發(fā)布時(shí)間：2020-09-11 11:31

　　 龍眼(Dimocarpus Longaan Lour.)是我國(guó)亞熱帶名貴果樹(shù),具有藥用和營(yíng)養(yǎng)雙重功效,經(jīng)濟(jì)價(jià)值高。隨著龍眼產(chǎn)業(yè)的發(fā)展及人們喜好的變化,以往的大核、果肉薄、可食率低的品種已經(jīng)不能適應(yīng)龍眼以鮮食為主的發(fā)展趨勢(shì),選育核小肉多的優(yōu)良品種具有重要意義,因此研究龍眼種子敗育機(jī)理,了解其分子機(jī)制,對(duì)龍眼的選育和生產(chǎn)實(shí)踐等具有重要意義。本研究通過(guò)本地BLAST,將龍眼幼胚不同發(fā)育時(shí)期的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)與已知的擬南芥種子發(fā)育相關(guān)基因進(jìn)行比對(duì),在轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索得到龍眼種子幼胚發(fā)育同源基因CL8111、Unigene16167、CL1842和Unigene4921,通過(guò)克隆分析龍眼四個(gè)基因的全長(zhǎng)cDNA,最終選定DlFERONIA(CL8191)和DlCYP78A5(CL1842)作為研究對(duì)象。由于龍眼具有生物學(xué)信息不完善、植物生長(zhǎng)周期長(zhǎng)、不能有效轉(zhuǎn)化等難題,因此本研究以擬南芥為研究載體,結(jié)合擬南芥FERONIA和CYP78A5基因的功能研究,通過(guò)構(gòu)建龍眼目的基因的過(guò)量表達(dá)載體、回補(bǔ)載體和亞細(xì)胞定位載體獲得擬南芥轉(zhuǎn)基因株系來(lái)進(jìn)行基因功能的驗(yàn)證,并通過(guò)微分干涉差顯微照相分析等方法進(jìn)一步探究龍眼胚胎發(fā)育機(jī)制,主要研究結(jié)果如下:1、在擬南芥中過(guò)表達(dá)DlFERONIA基因?qū)е聰M南芥種子變小,角果變小,而單角果種子數(shù)目沒(méi)有明顯變化,種皮細(xì)胞和成熟胚細(xì)胞變小,說(shuō)明DIFERONIA通過(guò)細(xì)胞擴(kuò)張調(diào)控種子大小;過(guò)表達(dá)DlCYP78A5基因?qū)е聰M南芥分枝變少,種子變大,角果變小,單角果種子數(shù)目減少,這可能由于DlCYP78A5過(guò)表達(dá)導(dǎo)致擬南芥的結(jié)實(shí)率降低。2、DlFERONIA基因能夠恢復(fù)feronia缺失突變體表型,表現(xiàn)為種子變小,種皮細(xì)胞和成熟胚細(xì)胞變小,角果變小。3、DlFERONIA在擬南芥中可能通過(guò)MINI3和IKU2途徑調(diào)控種子大小;DlCYP78A5在擬南芥中可能通過(guò)IKU1途徑調(diào)控種子大小4、DlFERONIA和DlCYP78A5均定位在細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)上。
【學(xué)位單位】：廈門(mén)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：Q943.2;S667.2
【部分圖文】：

