目的:膽囊癌(GBC)是最常見(jiàn)的膽道惡性腫瘤。這種惡性腫瘤的診斷和預(yù)后指標(biāo)還沒(méi)有得到廣泛的研究,而且由于缺乏明顯的癥狀和體征,大多數(shù)患者被診斷為晚期和不可治愈的階段。此外,膽囊癌對(duì)化療或放療不敏感,手術(shù)切除是唯一可能有效的治療手段。在哺乳動(dòng)物體內(nèi),LIM-onlyfactor4(LMO4)是LMO蛋白家族成員之一,在細(xì)胞增殖方面起著的重要轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用,無(wú)論是在哺乳動(dòng)物正常發(fā)育,還是在腫瘤的形成過(guò)程中均起著重要的調(diào)控作用。LMO4高表達(dá)于上皮-間質(zhì)相互作用活躍的區(qū)域,腫瘤發(fā)生的機(jī)制與其表達(dá)的失調(diào)呈正相關(guān)趨勢(shì)。細(xì)胞核中LMO4的表達(dá)水平可以作為乳腺癌、胰腺癌以及舌癌預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立預(yù)測(cè)因子,然而,迄今為止尚未發(fā)現(xiàn)LMO4對(duì)膽囊癌細(xì)胞的研究文獻(xiàn)報(bào)道。本研究的目的是探討靶向LMO4的siRNA抑制LMO4基因?qū)θ四懩野㎡CUG及NOZ細(xì)胞系生長(zhǎng)的影響,為L(zhǎng)MO4可作為膽囊癌的一種很有效的生物標(biāo)志物和治療目標(biāo)提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和支撐。方法:本次研究主要采用siRNA降低LMO4基因的表達(dá)觀察對(duì)OCUG及NOZ細(xì)胞系的增殖、凋亡的影響。RT-PCR和Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染siRNA后對(duì)LMO4在中OCUG及NOZ細(xì)胞系的表達(dá)的影響。cck-8細(xì)胞計(jì)數(shù)及集落形成實(shí)驗(yàn)觀察轉(zhuǎn)染siRNA后OCUG及NOZ細(xì)胞系細(xì)胞增殖的速度。結(jié)果:RT-PCR和Western blot檢測(cè)的結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染siRNA后能夠有效抑制LMO4在OCUG及NOZ細(xì)胞系中的表達(dá)。cck-8細(xì)胞計(jì)數(shù)及集落形成實(shí)驗(yàn)證明,轉(zhuǎn)染siRNA后能夠有效抑制OCUG及NOZ細(xì)胞系細(xì)胞增殖的速度明顯變慢。結(jié)論:LMO4的表達(dá)與膽囊癌的增殖、分化有關(guān)。LMO4水平可以預(yù)測(cè)膽囊癌患者的預(yù)后,尤其是那些高增殖的膽囊癌。這項(xiàng)研究增加了我們?cè)谀懩野┰鲋尺^(guò)程中LMO4發(fā)揮作用的認(rèn)識(shí),并可能為臨床膽囊癌患者的治療提供新的分子靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R735.8
【部分圖文】：

圖2 qRT-PCR檢測(cè)siRNA轉(zhuǎn)染后LMO4的mRNA表達(dá)量2.3 siRNA 轉(zhuǎn)染 OCUG 及 NOZ 后 LMO4 蛋白表達(dá)水平為了檢測(cè) siRNA 轉(zhuǎn)染 OCUG 及 NOZ 膽囊癌細(xì)胞后的相對(duì)蛋白表達(dá)量有無(wú)差異，利用 siRNA 轉(zhuǎn)染細(xì)胞 72h予細(xì)胞蛋白定量后行 Western blot 觀察 siRNA 轉(zhuǎn)染 OLMO4 表達(dá) OCUG 及 NOZ/LMO4 的相對(duì)蛋白表達(dá)量，OCUG 及 NOZ 膽囊癌細(xì)胞后 LMO4 表達(dá)的蛋白量明顯圖 3。OCUG NOControl si-LMO4 CLMO4(17KD)

圖2 qRT-PCR檢測(cè)siRNA轉(zhuǎn)染后LMO4的mRNA表達(dá)量2.3 siRNA 轉(zhuǎn)染 OCUG 及 NOZ 后 LMO4 蛋白表達(dá)水平為了檢測(cè) siRNA 轉(zhuǎn)染 OCUG 及 NOZ 膽囊癌細(xì)胞后 LMO4 表達(dá) OCUG/LM的相對(duì)蛋白表達(dá)量有無(wú)差異，利用 siRNA 轉(zhuǎn)染細(xì)胞 72h 后提取蛋白，用 BCA 法予細(xì)胞蛋白定量后行 Western blot 觀察 siRNA 轉(zhuǎn)染 OCUG 及 NOZ 膽囊癌細(xì)胞LMO4 表達(dá) OCUG 及 NOZ/LMO4 的相對(duì)蛋白表達(dá)量，結(jié)果顯示：經(jīng) siRNA 轉(zhuǎn)OCUG 及 NOZ 膽囊癌細(xì)胞后 LMO4 表達(dá)的蛋白量明顯低于對(duì)照組(P<0.05) ，圖 3。OCUG NOZControl si-LMO4 Control si-LMO4

山西醫(yī)科大學(xué)（博）碩士學(xué)位論文第一次計(jì)數(shù)，測(cè)出 OD 值作為基礎(chǔ)數(shù)值即第 0 天的結(jié)果保存監(jiān)測(cè) 5 天并保存 OD 值，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行數(shù)據(jù)分析顯示：與組膽囊癌細(xì)胞 OCUG 及 NOZ 增殖速度顯著降低，這種增殖意義(P<0.05)，見(jiàn)圖 4。
【參考文獻(xiàn)】

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1 李靜怡;申秀錦;鄧紅;;LMO4調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生過(guò)程中的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年01期

本文編號(hào)：2837682