)殖推廣技術(shù)總結(jié)[J];湖南水產(chǎn);1988年06期

8 陳國偉;;提高異育銀鯽發(fā)塘成活率的試驗(yàn)[J];水產(chǎn)科技情報(bào);1988年05期

9 侯亞義,袁傳宓;異育銀鯽的卵細(xì)胞發(fā)生[J];南京師大學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1989年01期

10 唐文聯(lián);異育銀鯽的人工繁殖技術(shù)[J];中國水產(chǎn);1989年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 吳霆;CyHV-2引起的異育銀鯽鰓出血病組織病理及致病機(jī)理研究[D];南京師范大學(xué);2018年

2 趙紅月;異育銀鯽促攝食物質(zhì)研究[D];中國科學(xué)院研究生院（水生生物研究所）;2007年

3 阮記明;基于γ-氨基丁酸A型受體的魚類受漁藥影響的研究[D];上海海洋大學(xué);2014年

4 邵仙萍;堿式氯化銅對異育銀鯽和團(tuán)頭魴生長、組織銅水平、抗氧化活性及腸道菌群的影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

5 徐維娜;敵百蟲對異育銀鯽抗氧化應(yīng)激系統(tǒng)的影響及抗壞血酸對魚體的保護(hù)作用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

6 盧春霞;復(fù)方植物提取物對嗜水氣單胞菌抑菌作用的研究[D];江南大學(xué);2011年

7 劉文斌;餅粕蛋白酶解產(chǎn)物對異育銀鯽生長發(fā)育影響及其生物效價(jià)分析的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 夏思瑤;異育銀鯽免疫基因的克隆及表達(dá)分析和重組IFNc蛋白抗Ⅱ型鯉皰疹病毒的免疫保護(hù)研究[D];上海海洋大學(xué);2018年

2 劉曉娟;運(yùn)用生物能量學(xué)模型預(yù)測異育銀鯽和草魚生長、飼料需求和廢物排放[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

3 羅其剛;黃芩、葛根、板藍(lán)根及其復(fù)合物對異育銀鯽生長、氧化豆油損傷修復(fù)、CyHV-2免疫保護(hù)作用的研究[D];蘇州大學(xué);2017年

4 李雙;異育銀鯽鰓出血病檢測方法的建立和生化指標(biāo)分析[D];南京師范大學(xué);2018年

5 程俊茗;異育銀鯽遲緩愛德華氏菌病的研究[D];上海海洋大學(xué);2017年

6 張曉瑩;四種水質(zhì)因子脅迫下異育銀鯽呼吸代謝及血液生理響應(yīng)[D];上海海洋大學(xué);2017年

7 林秀秀;患鯉皰疹Ⅱ型病毒病異育銀鯽（Carassius auratus gibelio）組織和血液病理的研究[D];蘇州大學(xué);2016年

8 張穎;異育銀鯽可量性狀相關(guān)性以及MSTN基因的多態(tài)性與生長性狀的關(guān)聯(lián)分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

9 劉志偉;GDF9與BMP15在異育銀鯽卵母細(xì)胞發(fā)育過程中的作用初探[D];上海海洋大學(xué);2012年

10 童苗苗;四倍體異育銀鯽額外染色體組來源的鑒定[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

本文編號：2862297