背景黑色素瘤是一種高度惡性的腫瘤,早期易發(fā)生淋巴和血道轉移,對放化療不敏感,預后差。近年來,隨著各種致癌基因和腫瘤抑制基因陸續(xù)被發(fā)現,各種分子生物學手段也不斷發(fā)展和改進,基因治療已成為治療腫瘤的熱點。大多數人類腫瘤中,端粒酶多處于激活狀態(tài),其激活態(tài)與癌細胞生長關系密切。轉基因端粒酶逆轉錄酶催化亞基(TERT)是端粒酶的核心成分,Pin X1(PIN2/TRF1相互作用端粒酶抑制劑1)是一種內源性端粒酶抑制劑基因,通過與TERT基因直接結合,產生抑制端粒酶活性的生物性效應。本研究目的:通過分析Pin X1在黑色素瘤組織、癌旁組織和正常組織中的表達情況,探討Pin X1與黑色素瘤不同臨床特征之間的關系。同時,通過調節(jié)Pin X1的表達,研究Pin X1對血管生成、黑色素瘤細胞增殖、遷移和侵襲能力的影響并初步探討其相關機制。方法應用免疫組織化學技術分析208例人黑色素瘤組織微陣列(TMA)中Pin X1的表達與黑色素瘤組織的病理分級與臨床分期之間的關系。構建Pin X1-si RNA干擾質粒,轉染A375和MV3黑色素瘤細胞,Western Blot實驗檢測其在兩種黑色素瘤細胞中的干擾效應。血管形成實驗觀察沉默Pin X1后的黑色素瘤細胞培養(yǎng)上清液對內皮細胞血管形成能力的影響。CCK8增殖實驗檢測和Western Blot實驗分別觀察沉默Pin Xl基因對黑色素瘤細胞增殖能力和細對黑色素瘤細胞遷移和侵襲能力的改變,使用Western Blot法測定Pin Xl、MMP-9和TIMP-1的蛋白表達水平。結果組織芯片(TMA)和免疫組化分析顯示:Pin X1表達與患者TNM分期有關。與病理Ⅲ-Ⅳ期組織標本相比,Ⅰ和Ⅱ期標本中的Pin X1染色顯著降低(P0.01),Pin X1表達與淋巴結轉移顯著相關,淋巴結轉移陽性組Pin X染色顯著降低(P0.01);Western Blot實驗表明:與對照組組相比,轉染Pin X1-si RNA的A375和MV3兩種黑色素瘤細胞中的Pin X1蛋白表達量明顯下降;血管形成實驗結果顯示:以黑色素瘤細胞的培養(yǎng)上清液培養(yǎng)人血管內皮細胞(HUVEC),觀察平均管樣結構形成數;A375和MV3細胞經沉默Pin X1基因處理后,其血管管樣結構形成能力明顯升高。與對照組相比,差異有統計學意義(P0.01);CCK8細胞增殖實驗結果表明:和對照組相比,沉默Pin X1組的兩組細胞在培養(yǎng)24、48、72、96h位點,其增殖效應均明顯增強,有非常顯著性差異(P0.01)。Western Blot實驗結果顯示:與對照組相比,轉染Pin X1-si RNA后,A375和MV3細胞中Cyclin D1、Cyclin E2和MMP-9表達量顯著上升,同時p27、p21和TIMP-1表達量顯著下降,均有非常顯著性差異(P0.01);細胞遷移和侵襲實驗結果表明:沉默Pin X1后,兩組細胞遷移和侵襲能均較對照組明顯增強,有非常顯著性差異(P0.01)。結論Pin X1表達在黑色素瘤中明顯下調,其下調程度與黑色素瘤的臨床病理分期和淋巴結轉移有關。在黑色素瘤細胞中低表達Pin Xl,可通過正性調節(jié)細胞周期的進程來增強細胞增殖能力,沉默Pin X1基因還可下調TIMP-1蛋白導致MMP-9通路激活,進而提高黑色素瘤細胞的遷移和侵襲能力。Pin X1基因可能成為黑色素瘤預后判斷和靶向治療的新靶點,有望在針對黑色素瘤發(fā)展和轉移的診療中發(fā)揮重要作用。
【學位單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R739.5
【部分圖文】：

PinX1在黑色素瘤組織中的染色（放大倍數×200）

estern Blot 實驗檢測 PinX1-siRNA 對黑色素瘤細胞中 PinX1 基因圖 2 B PinX1 蛋白表達灰度分析圖 （*P < 0.01）PinX1 基因后對血管形成能力的影響在轉染 PinX1-siRNA 后細胞血管形成能力是否增強，胞進行實驗，小管形成實驗結果顯示，沉默 PinX1 基因后

BPinX1蛋白表達灰度分析圖（*P<0.01）

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