目的:通過RNA干擾技術抑制膠原三螺旋重復蛋白1(CTHRC1)基因,研究其對膠質母細胞瘤上皮間質轉化及腫瘤細胞遷移的影響,為臨床膠質母細胞瘤的靶向治療及其預后提供理論依據(jù)。方法:1、收集46名膠質母細胞瘤患者的病理組織及16名非腫瘤患者的正常皮質組織,用定量逆轉錄聚合酶鏈反應技術即qRT-PCR(Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)和蛋白質印跡法(Western blot技術)檢測這兩種組織中CTHRC1基因m RNA和蛋白質的表達水平。2、購買人類正常星形膠質細胞株1800及人類膠質瘤細胞株U-118MG、U-87MG、U-373MG,用qRT-PCR和Western blot技術檢測以上四種細胞株中CTHRC1基因m RNA和蛋白質的表達水平。3、將U-87MG細胞株分成三組,用脂質體2000介導CTHRC1-si RNA質粒、對照質粒處理細胞株,得到CTHRC1-si RNA組、對照組,并單獨用脂質體2000處理U-87MG細胞株,進行空白對照。用qRT-PCR和Western blot技術檢測三組細胞株中CTHRC1基因m RNA和蛋白質的表達水平。4、對轉染的三組U-87MG細胞株進行細胞增殖及遷移實驗,檢測三組細胞株細胞的增殖及遷移能力。5、用qRT-PCR和Western blot技術檢測轉染的三組U-87MG細胞株細胞中上皮性標志物E鈣黏蛋白(E-cadherin)和間質標記物N鈣黏蛋白(N-cadherin)及Snail、Slug基因的m RNA和蛋白質表達水平。6、用Western blot技術測定三組U-87MG細胞株中β連環(huán)素(β-catenin)的表達水平。結果:1、膠質母細胞瘤組織中CTHRC1基因m RNA和蛋白質的表達水平明顯高于正常皮質組織。2、U-373MG、U-118MG、U-87MG細胞株中CTHRC1基因m RNA和蛋白質表達的水平顯著高于正常人星形膠質細胞株1800。3、CTHRC1-si RNA組CTHRC1基因m RNA和蛋白質的表達水平較對照組和空白組明顯下調,而后兩者CTHRC1基因m RNA和蛋白質的表達水平沒有顯著差異。4、CTHRC1-si RNA組細胞增殖能力被抑制,呈時間依賴性,較空白組和對照組明顯下降;CTHRC1-si RNA組細胞遷移能力下降,較對照組和空白組明顯降低。5、qRT-PCR和Western blot檢測結果顯示,CTHRC1-si RNA組E-cadherin基因m RNA和蛋白質的表達水平上調,而Ncadherin、Snail、Slug基因的m RNA和蛋白質的表達水平下調。在空白組和對照組E-cadherin、N-cadherin、Snail、Slug基因的m RNA和蛋白質表達水平沒有明顯差異。6、Western blot測定CTHRC1-si RNA組β-catenin的表達明顯下調。結論:與正常皮質組織相比,膠質母細胞瘤組織中存在CTHRC1基因過表達的現(xiàn)象。CTHRC1基因的沉默可以抑制膠質母細胞瘤的遷移,這可能是通過抑制膠質母細胞瘤的上皮間質轉化來實現(xiàn)的。CTHRC1基因在膠質母細胞瘤中具有潛在的致癌作用,對腫瘤的進展起著至關重要的作用。
【學位單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2017
【中圖分類】：R739.41

【參考文獻】

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本文編號：2808916