目的:1.分析環(huán)境因素與廣州市中小學(xué)生肥胖的關(guān)聯(lián)性;2.探討MC4R基因多態(tài)性與廣州市中小學(xué)生肥胖的關(guān)聯(lián)性;3.評(píng)價(jià)MC4R基因-環(huán)境交互作用對(duì)廣州市中小學(xué)生肥胖的影響。方法:本研究采用頻數(shù)匹配的病例-對(duì)照研究方法,通過(guò)文獻(xiàn)查閱和生物信息學(xué)方法篩選出MC4R的候選基因多態(tài)性,采用Taqman熒光定量PCR技術(shù)進(jìn)行基因型檢測(cè);應(yīng)用多因素logistic回歸模型分析MC4R基因多態(tài)性與廣州市中小學(xué)生肥胖的關(guān)聯(lián)性,并應(yīng)用遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分法進(jìn)一步分析基因多態(tài)性對(duì)中小學(xué)生肥胖的影響;基于logistic回歸模型分別應(yīng)用相乘交互項(xiàng)和Bootstrapping自助重抽樣法分析基因-環(huán)境的相乘、相加交互作用;采用logistic回歸模型分析評(píng)價(jià)基因多態(tài)性與食欲的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果:1.本次研究共納入877例肥胖學(xué)生和950例BMI正常學(xué)生。多因素logistic回歸分析顯示:食欲、進(jìn)餐時(shí)間及上學(xué)日視屏?xí)r間均與中小學(xué)生肥胖發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(P0.05)。食欲好和上學(xué)日視屏?xí)r間長(zhǎng)可能是中小學(xué)生肥胖的危險(xiǎn)因素(OR=2.01,95%CI=1.66-2.43;OR=1.29,95%CI=1.01-1.65);而進(jìn)餐時(shí)間一般/長(zhǎng)能夠降低學(xué)生肥胖發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)(OR=0.68,95%CI=0.50-0.92)。2.MC4R rs12970134和rs17782313多態(tài)性均與中小學(xué)生肥胖發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(P0.05)。多因素logistic回歸模型顯示:與GG基因型相比,攜帶rs12970134 GA+AA基因型的學(xué)生發(fā)生肥胖的風(fēng)險(xiǎn)增加(OR=1.27,95%CI=1.03-1.56);在加性模型下,每增加一個(gè)rs12970134 A等位基因的攜帶,學(xué)生發(fā)生肥胖的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加(OR=1.24,95%CI=1.04-1.48)。與TT基因型相比,攜帶rs17782313TC基因型的學(xué)生發(fā)生肥胖的風(fēng)險(xiǎn)增加(OR=1.41,95%CI=1.14-1.75),而攜帶rs17782313 TC+CC基因型的學(xué)生發(fā)生肥胖風(fēng)險(xiǎn)也會(huì)增加(OR=1.39,95%CI=1.14-1.71);在加性模型下,每增加一個(gè)rs17782313 C等位基因的攜帶,學(xué)生肥胖發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加(OR=1.29,95%CI=1.08-1.54)。本研究未觀察到rs8087522與中小學(xué)生肥胖發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(P0.05)。構(gòu)建rs17782313和rs12970134的單體型,結(jié)果表明CA、TA+CG單體型與中小學(xué)生肥胖風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)(OR=1.25,95%CI=1.04-1.51;OR=1.61,95%CI=1.12-2.31)。構(gòu)建rs17782313和rs12970134的遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分,結(jié)果顯示與未攜帶風(fēng)險(xiǎn)等位基因相比,攜帶≥1個(gè)風(fēng)險(xiǎn)等位基因的學(xué)生發(fā)生肥胖的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加(OR=1.38,95%CI=1.13-1.69)。rs12970134和rs17782313多態(tài)性與食欲均不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)(P0.05)。3.顯性模型下rs12970134、rs17782313與食欲、進(jìn)餐時(shí)間、上學(xué)日視屏?xí)r間之間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的基因-環(huán)境交互作用(P_(mult)0.05,P_(add)0.05)。遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分與食欲、進(jìn)餐時(shí)間之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的基因-環(huán)境交互作用;遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分與上學(xué)日視屏?xí)r間之間存在相乘交互作用(P_(mult)0.05),但不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的相加交互作用。結(jié)論:(1)食欲、進(jìn)餐時(shí)間及上學(xué)日視屏?xí)r間均可能是廣州市中小學(xué)生肥胖發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的影響因素;(2)MC4R基因rs12970134和rs17782313多態(tài)性影響廣州市中小學(xué)生肥胖的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn);(3)以rs12970134和rs17782313構(gòu)建的遺傳風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分與上學(xué)日視屏?xí)r間之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的相乘交互作用。
【學(xué)位單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R723.14
【部分圖文】：

