隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快,工作壓力以及社會競爭性的增強(qiáng),長期處于精神緊張焦慮狀態(tài)下的人群應(yīng)激性高血壓患病率呈逐年增加的趨勢,已成為醫(yī)學(xué)界的共識。為將心血管疾病防治陣線前移,2003年美國JNC-7第一次明確提出“高血壓前期(Prehypertension) "的概念,是指：收縮壓在120-139mmHg之間和或舒張壓在80-89 mmHg之間的階段。高血壓前期全球發(fā)病率高達(dá)15%—40%,在我國的發(fā)病率約為38.9-41.3%,且呈現(xiàn)年輕化的趨勢。研究表明高血壓前期常常合并一種或多種危險因素,不僅與遠(yuǎn)期心血管事件的發(fā)生呈正相關(guān),部分患者甚至已經(jīng)開始出現(xiàn)血管,心,腦,腎等靶器官損害。因此,若能在高血壓前期這個關(guān)鍵階段采取必要的干預(yù)手段將能有效的遏制高血壓的發(fā)生并可對靶器官進(jìn)行有效的保護(hù),對于顯著降低心腦血管疾病的發(fā)病率維護(hù)人類健康具有重要意義。因此亟須尋找高血壓防治的新靶點和新策略。但是目前的研究多集中在已經(jīng)形成的高血壓的治療以及靶器官保護(hù)方面,對高血壓前期的研究及早期干預(yù)則相對不足,利用基因芯片技術(shù)更加深入的研究針刺對高血壓前期的干預(yù)效果以及對靶器官的預(yù)防性保護(hù)作用更尚未見報道。研究目的：本研究遵照中醫(yī)治未病的原則,瞄準(zhǔn)“高血壓前期”這一關(guān)鍵過渡階段,運用基因芯片技術(shù)、生物信息學(xué)分析技術(shù)以及RT-PCR方法觀察電針對應(yīng)激性高血壓前期的降壓以及對靶器官的保護(hù)作用,揭示電針調(diào)控應(yīng)激性高血壓前期的干預(yù)靶點及效應(yīng)機(jī)制,為高血壓病的防治提供新的依據(jù)和可靠的治療手段。研究方法：實驗一：電針對應(yīng)激性高血壓前期大鼠血壓及主動脈組織形態(tài)學(xué)的影響將33只雄性Wistar大鼠(9周齡,220±30g)隨機(jī)分為空白組,模型組和模型+電針3組,每組各11只。運用足底電擊結(jié)合噪聲的復(fù)合刺激方法對模型組與電針組大鼠進(jìn)行為期14天的造模,制備應(yīng)激性高血壓前期大鼠模型,并在造模過程中對電針組進(jìn)行電針干預(yù)。分別在針刺治療前以及接受刺激后的第3、5、7、9、11、13、15天測量三組大鼠收縮壓,并于治療結(jié)束后第15天進(jìn)行取材,運用HE染色法觀察各組大鼠主動脈組織形態(tài)學(xué)變化。實驗二：電針對應(yīng)激性高血壓前期大鼠下丘腦基因表達(dá)譜的影響及關(guān)鍵基因PCR驗證治療結(jié)束后采用Gene Chip Rat Gene 2.0 ST芯片技術(shù)觀察三組大鼠下丘腦組織基因表達(dá)譜的改變,篩選出差異表達(dá)基因(P0.05, Fold Changes≥1.5 or Fold Changes(?)-1.5)。運用G0功能富集分析(Gene Ontology)以及KEGG通路富集分析(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)等生物信息學(xué)分析技術(shù)對致病相關(guān)差異基因以及電針治療后的反應(yīng)基因進(jìn)行相關(guān)生物學(xué)功能與通路分析,之后運用熒光定量PCR技術(shù)對篩選出的關(guān)鍵基因進(jìn)行驗證,以期揭示電針調(diào)控應(yīng)激性高血壓前期的干預(yù)靶點及效應(yīng)機(jī)制,為高血壓病的防治提供科學(xué)依據(jù)。結(jié)果：實驗一：造模結(jié)束后,模型組大鼠收縮壓較基值明顯升高,達(dá)到前期高血壓狀態(tài)(120-139mmhg),與空白組相比較,具有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01)。造模過程中,模型組大鼠出現(xiàn)眼睛充血,易激惹等外觀和行為學(xué)上的改變,HE染色結(jié)果也顯示模型組主動脈出現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞脫落、平滑肌細(xì)胞增生等病理改變,提示造模成功。