第一部分:NKAP通過(guò)PI3K/AKT信號(hào)通路影響乳腺癌細(xì)胞的生物學(xué)功能目的:NKAP在轉(zhuǎn)錄抑制,T細(xì)胞的發(fā)育、成熟和功能獲得,成體造血干細(xì)胞的維持和存活,RNA剪接等方面具有重要作用。但人們?nèi)匀幌嘈臢KAP具有很多未發(fā)現(xiàn)的巨大作用,尤其在癌癥方面。乳腺癌是全球主要的公共衛(wèi)生問(wèn)題,也是婦女中最常見(jiàn)的癌癥類(lèi)型。在本文,我們想要探究NKAP與乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展的聯(lián)系。方法:通過(guò)TCGA、GTEx和GEPIA的數(shù)據(jù)庫(kù)信息分析NKAP在乳腺癌患者腫瘤組織和正常乳腺組織之間的表達(dá)差異,并分析其差異表達(dá)與乳腺癌患者存活率的相關(guān)性。當(dāng)發(fā)現(xiàn)NKAP在乳腺癌組織中顯著高表達(dá),并與預(yù)后不良相關(guān)后,我們應(yīng)用RNA干擾技術(shù)敲低乳腺癌細(xì)胞MCF-7中NKAP的表達(dá),建立NKAP敲低細(xì)胞株。隨后使用CCK8實(shí)驗(yàn)和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)探究NKAP敲低對(duì)細(xì)胞增殖和克隆形成能力的影響,通過(guò)transwell實(shí)驗(yàn)揭示其對(duì)細(xì)胞遷移的作用,并使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。在機(jī)制方面,我們通過(guò)western blot尋找NKAP在乳腺癌細(xì)胞MCF-7中發(fā)揮作用的過(guò)程中涉及到的信號(hào)途徑。結(jié)果:1.NKAP在乳腺癌中高表達(dá)2.NKAP敲低會(huì)抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖和克隆形成能力3.NKAP敲低會(huì)抑制MCF-7細(xì)胞的遷移能力4.NKAP敲低可以觸發(fā)caspase3依賴(lài)凋亡途徑,影響相關(guān)凋亡蛋白的表達(dá),促進(jìn)MCF-7細(xì)胞凋亡5.NKAP 影響 PI3K/Akt/mTOR 信號(hào)通路結(jié)論:NKAP在乳腺癌組織中顯著高表達(dá),并與乳腺癌患者的預(yù)后不良密切相關(guān)。NKAP通過(guò)AKT/mTOR信號(hào)通路在乳腺癌中發(fā)揮癌基因作用。敲低NKAP可以抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖和遷移,促進(jìn)其凋亡。我們的研究,揭示了 NKAP在乳腺癌組織中可能具有的作用和機(jī)制;為乳腺癌的靶向治療和預(yù)后預(yù)測(cè)提供了一定的理論數(shù)據(jù)。第二部分:NKAP在缺氧狀態(tài)下對(duì)乳腺癌的影響目的:近年來(lái),越來(lái)越多的證據(jù)表明腫瘤組織中的氧(02)含量是導(dǎo)致乳腺癌轉(zhuǎn)移的重要決定因素。持續(xù)的腫瘤缺氧導(dǎo)致更多惡性腫瘤表型。在本研究中,我們將不同濃度的CoCl2與MCR-7乳腺癌細(xì)胞共同體外培養(yǎng)以找到最佳的低氧模型。本課題的前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)了 NKAP在乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中具有癌基因的作用。在研究NKAP功能時(shí),我們發(fā)現(xiàn),乳腺癌組織內(nèi)缺氧會(huì)導(dǎo)致NKAP表達(dá)顯著上升,并與HIF-1α的表達(dá)呈正相關(guān)。因此我們推測(cè)乳腺癌組織內(nèi)缺氧會(huì)上調(diào)NKAP表達(dá),進(jìn)而調(diào)控腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。本研究旨在發(fā)現(xiàn)缺氧對(duì)乳腺癌細(xì)胞的功能影響,并闡明新的缺氧靶蛋白,NKAP,在腫瘤缺氧過(guò)程中的作用及具體機(jī)制。方法:在本研究中,將不同濃度的CoCl2(50,100,150和200μM)和乳腺癌細(xì)胞MCR-7體外一起培養(yǎng)以找到最佳的低氧模型。通過(guò)qRT-PCR和western blot檢測(cè)不同濃度CoC12處理下,HIF-1 α、CXCR4和VEGF的表達(dá)情況,以明確缺氧微環(huán)境。隨后通過(guò)顯微拍照和TUNEL實(shí)驗(yàn)檢測(cè)缺氧微環(huán)境下乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的變化。并利用CCK8實(shí)驗(yàn)分析缺氧對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖的影響。通過(guò)western blot檢測(cè)明確缺氧對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7中NKAP表達(dá)的影響。在缺氧環(huán)境下敲低NKAP,研究缺氧和NKAP敲低同時(shí)進(jìn)行對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增殖、遷移的影響。結(jié)果:1.CoCI2 誘導(dǎo) HIF-1α,CXCR4 和 VEGF 的表達(dá)2.CoCl2促進(jìn)MCF-7細(xì)胞凋亡3.CoCl2抑制MCF-7細(xì)胞增殖4.缺氧誘導(dǎo)NKAP表達(dá)5.缺氧和NKAP敲低同時(shí)進(jìn)行對(duì)MCF-7細(xì)胞功能的影響結(jié)論:CoCl2模擬的缺氧條件可以顯著誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞MCF-7中HIF-1α,CXCR4和VEGF的表達(dá),且與CoCl2的濃度和處理時(shí)間有關(guān)。即體外腫瘤細(xì)胞內(nèi)的缺氧及其對(duì)細(xì)胞的影響是一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程。CoCl2模擬的低氧條件在MCF-7細(xì)胞中產(chǎn)生細(xì)胞毒性,并誘導(dǎo)了細(xì)胞凋亡。低氧能夠誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞MCF-7中NKAP的表達(dá)。當(dāng)缺氧和NKAP敲低同時(shí)進(jìn)行時(shí),細(xì)胞增殖的抑制作用加劇,但NKAP敲低阻礙了缺氧對(duì)細(xì)胞遷移的促進(jìn)作用。這些初步結(jié)果表明,在乳腺癌細(xì)胞MCF-7中,缺氧信號(hào)途徑和NKAP參與的信號(hào)途徑可能存在串話(huà)。即在細(xì)胞遷移方面,可能具有協(xié)作效果;而在細(xì)胞的增殖和存活方面可能具有拮抗作用。NKAP是一個(gè)非常有趣的,跟乳腺癌發(fā)展和缺氧都密切相關(guān)的靶蛋白。具體機(jī)制仍然等待我們的探索。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R737.9
【部分圖文】：