形成了兩片子葉和胚軸，此時(shí)胚形似魚(yú)雷，故稱為魚(yú)雷胚；而隨著胚芽的出逡逑現(xiàn)，胚根分化，胚柄逐漸退化直至消失，子葉和胚軸不斷發(fā)育直至充滿整個(gè)胚囊，逡逑意味著胚的發(fā)育完成，即發(fā)育為成熟胚（圖１．２）邋［２９＿３１］。逡逑ｒｆＴｐ邋象＿逡逑Ａ邐Ｂ邋Ｃ－邐Ｄ邋．邐Ｅ邐Ｆ邐Ｇ逡逑圖１．２：擬南芥胚發(fā)育過(guò)程［３°］逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．２：邋Ｔｈｅ邋ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ邋ｏｆ邋Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ逡逑Ａ：伸長(zhǎng)期合子；Ｂ：合子經(jīng)過(guò)第一次分裂，１為頂細(xì)胞，２為基細(xì)胞；Ｃ：四分體胚；Ｄ：邋１６細(xì)胞球形胚，逡逑八分體胚的所有細(xì)胞經(jīng)過(guò)１次平周分裂，產(chǎn)生包含８?jìng)�(gè)細(xì)胞的表皮原和８?jìng)�(gè)細(xì)胞的內(nèi)部組織，３為胚根原逡逑細(xì)胞；Ｅ：早期心形胚；Ｆ：心形胚；Ｇ：成熟胚胎；ＲＭ：根尖生長(zhǎng)點(diǎn)；ＳＭ：莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)。逡逑１．１．２．２擬南芥胚乳發(fā)育逡逑擬南芥胚乳的發(fā)育從初生胚乳核開(kāi)始，較早于胚發(fā)育，主要包括四個(gè)階段，逡逑即多核胚乳發(fā)育、細(xì)胞化、分化以及死亡［３２］（圖１．３）。擬南芥屬于核型胚乳的逡逑發(fā)育，主要包括合胞體時(shí)期和細(xì)胞化時(shí)期［３３］。首先三倍體胚乳ＤＮＡ復(fù)制加倍，逡逑胚乳細(xì)胞核分裂，但不發(fā)生胞質(zhì)分裂，即不產(chǎn)生細(xì)胞壁形成多核體，即合胞體，逡逑此時(shí)胚乳分化成三個(gè)區(qū)域

野生型花粉給／如２和突變體進(jìn)行授粉，結(jié)果得到正常大小的種子，說(shuō)明ｉｋｕ逡逑類基因調(diào)控種子的大小不存在母本效應(yīng)［７１］，而通過(guò)酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)／尺仍與逡逑ＭＡ奶存在相互作用，從而得出／尺�。钒耍停粒缀统粒郏踩叩年P(guān)系（圖１．４）。逡逑１０逡逑

邐基因的功能研究逡逑在龍眼轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中的開(kāi)花后３０ｄ、５０ｄ、６０ｄ和７０ｄ的表達(dá)逡逑情況如圖３．２所示：在：ＦＪ７８１１中，隨著龍眼胚胎的發(fā)育，的表達(dá)量逡逑呈逐漸降低的趨勢(shì)，在白核中，隨著龍眼胚胎的發(fā)育，乃／Ｆ＾ＣＷＭ表達(dá)量呈上逡逑升的趨勢(shì)。逡逑ＳＨＨＦＪ７８．Ｕ逡逑１．８０邋－邐［ｊｉＢＨ邋ｉ逡逑｜邋１．４４邋－邋■邐■邋ｒｎ邐—，逡逑，０３邋－邐Ｉ邐Ｉ＂邐｜逡逑Ｉ邐！邐Ｉ邐Ｉ逡逑１邐｜邐Ｉ邐！邐｜逡逑０邋００邐３０邋ｄ邐５０邋ｄ邐６０邋ｄ邐７０邋ｄ逡逑圖３．２：邐在龍眼轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中的表達(dá)情況逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３．２：邋Ｔｈｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｌｅｖｅｌ邋ｏｆ邋ＤＩＦＥＲＯＮＩＡ邋ｉｎ邋ｌｏｎｇａｎ邋ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ邋ｄａｔａ逡逑３＿３．１廈幻？６＞}璧目寺『頭腫猶卣鞣治鰣義顯誑旁畝量蛟げ饌徑越蟹治觶峁允荊ㄍ跡常沖澹粒哄澹茫袒茫梗峰義系模希遙樸校玻叮福靛澹猓穡嗦耄福梗錘靄被�。根舅|希遙圃げ廡蛄猩杓鋪匾煲錚藻義狹郟疲剩罰福保焙桶綴說(shuō)模悖模危廖０�，用笍sＵ婷附校校茫依┰觶保デ碇悄義轄旱纈炯觳飩峁礱鰨ㄍ跡常沖澹攏涸冢常埃埃板澹猓鹱笥一竦錳醮�，与预拆G勘瓿ざ認(rèn)噱義戲��；厥漳康鈉謂脅廡

本文編號(hào)：2816616