各組大鼠血壓變化值顯示：在針刺治療的第5、7、9天,模型組與電針組有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異(P0.01),在針刺治療的第11、13、15天,模型組與電針組有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),說明電針太沖、曲池穴對于應(yīng)激性高血壓前期具有明顯的降壓效應(yīng),且短期效應(yīng)較好。同時,根據(jù)各組大鼠主動脈HE染色圖片結(jié)果發(fā)現(xiàn),電針組大鼠主動脈組織損害較輕,說明電針對于模型組大鼠主動脈組織細(xì)胞損傷具有一定的保護(hù)作用。實驗二：我們的基因芯片結(jié)果顯示：電針可顯著影響應(yīng)激性高血壓前期大鼠下丘腦基因表達(dá)譜的改變：與正常組大鼠相比較,模型組大鼠共有差異表達(dá)基因307條,其中234條基因表達(dá)上調(diào),73條基因表達(dá)下調(diào)；經(jīng)治療后,與模型組大鼠相比較,電針組大鼠共有差異表達(dá)基因383條,其中,110條基因表達(dá)上調(diào),273條基因表達(dá)下調(diào)；G0功能富集分析發(fā)現(xiàn)這些差異表達(dá)基因功能主要涉及應(yīng)激反應(yīng)(response to stimulus) 、細(xì)胞進(jìn)程(cellular process) 、免疫系統(tǒng)反應(yīng)過程(immune system process) 、細(xì)胞增生／遷移調(diào)節(jié)過程(growth/localization)細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix)、(menbrane part)、抗氧化活性(antioxidant activity)、受體活性(receptor activity)、分子轉(zhuǎn)導(dǎo)活性(molecular transducer activity)等方面,KEGG信號通路分析發(fā)現(xiàn)與高血壓密切相關(guān)的24條通路被激活。另外對三組差異表達(dá)基因進(jìn)行篩選發(fā)現(xiàn)共同表達(dá)基因有105條,經(jīng)文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)其中有6條基因與應(yīng)激性前期高血壓發(fā)病密切相關(guān),分別是：HspB1、vtn、BMP-4、 p2rx4、Ppplrl4a、TH,這些基因在模型組表達(dá)均顯著上調(diào),經(jīng)電針治療后均發(fā)生下調(diào),對這6個關(guān)鍵基因進(jìn)行RT-PCR驗證后發(fā)現(xiàn)與芯片結(jié)果相一致,推測,這6個關(guān)鍵基因與應(yīng)激性高血壓前期發(fā)病機(jī)制密切相關(guān),并且電針降壓機(jī)制可能是通過參與調(diào)控這6個關(guān)鍵基因的功能表達(dá)及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來實現(xiàn).結(jié)論：1.電針曲池、太沖穴對應(yīng)激性高血壓前期大鼠具有明顯的降壓效應(yīng)并且對大鼠主動脈損傷具有一定程度的保護(hù)作用。2.電針曲池、太沖穴可對應(yīng)激性高血壓前期大鼠下丘腦組織基因表達(dá)譜產(chǎn)生影響。3.應(yīng)激性高血壓前期大鼠下丘腦組織基因表達(dá)譜HspB1、vtn、BMP-4、p2rx4、Ppplr14a、 TH基因的mRNA異常表達(dá)是應(yīng)激性高血壓前期發(fā)生和發(fā)展過程中重要的分子生物學(xué)機(jī)制。4.電針曲池、太沖穴降壓機(jī)制可能是通過調(diào)節(jié)心血管舒縮功能(HspB1、vtn、BMP-4),Ca離子濃度(p2rx4、Ppplr14a)以及交感神經(jīng)功能(TH)相關(guān)基因及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路實現(xiàn)。
【學(xué)位單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：R245


本文編號：2824145