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文Polymerase Chain Reaction, QRT PCR）技術(shù)，其基本原理為（如圖 2.1 所示）：TaqMan 探針是一段寡核苷酸序列，該序列完整時(shí)，分別位于 5’和 3’端的熒光報(bào)告基團(tuán)（Report group）R 和熒光淬滅基團(tuán)（Quencher group）Q 將會(huì)發(fā)生反應(yīng)，淬滅基團(tuán) Q 將會(huì)吸收?qǐng)?bào)告基團(tuán) R 發(fā)出的熒光，從而配備的儀器無(wú)法檢測(cè)識(shí)別出熒光信號(hào)；當(dāng)進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增時(shí)，Taq 酶就會(huì)發(fā)揮其 5’-3’核酸外切酶的活性將探針?biāo)饧羟校藭r(shí)兩個(gè)作用基團(tuán)就會(huì)分開(kāi)，熒光檢測(cè)設(shè)備就可以檢測(cè)到 R 所發(fā)出的熒光信號(hào)，而 R 有兩種類(lèi)型，一類(lèi)是 VIC 報(bào)告基團(tuán)（標(biāo)記突變等位基因），另一類(lèi)是 FAM 基團(tuán)（標(biāo)記野生等位基因）。利用 PCR 產(chǎn)物與累積熒光信號(hào)呈正比的關(guān)系，從而實(shí)現(xiàn)定量分析 PCR 產(chǎn)物的目的。而通過(guò)儀器和相應(yīng)分析軟件識(shí)別的不同熒光信號(hào)來(lái)判斷個(gè)體所屬基因型。

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文（3） 分型實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量控制對(duì) SNPs 進(jìn)行基因分型時(shí)，在每個(gè) 384 孔板中均隨機(jī)設(shè)置 2 個(gè)重復(fù)樣本和 2個(gè)空白對(duì)照，以驗(yàn)證分型結(jié)果的可靠性，重復(fù)樣本分型一致率應(yīng)達(dá)到 100%。對(duì)于分型結(jié)果不明顯的樣本需再次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，若結(jié)果仍不明顯則將其剔除。Taqman探針需特別注意避光、冷藏保存，盡量避免因探針問(wèn)題而影響基因分型的效果。（4） 分型結(jié)果的解讀首先通過(guò) 7900HT 型實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀來(lái)檢測(cè)不同的熒光信號(hào)，然后采用 SDS 2.4 圖像分析軟件來(lái)對(duì)不同的熒光信號(hào)進(jìn)行分析解讀，對(duì)位點(diǎn)等位基因?qū)崿F(xiàn)自動(dòng)分型，可以得到如下的等位基因分型散點(diǎn)圖（圖 2.2）。由圖可以確定研究樣本的基因型（野生純合子、雜合子以及突變純合子）。

圖 3.1 MC4R 基因各位點(diǎn)的連鎖不平衡程度 D'值（左側(cè)）和 r2值（右側(cè)）應(yīng)用 PHASE 2.1 軟件構(gòu)建 MC4R 的 rs17782313 和 rs12970134 兩位點(diǎn)的單體型。共有 TG、TA、CG、CA 四種單體型，它們?cè)谌巳褐械念l率分別為 80.51%、1.51%、2.36%和 15.62%。其中 TG 單體型的人群頻率最高。在后續(xù)單體型與肥胖的關(guān)聯(lián)分析中，由于 TA 和 CG 單體型頻率均低于 3%，因此都劃分為其他類(lèi)進(jìn)行分析。單體型與中小學(xué)生肥胖風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明：以 TG 為參照單體型，CA單體型與中小學(xué)生肥胖風(fēng)險(xiǎn)增加有統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)（OR=1.26，95% CI=1.06-1.51，P=0.011）；而其他類(lèi)（TA+CG）單體型也與中小學(xué)生肥胖發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)增加有統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)（OR=1.65，95% CI=1.17-2.33，P=0.005）。經(jīng)協(xié)變量年級(jí)、性別、食欲、進(jìn)餐時(shí)間及上學(xué)日視屏?xí)r間調(diào)整后，CA、其他類(lèi)（TA+CG）單體型仍與中小學(xué)生肥胖高風(fēng)險(xiǎn)性之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)聯(lián)（OR=1.25，95% CI=1.04-1.51，P=0.019；OR=1.61，95% CI=1.12-2.31，P=0.010）。詳見(jiàn)表 3.7。表3.7 MC4R 基因 2 個(gè)位點(diǎn)的單體型與中小學(xué)生肥胖風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)分析
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2841457