目的:通過(guò)RNA干擾技術(shù)抑制膠原三螺旋重復(fù)蛋白1(CTHRC1)基因,研究其對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及腫瘤細(xì)胞遷移的影響,為臨床膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的靶向治療及其預(yù)后提供理論依據(jù)。方法:1、收集46名膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的病理組織及16名非腫瘤患者的正常皮質(zhì)組織,用定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)即qRT-PCR(Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction)和蛋白質(zhì)印跡法(Western blot技術(shù))檢測(cè)這兩種組織中CTHRC1基因m RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。2、購(gòu)買人類正常星形膠質(zhì)細(xì)胞株1800及人類膠質(zhì)瘤細(xì)胞株U-118MG、U-87MG、U-373MG,用qRT-PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)以上四種細(xì)胞株中CTHRC1基因m RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。3、將U-87MG細(xì)胞株分成三組,用脂質(zhì)體2000介導(dǎo)CTHRC1-si RNA質(zhì)粒、對(duì)照質(zhì)粒處理細(xì)胞株,得到CTHRC1-si RNA組、對(duì)照組,并單獨(dú)用脂質(zhì)體2000處理U-87MG細(xì)胞株,進(jìn)行空白對(duì)照。用qRT-PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)三組細(xì)胞株中CTHRC1基因m RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。4、對(duì)轉(zhuǎn)染的三組U-87MG細(xì)胞株進(jìn)行細(xì)胞增殖及遷移實(shí)驗(yàn),檢測(cè)三組細(xì)胞株細(xì)胞的增殖及遷移能力。5、用qRT-PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染的三組U-87MG細(xì)胞株細(xì)胞中上皮性標(biāo)志物E鈣黏蛋白(E-cadherin)和間質(zhì)標(biāo)記物N鈣黏蛋白(N-cadherin)及Snail、Slug基因的m RNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平。6、用Western blot技術(shù)測(cè)定三組U-87MG細(xì)胞株中β連環(huán)素(β-catenin)的表達(dá)水平。結(jié)果:1、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織中CTHRC1基因m RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平明顯高于正常皮質(zhì)組織。2、U-373MG、U-118MG、U-87MG細(xì)胞株中CTHRC1基因m RNA和蛋白質(zhì)表達(dá)的水平顯著高于正常人星形膠質(zhì)細(xì)胞株1800。3、CTHRC1-si RNA組CTHRC1基因m RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平較對(duì)照組和空白組明顯下調(diào),而后兩者CTHRC1基因m RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平?jīng)]有顯著差異。4、CTHRC1-si RNA組細(xì)胞增殖能力被抑制,呈時(shí)間依賴性,較空白組和對(duì)照組明顯下降;CTHRC1-si RNA組細(xì)胞遷移能力下降,較對(duì)照組和空白組明顯降低。5、qRT-PCR和Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,CTHRC1-si RNA組E-cadherin基因m RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平上調(diào),而Ncadherin、Snail、Slug基因的m RNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平下調(diào)。在空白組和對(duì)照組E-cadherin、N-cadherin、Snail、Slug基因的m RNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平?jīng)]有明顯差異。6、Western blot測(cè)定CTHRC1-si RNA組β-catenin的表達(dá)明顯下調(diào)。結(jié)論:與正常皮質(zhì)組織相比,膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織中存在CTHRC1基因過(guò)表達(dá)的現(xiàn)象。CTHRC1基因的沉默可以抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的遷移,這可能是通過(guò)抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化來(lái)實(shí)現(xiàn)的。CTHRC1基因在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中具有潛在的致癌作用,對(duì)腫瘤的進(jìn)展起著至關(guān)重要的作用。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R739.41

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2808916