凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)是海水對蝦養(yǎng)殖中的三大經(jīng)濟產(chǎn)品之一,但是對蝦病害和惡劣的天氣,是養(yǎng)殖戶無法避免的難題,給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了重大的經(jīng)濟損失。對蝦病害是養(yǎng)殖業(yè)的最主要的威脅。還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸是細胞抗氧化防御系統(tǒng)中的重要組成之一,在細胞防御活性氧損傷方面發(fā)揮著重要作用。NOX基因既可以指NADPH氧化酶,也可以指非吞噬細胞氧化酶�？赏ㄟ^抑制NOX基因來調節(jié)活性氧產(chǎn)生,使機體處于健康水平。因此,加強對對蝦的非特異性免疫系統(tǒng)的研究是解決問題的關鍵,以預防為主,治療為輔來防治病害。本文用凡納濱對蝦作為該研究的實驗材料,進行NOX基因的相關研究。利用兼并引物、同源性克隆的方法及RACE技術,克隆獲得凡納濱對蝦NOX基因的c DNA全長。使用q PCR的方法檢測NOX基因在凡納濱對蝦中組織分布情況。用針戳凡納濱對蝦腹部血竇為外界刺激,注射PBS為陽性對照,注射ds RNA-RFP為陰性對照,實驗組注射ds RNA-NOX,分別在0h、3h、6h、12h、24h、48h時間點取肌肉,通過q PCR檢測NOX的變化;取處理后活蝦蝦血加入探針,使用酶標儀檢測ROS的變化。結果顯示,凡納濱對蝦NOX基因全長3792 bp,包含3006 bp的開放閱讀框,其中5’非編碼區(qū)為454 bp,3’非編碼區(qū)為332 bp。NOX基因編碼了1001個氨基酸,預測其分子量為11.51374 k Da,理論等電點為8.63。功能結構域位置815-990 aa。組織分布結果表明,NOX基因在眼柄、鰓、肝胰腺、心、胃、肌肉、腸、血、內(nèi)表皮中均有分布,主要分布在肌肉、內(nèi)表皮、眼柄、肝胰腺和血淋巴中,胃、心、鰓、腸有少量表達。經(jīng)過外傷刺激后NOX基因產(chǎn)生了應答,采用RNAi技術抑制NOX基因的表達。結果表明,當NOX基因的轉錄表達受到抑制時,對蝦蝦血的ROS產(chǎn)量也受到了抑制,這說明NOX基因參與凡納濱對蝦的先天免疫防御,NOX基因表達量和活性氧的產(chǎn)量成正比例關系。
【學位單位】：廣東海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S917.4
【部分圖文】：

東海洋大學碩士學位論文 3’RACE 模版NA，操作參照 2.1.2.1。使5，OD260：OD230 為 2.01瓊脂糖電泳檢測，總 RNA 的量較好（圖 2-1）適合做 RA2

verse Transcriptase (100 U) tal Volume aster Mix 8.0 μl 分 別 加 入 5中000rpm 離心 10 秒,使液體到管底0℃ 10min。-EDTABuffer 稀釋 RACE 模版’端模版，放于-20℃?zhèn)溆谩（NOX）5’端克隆 5’RACE 模板，和引物（R5、R 后獲得目的條帶，約為 300bp 后，送公司測序，通過 NCBI 和瓊脂糖電泳檢測如下圖（2-2） bp

TM℃ 3072℃ 3 m72℃ 10 m4 ℃ 保0 次，退火溫度 TM 值根據(jù)引物泳檢測�；⑺蜏y序。操作參照 2.1.2.6 實PH（NOX）3’端克隆 3’RACE 模板，和引物（F5、F 后獲得目的條帶，約為 700bp（公司測序，通過 NCBI 和基因組糖電泳檢測如下圖（2-3）。
【參考文獻】

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本文編號：2852378