圖１邋（Ａ）邋ＮＫＡＰｍＲＮＡ表達(dá)水平的盒型圖。紅色和灰色的盒子分別代表了乳腺癌腫瘤逡逑組織和正常組織。所用的數(shù)據(jù)來(lái)源于ＴＣＧＡ數(shù)據(jù)庫(kù)。Ｙ軸代表ｌｏｇ２基因表達(dá)水平。（Ｂ）逡逑ＮＫＡＰ高表達(dá)或低表達(dá)的乳腺癌患者的存活率。所有數(shù)據(jù)來(lái)源于ＧＥＰ１Ａ。逡逑Ａ邋一逡逑｜邋１－０－１逡逑０．８邋－逡逑�。浚叮澹咤鍟苠澹翦义希椋海簦殄澹铄濉鲥濉鲥义希檫姡危缅澹保＿姡玻⑦姡常澹矗妫殄义希逻姡缅义希煎澹保担义希睿耄幔疱澹恚恚礤澹恚颍睿掊澹哄澹插澹蒎�0．逡逑Ｉ邐ａ逡逑ＧＡＰＤＩｌ邐Ｊ０＇邐，邐．逡逑

圖２ｓｉＮＫＡＰ使ＮＫＡＰ表達(dá)顯著下調(diào)

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【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 邵志強(qiáng),鄭少斌,肖耀軍,譚萬(wàn)龍,陳彤,齊桓,姜耀東,郁兆存,張輝見(jiàn);缺氧誘導(dǎo)因子-1α和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在腎細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年08期

本文編號(hào)：2818896