[目的]研究非化療組和化療組不同亞型乳腺癌組織中FANCF相關(guān)基因mRNA的表達(dá)情況,尋找與乳腺癌密切相關(guān)的FA通路基因;在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究順鉑耐藥的癌組織中FANCF的表達(dá)情況;通過建立三陰型乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231順鉑耐藥細(xì)胞模型,驗(yàn)證FANCF耐藥前后的差異表達(dá),并通過RNAi干擾技術(shù)敲低FANCF的表達(dá),探討FANCF在乳腺癌順鉑耐藥中的作用及其機(jī)制。[方法]收集手術(shù)切除的女性乳腺癌患者乳腺癌組織和正常乳腺組織標(biāo)本共93例,其中非化療組的三陰型乳腺癌、Luminal型乳腺癌、HER2陽性型乳腺癌各20例,化療組相對(duì)應(yīng)的三型乳腺癌分別為11、13和9例。采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測乳腺癌組織和正常乳腺組織中的FANCF相關(guān)基因FANCA、FANCD2、FANCF、FANCI、BRCA1和BRCA2 mRNA的表達(dá)水平。收集順鉑敏感和順鉑耐藥的乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶組織石蠟切片共27例,其中順鉑敏感14例、順鉑耐藥13例,采用免疫組化方法檢測FANCF在其中的表達(dá)。以體外藥物濃度遞增法建立三陰型乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231順鉑耐藥細(xì)胞模型。CCK8法檢測細(xì)胞的順鉑抑制活性，實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法檢測誘導(dǎo)順鉑耐藥前后FANCF的mRNA表達(dá),Western blotting法驗(yàn)證差異蛋白的表達(dá)。通過RNAi干擾技術(shù)敲低MDA-MB-231敏感細(xì)胞和順鉑耐藥細(xì)胞中FANCF的表達(dá),在mRNA和蛋白水平進(jìn)行敲低效果驗(yàn)證。以CCK8法檢測順鉑對(duì)兩種細(xì)胞的IC50,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡的情況。[結(jié)果】1、FANCA、FANCF、FANCD2、FANCI、BRCA1 和 BRCA2 在 93 例非化療組和化療組患者組織樣本的mRNA表達(dá):非化療組三陰型、Luminal型、HER2型乳腺癌組織中FANCF基因mRNA相對(duì)表達(dá)量均低于相應(yīng)正常乳腺組織(P0.01)，HER2 型乳腺癌組織中 BRCAI、BRCA2、FANCI 和 FANCD2 基因mRNA相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)應(yīng)的正常乳腺組織且均高于三陰型和Luminal型乳腺癌組織中的mRNA表達(dá)量,三陰型乳腺癌組織中FANCD2和FANCI基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量高于相應(yīng)的正常乳腺組織,Luminal型乳腺癌組織中FANCA基因mRNA表達(dá)量高于HER2型和三陰型(P0.05);化療組患者的組織樣本中三陰型乳腺癌組織中除FANCF外其余5個(gè)基因表達(dá)量均非常低,Luminal型和HER2型乳腺癌組織中BRCA1、FANCI的表達(dá)均顯著高于正常乳腺組織,Luminal型乳腺癌患者BRCA1、BRCA2、FANCA、FANCI基因mRNA表達(dá)量均高于三陰型和HER2型(P均0.05);化療組三種亞型乳腺癌組織中FANCF的表達(dá)水平高于非化療組(P0.05)，且TNBC組差異最顯著,三陰型和HER2型乳腺癌組織的BRCA1、BRCA2、FANCD2、FANCI基因mRNA表達(dá)量顯著低于對(duì)應(yīng)非化療組患者的乳腺癌組織的表達(dá)量(P0.05)；基因相關(guān)性分析結(jié)果顯示FANCF的表達(dá)與其余5個(gè)基因的表達(dá)水平呈現(xiàn)顯著負(fù)相關(guān),FANCA、FANCD2、FANCI、BRCA2、BRCA1 5個(gè)基因之間的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)。2、免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)FANCF在順鉑耐藥的乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)顯著高于順鉑敏感的乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組織(P0.05)。3、體外順鉑濃度遞增法誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞順鉑耐藥3個(gè)月后的耐藥指數(shù)為13.5,GO/G1期細(xì)胞增多、S期和G2/M期細(xì)胞減少。在順鉑耐藥的乳腺癌細(xì)胞中FANCF的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著升高(.P0.05)。4、使用 RNAi 干擾技術(shù)敲低 FANCF 后,MDA-MB-231 和 MDA-MB-231/Pt 細(xì)胞凋亡增加、細(xì)胞對(duì)順鉑的藥物敏感性顯著升高,且以MDA-MB-231/Pt細(xì)胞明顯。[結(jié)論]1、FANCF基因在非化療組乳腺癌組織中相對(duì)表達(dá)量均低于相應(yīng)正常乳腺組織,而在化療組乳腺癌組織中FANCF基因mRNA的表達(dá)上調(diào),提示這與化療藥物的使用有一定關(guān)系;FANCF mRNA在非化療組和化療組乳腺癌組織中的表達(dá)存在差異,尤其在TNBC中的表達(dá)差異最為顯著;三種不同亞型乳腺癌組織中FANCF相關(guān)基因的表達(dá)差異性較大,新輔助化療可在一定程度上影響B(tài)RCA1、BRCA2.FANCD2.FANCI 的表達(dá)。2、FANCF在順鉑耐藥的乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移組織中的表達(dá)顯著增加,提示FANCF可能與乳腺癌順鉑耐藥有關(guān)。3、在三陰型乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231順鉑耐藥細(xì)胞模型中,順鉑耐藥細(xì)胞MDA-MB-231/Pt較敏感細(xì)胞MDA-MB-231中FANCF的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著升高,推測三陰型乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231順鉑耐藥性的產(chǎn)生可能與FANCF基因的表達(dá)上調(diào)有關(guān)。4、體外合成 FANCF-siRNA,敲低 MDA-MB-231 和 MDA-MB-231/Pt 細(xì)胞的FANCF后,細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性均增加,細(xì)胞凋亡率亦顯著增加,且以MDA-MB-231/Pt細(xì)胞更為明顯,提示FANCF可能通過抗凋亡的作用參與三陰型乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231順鉑耐藥的發(fā)生,FANCF有望成為乳腺癌順鉑耐藥的潛在治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R737.9
【部分圖文】：

相對(duì)表達(dá)水平進(jìn)行分析。逡逑２．１非化療組的乳腺癌組織和正常乳腺組織中ＦＡＮＣＦ相關(guān)基因的ｍＲＮＡ表達(dá)逡逑如圖１所示，在非化療組患者的組織樣本中，三陰型、Ｌｕｍｉｎａｌ型、ＨＥＲ２型逡逑２６逡逑

圖２化療組癌組織和正常組織ＦＡＮＣＦ相關(guān)基因的ｍＲＮＡ表達(dá)逡逑

槿橄侔┳櫓嶝疲粒危茫葡喙鼗餉潁恚遙危簾澩銼冉希]3?如圖３所示，在化療組患者的乳腺癌組織樣本中，三種亞型乳腺癌組織中逡逑ＦＡＮＣＦ的表達(dá)水平高于非化療組（Ｐ＜０．０５），其中ＴＮＢＣ組差異最為顯著；化療逡逑組的三陰型乳腺癌組織中除ＦＡＮＣＦ外

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