自被發(fā)現(xiàn)以來,由于對蝦白斑綜合癥病毒(WSSV)的高傳染性,高死亡率,此病毒成為了危害蝦類養(yǎng)殖業(yè)的主要病原之一,并嚴(yán)重影響了對蝦產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。由于WSSV感染宿主的關(guān)鍵步驟之一是其極早期基因的轉(zhuǎn)錄與翻譯,因此本文著重分析了 WSSV極早期基因wsv249啟動子及其有關(guān)轉(zhuǎn)錄因子之間的聯(lián)系。WSSV極早期基因wsv249編碼了一種E3泛素連接酶,能夠與對蝦體內(nèi)的泛素結(jié)合酶相互作用。本研究中,為了了解wsv249轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)機制,將wsv249啟動子序列以25 bp為單位截短,并分析其啟動子活性。四個25 bp區(qū)域被認為是潛在的正向或逆向調(diào)控元件。值得注意的是,將啟動子CRE元件(-275/-250)截去,啟動子活性受到抑制而降低了 84.2%。CRE元件是環(huán)磷腺苷效應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREBs)和激活蛋白1(AP-1)的結(jié)合位點。為此,本文深入研究了對蝦體內(nèi)同源蛋白Lvc-Jun和LvCREB-3對wsv249啟動子的調(diào)控作用。我們通過(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技術(shù)在凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了一種CREB同源蛋白LvCREB-3,并且LvCREB-3蛋白在鰓組織中分布最多,而在心臟中含量最少。通過WSSV感染實驗,發(fā)現(xiàn)在病毒感染12-24小時之間,LvCREB-3基因表達量在對蝦鰓組織中迅速上升。這一時間段剛好與WSSV病毒極早期基因的表達相對應(yīng)。另外,Lvc-Jun能夠上調(diào)wsv249啟動子活性高達12.4倍。EMSA實驗證明Lvc-Jun能夠與啟動子中CRE序列結(jié)合。雙熒光素酶報告基因檢測證明位于wsv249啟動子序列中-212/-205bp位置的CRE位點而不是-256/-249bp位置的CRE位點,在啟動子活性方面起關(guān)鍵作用。相反,對蝦體內(nèi)LvCREB-3蛋白并不能激活wsv249啟動子活性。上述研究有助于了解WSSV病毒與宿主體內(nèi)因子的相互關(guān)系,同時也能夠幫助了解病毒感染初期,其極早期基因在宿主體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,為將來病毒防治提供理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：廈門大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S945.4
【部分圖文】：

ＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ反轉(zhuǎn)錄酶合成完整的ｃＤＮＡ。當(dāng)ＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ反轉(zhuǎn)錄酶到達提取逡逑的ＲＮＡ５’末端時，其末端轉(zhuǎn)錄酶活性能夠在ｃＤＮＡ的第一鏈的３’末端加上額外逡逑的核苷酸（如圖２－１）。逡逑Ｐｏｌｙ邋ＲＮＡ逡逑５邋ｖ＼／ｗｗｘ／ｗｖ＼／ｖ邋ｐｏｌｙＡ邋３‘逡逑５邋＾１－邐Ｏｌｉｇｏ邋（ｄＴ）邋ｐｒｉｍｅｒ逡逑ＳＭＡＲＴｅｒ邋ＩＩＡ邐Ｆｉｒｓｔ－ｓｔｒａｎｄ邋ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ逡逑Ｏ＾ｏｎｕｄｅＤｔｉｄｅ邐ｃｏｕｐｌｅｄ邋ｗｉｔｈ逡逑ｔａｉｌｉｎｇ邋ｂｙ逡逑ＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ邋ＲＴ逡逑Ｙ逡逑義＞0０0＾邐＿Ａ逡逑Ｓ＇邐〕逡逑Ｔｅｍｐｌａｔｅ邋ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ逡逑ａｎｄ邋ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ邋ｂｙ逡逑ｙ邋ＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ邋ＲＴ逡逑５—ＸＸＸＸＸ邐ｐｏｌｙＡ逡逑—ＸＸＸＸＸ邋邐逡逑圖２－１邋ｃＤＮＡ合成示意圖逡逑２６逡逑

ＣＲＥＢ－ｌ－Ｒ邐ＡＣＧＴＴＴＴＣＧＴＧＡＧＧＣＴＴＣＣＴＣＴＧＣＴ逡逑ＣＲＥＢ－３－Ｆ邐ＡＣＡＧＴＧＧＡＣＧＣＴＣＡＣＡＧＧＴＣＡＡＣＧ逡逑ＣＲＥＢ－３－Ｒ邐ＧＡＡＴＧＡＣＣＴＧＣＴＧＡＣＧＧＣＡＴＣＴＴＴＧ逡逑ｂＺＩＰ－ＴＦ－ｌｉｋｅ－Ｆ邐ＧＧＡＣＣＡＡＴＧＣＣＡＣＡＣＣＡＡＣＴＣＡＧ逡逑ｂＺＩＰ－ＴＦ－ｌｉｋｅ－Ｒ邐ＧＣＧＧＣＧＡＣＡＴＣＴＴＴＣＣＡＴＣＴＣＴＧ逡逑二輪引物名稱邐引物序列逡逑ＣＲＥＢ－１－Ｆ邋’邐ＧＴＡＡＴＴＣＣ邋ＡＧＣＣ邋ＡＧＣＡＧＴＣＴＣＣ邋ＡＧＣ逡逑ＣＲＥＢ－ｌ－Ｒ＇邐ＡＣＴＧＣＣ邋ＡＣＴＣＴＡＴＴＣＴＣＣ邋ＡＧＧＣ邋ＡＴＴＴＧ逡逑ＣＲＥＢ－３－Ｆ，邐ＣＴＣＣＡＧＡＡＡＣＧＣＡＴＣＣＧＡＡＣＣＣＴ逡逑ＣＲＥＢ－３－Ｒ，邐ＧＧＣＡＧＴＴＣＡＴＣＡＴＣＡＡＣＧＣＣＴＴＣＣ逡逑ｂＺＩＰ－ＴＦ－ｌｉｋｅ－Ｆ邋’邐ＣＡＡＣＴＴＴＧＴＧＧ邋ＡＣＧＧＴＡＡＧＧＧ邋ＡＧＧＡＡ逡逑ｂＺＩＰ－ＴＦ－ｌｉｋｅ－Ｒ’邐ＣＣＧＣＡＣＴＣＧＴＧＧＴＣＡＴＴＴＣＡＣＣＴ逡逑３’／５’ＲＡＣＥ邋原理見圖邋２－２：逡逑

第一部分對蝦ＷＳＳＶ極早期基因ＷＷ２４９啟動子序列分析及其轉(zhuǎn)錄因子基因預(yù)測逡逑出１．７７倍；Ｐ２４９（－２００／－ｌ）活性比Ｐ２４９（－１７５／－ｌ）活性要高出１．６２倍。通過上述實驗，逡逑我們推斷在ｍｖ２辦啟動子的－１７５到－２００邋ｂｐ之間的區(qū)域存在一個正調(diào)控元件，在逡逑－２５０到－２２５邋ｂｐ之間的區(qū)域存在一些負調(diào)控元件（圖３－１邋）。逡逑

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

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本文編號：2816461