自被發(fā)現以來,由于對蝦白斑綜合癥病毒(WSSV)的高傳染性,高死亡率,此病毒成為了危害蝦類養(yǎng)殖業(yè)的主要病原之一,并嚴重影響了對蝦產業(yè)的發(fā)展。由于WSSV感染宿主的關鍵步驟之一是其極早期基因的轉錄與翻譯,因此本文著重分析了 WSSV極早期基因wsv249啟動子及其有關轉錄因子之間的聯(lián)系。WSSV極早期基因wsv249編碼了一種E3泛素連接酶,能夠與對蝦體內的泛素結合酶相互作用。本研究中,為了了解wsv249轉錄調節(jié)機制,將wsv249啟動子序列以25 bp為單位截短,并分析其啟動子活性。四個25 bp區(qū)域被認為是潛在的正向或逆向調控元件。值得注意的是,將啟動子CRE元件(-275/-250)截去,啟動子活性受到抑制而降低了 84.2%。CRE元件是環(huán)磷腺苷效應元件結合蛋白(CREBs)和激活蛋白1(AP-1)的結合位點。為此,本文深入研究了對蝦體內同源蛋白Lvc-Jun和LvCREB-3對wsv249啟動子的調控作用。我們通過(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技術在凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)體內發(fā)現了一種CREB同源蛋白LvCREB-3,并且LvCREB-3蛋白在鰓組織中分布最多,而在心臟中含量最少。通過WSSV感染實驗,發(fā)現在病毒感染12-24小時之間,LvCREB-3基因表達量在對蝦鰓組織中迅速上升。這一時間段剛好與WSSV病毒極早期基因的表達相對應。另外,Lvc-Jun能夠上調wsv249啟動子活性高達12.4倍。EMSA實驗證明Lvc-Jun能夠與啟動子中CRE序列結合。雙熒光素酶報告基因檢測證明位于wsv249啟動子序列中-212/-205bp位置的CRE位點而不是-256/-249bp位置的CRE位點,在啟動子活性方面起關鍵作用。相反,對蝦體內LvCREB-3蛋白并不能激活wsv249啟動子活性。上述研究有助于了解WSSV病毒與宿主體內因子的相互關系,同時也能夠幫助了解病毒感染初期,其極早期基因在宿主體內的轉錄調控,為將來病毒防治提供理論依據。
【學位單位】：廈門大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S945.4
【部分圖文】：

ＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ反轉錄酶合成完整的ｃＤＮＡ。當ＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ反轉錄酶到達提取逡逑的ＲＮＡ５’末端時，其末端轉錄酶活性能夠在ｃＤＮＡ的第一鏈的３’末端加上額外逡逑的核苷酸（如圖２－１）。逡逑Ｐｏｌｙ邋ＲＮＡ逡逑５邋ｖ＼／ｗｗｘ／ｗｖ＼／ｖ邋ｐｏｌｙＡ邋３‘逡逑５邋＾１－邐Ｏｌｉｇｏ邋（ｄＴ）邋ｐｒｉｍｅｒ逡逑ＳＭＡＲＴｅｒ邋ＩＩＡ邐Ｆｉｒｓｔ－ｓｔｒａｎｄ邋ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ逡逑Ｏ＾ｏｎｕｄｅＤｔｉｄｅ邐ｃｏｕｐｌｅｄ邋ｗｉｔｈ逡逑ｔａｉｌｉｎｇ邋ｂｙ逡逑ＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ邋ＲＴ逡逑Ｙ逡逑義＞0０0＾邐＿Ａ逡逑Ｓ＇邐〕逡逑Ｔｅｍｐｌａｔｅ邋ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ逡逑ａｎｄ邋ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ邋ｂｙ逡逑ｙ邋ＳＭＡＲＴＳｃｒｉｂｅ邋ＲＴ逡逑５—ＸＸＸＸＸ邐ｐｏｌｙＡ逡逑—ＸＸＸＸＸ邋邐逡逑圖２－１邋ｃＤＮＡ合成示意圖逡逑２６逡逑

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第一部分對蝦ＷＳＳＶ極早期基因ＷＷ２４９啟動子序列分析及其轉錄因子基因預測逡逑出１．７７倍；Ｐ２４９（－２００／－ｌ）活性比Ｐ２４９（－１７５／－ｌ）活性要高出１．６２倍。通過上述實驗，逡逑我們推斷在ｍｖ２辦啟動子的－１７５到－２００邋ｂｐ之間的區(qū)域存在一個正調控元件，在逡逑－２５０到－２２５邋ｂｐ之間的區(qū)域存在一些負調控元件（圖３－１邋）。逡逑

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

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相關碩士學位論文 前2條

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本文編號：2816461