天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

當(dāng)前位置:主頁 > 科技論文 > 基因論文 >

凡納濱對蝦NADPH(NOX)基因的克隆及功能分析

發(fā)布時間:2020-10-23 01:38
   凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)是海水對蝦養(yǎng)殖中的三大經(jīng)濟產(chǎn)品之一,但是對蝦病害和惡劣的天氣,是養(yǎng)殖戶無法避免的難題,給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了重大的經(jīng)濟損失。對蝦病害是養(yǎng)殖業(yè)的最主要的威脅。還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸是細胞抗氧化防御系統(tǒng)中的重要組成之一,在細胞防御活性氧損傷方面發(fā)揮著重要作用。NOX基因既可以指NADPH氧化酶,也可以指非吞噬細胞氧化酶。可通過抑制NOX基因來調(diào)節(jié)活性氧產(chǎn)生,使機體處于健康水平。因此,加強對對蝦的非特異性免疫系統(tǒng)的研究是解決問題的關(guān)鍵,以預(yù)防為主,治療為輔來防治病害。本文用凡納濱對蝦作為該研究的實驗材料,進行NOX基因的相關(guān)研究。利用兼并引物、同源性克隆的方法及RACE技術(shù),克隆獲得凡納濱對蝦NOX基因的c DNA全長。使用q PCR的方法檢測NOX基因在凡納濱對蝦中組織分布情況。用針戳凡納濱對蝦腹部血竇為外界刺激,注射PBS為陽性對照,注射ds RNA-RFP為陰性對照,實驗組注射ds RNA-NOX,分別在0h、3h、6h、12h、24h、48h時間點取肌肉,通過q PCR檢測NOX的變化;取處理后活蝦蝦血加入探針,使用酶標儀檢測ROS的變化。結(jié)果顯示,凡納濱對蝦NOX基因全長3792 bp,包含3006 bp的開放閱讀框,其中5’非編碼區(qū)為454 bp,3’非編碼區(qū)為332 bp。NOX基因編碼了1001個氨基酸,預(yù)測其分子量為11.51374 k Da,理論等電點為8.63。功能結(jié)構(gòu)域位置815-990 aa。組織分布結(jié)果表明,NOX基因在眼柄、鰓、肝胰腺、心、胃、肌肉、腸、血、內(nèi)表皮中均有分布,主要分布在肌肉、內(nèi)表皮、眼柄、肝胰腺和血淋巴中,胃、心、鰓、腸有少量表達。經(jīng)過外傷刺激后NOX基因產(chǎn)生了應(yīng)答,采用RNAi技術(shù)抑制NOX基因的表達。結(jié)果表明,當(dāng)NOX基因的轉(zhuǎn)錄表達受到抑制時,對蝦蝦血的ROS產(chǎn)量也受到了抑制,這說明NOX基因參與凡納濱對蝦的先天免疫防御,NOX基因表達量和活性氧的產(chǎn)量成正比例關(guān)系。
【學(xué)位單位】:廣東海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位年份】:2018
【中圖分類】:S917.4
【部分圖文】:

肌肉組織,電泳分析,碩士學(xué)位論文,模版


東海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文 3’RACE 模版NA,操作參照 2.1.2.1。使5,OD260:OD230 為 2.01瓊脂糖電泳檢測,總 RNA 的量較好(圖 2-1)適合做 RA2

電泳分析,條帶,模版,管底


verse Transcriptase (100 U) tal Volume aster Mix 8.0 μl 分 別 加 入 5中000rpm 離心 10 秒,使液體到管底0℃ 10min。-EDTABuffer 稀釋 RACE 模版’端模版,放于-20℃?zhèn)溆谩(NOX)5’端克隆 5’RACE 模板,和引物(R5、R 后獲得目的條帶,約為 300bp 后,送公司測序,通過 NCBI 和瓊脂糖電泳檢測如下圖(2-2) bp

電泳分析,條帶,測序,引物


TM℃ 3072℃ 3 m72℃ 10 m4 ℃ 保0 次,退火溫度 TM 值根據(jù)引物泳檢測;、送測序。操作參照 2.1.2.6 實PH(NOX)3’端克隆 3’RACE 模板,和引物(F5、F 后獲得目的條帶,約為 700bp(公司測序,通過 NCBI 和基因組糖電泳檢測如下圖(2-3)。
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王夢龍;萬軍;;NADPH氧化酶在常見心血管疾病中的表達與作用[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)報;2015年26期

2 趙雪萌;余祖江;;基因沉默的工具-RNA干擾技術(shù)的研究進展[J];河南醫(yī)學(xué)研究;2015年01期

3 熊正英;;自由基生物學(xué)在運動醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用研究[J];陜西師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2014年06期

4 張巖;田素禮;;RNA干擾技術(shù)在肝細胞癌治療方面的研究現(xiàn)狀及進展[J];中國現(xiàn)代普通外科進展;2014年05期

5 郭慧;冼健安;畢建柱;葉超霞;王安利;;蝦類免疫因子的研究進展[J];飼料工業(yè);2013年22期

6 彭金霞;韋嬪媛;殷勤;蔣小珍;黎銘;陳曉漢;;凡納濱對蝦HSP10基因序列與低溫表達分析[J];南方農(nóng)業(yè)學(xué)報;2013年05期

7 孫文香;蔣爭凡;;病毒感染引發(fā)天然免疫細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究進展[J];中國細胞生物學(xué)學(xué)報;2013年05期

8 崔和;肖樂;;2011~2012我國對蝦產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀及展望[J];中國水產(chǎn);2012年07期

9 陳亞坤;郭冉;夏輝;谷震;;密度脅迫對凡納濱對蝦生長、水質(zhì)因子及免疫力的影響[J];江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年03期

10 崔和;;我國對蝦產(chǎn)業(yè)市場分析、發(fā)展現(xiàn)狀及前景[J];中國水產(chǎn);2011年06期


相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 張立;NADPH氧化酶NOX2/NOX4在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中的作用及機制研究[D];蘇州大學(xué);2017年

2 李雅麗;NADPH氧化酶p40~(phox)亞基在小鼠抗細菌感染中的作用機理研究[D];浙江大學(xué);2016年

3 穆大帥;靈芝基因沉默體系的建立及NADPH氧化酶基因家族功能分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

4 賴曉芳;中國對蝦應(yīng)答WSSV侵染相關(guān)基因的研究[D];中國海洋大學(xué);2010年


相關(guān)碩士學(xué)位論文 前5條

1 翁曉芬;NADPH對腎缺血再灌注損傷的保護作用[D];蘇州大學(xué);2017年

2 王亞靜;水稻OsNOX2基因的表達及其功能分析[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

3 劉榮雕;凡納濱對蝦免疫相關(guān)分子LVAKT與LVFLOT的初步研究[D];國家海洋局第三海洋研究所;2013年

4 劉文靜;斑節(jié)對蝦TLR22及Relish基因的克隆與表達分析[D];上海海洋大學(xué);2012年

5 宋光年;中國明對蝦凋亡基因caspase的克隆、表達及功能的初步分析[D];中國科學(xué)院研究生院(海洋研究所);2010年



本文編號:2852378

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://sikaile.net/kejilunwen/jiyingongcheng/2852378.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶3adc1***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要刪除請E-mail郵箱bigeng88@qq.com