【摘要】：生物胺廣泛分布于甲殼動(dòng)物的神經(jīng)系統(tǒng)組織,其中5-羥色胺(serotonin,5-HT)和多巴胺(dopamine,DA)參與調(diào)節(jié)動(dòng)物機(jī)體的諸多重要的生理功能,包括繁殖、攝食和攻擊行為等,而對(duì)中華絨螯蟹中這兩種生物胺的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究為了探究5-HT和DA是否參與了中華絨螯蟹繁殖、光期適應(yīng)和攝食的生理過(guò)程,首先對(duì)中華絨螯蟹5-HT7受體和DA2受體進(jìn)行了初步探究,并對(duì)它們?cè)诙喾N組織中的表達(dá)進(jìn)行了分析,隨后篩選5-HT7和DA2表達(dá)較高的組織,對(duì)它們?cè)谏鲜錾磉^(guò)程中的表達(dá)情況進(jìn)行分析,同時(shí)我們進(jìn)行了不同濃度的色氨酸(5-HT前體物質(zhì))飼料對(duì)中華絨螯蟹5-HT受體、蛻殼相關(guān)受體和消化酶影響的研究,結(jié)果如下:本論文采用逆轉(zhuǎn)錄PCR(Reverse transcription PCR,RT-PCR)和cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)(Rapid amplication of cDNA ends,RACE)獲得中華絨螯蟹5-HT7(GenBank accession number:GM601745)和DA2(GenBank accession number:MF683118)受體基因的全長(zhǎng)序列。其中,5-HT7受體基因全長(zhǎng)包含2328個(gè)核苷酸,其中開(kāi)放閱讀框(open reading frame,ORF)含有1773個(gè)核苷酸(包含終止密碼子),編碼590個(gè)氨基酸;DA2序列全長(zhǎng)2369bp,開(kāi)放閱讀框中含1770bp,編碼589個(gè)氨基酸。兩者都屬于G-蛋白偶聯(lián)受體超家族,具有七個(gè)跨膜區(qū),包含高度保守的DRY殘基和其他多個(gè)保守區(qū)。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)技術(shù)研究這兩個(gè)基因在中華絨螯蟹不同組織和不同卵巢發(fā)育階段、不同光周期和不同攝食階段下的表達(dá)情況。結(jié)果顯示上述兩個(gè)基因在眼柄、肝胰腺、胸神經(jīng)節(jié)、腸道、腦神經(jīng)節(jié)、腮、肌肉、血淋巴和心臟等9個(gè)組織中均有表達(dá),并且在腦、胸神經(jīng)節(jié)中表達(dá)水平最高,而且在腸道中5-HT7受體的表達(dá)水平與腦、胸神經(jīng)節(jié)無(wú)顯著性差異(P0.05),與其他組織表達(dá)水平有顯著性差異(P0.05)。隨著中華絨螯蟹的生長(zhǎng)和卵巢的發(fā)育,Ⅲ期和Ⅳ期卵巢中5-HT7受體的表達(dá)水平顯著高于Ⅰ期(P0.05),而DA2的表達(dá)水平在Ⅰ-Ⅴ期呈現(xiàn)下降趨勢(shì),Ⅳ期卵巢DA2的表達(dá)水平顯著低于Ⅰ期和Ⅱ期(P0.05)。在胸神經(jīng)節(jié)中,持續(xù)光照下5-HT7受體表達(dá)水平顯著提高;在腦神經(jīng)節(jié)中,持續(xù)黑暗顯著增加了DA2的表達(dá)量。在攝食后,肝胰腺和腸道中5-HT7和DA2受體表達(dá)量均顯著上升。這些數(shù)據(jù)表明,5-HT7受體對(duì)中華絨螯蟹的卵巢成熟具有一定的促進(jìn)作用,而DA2受體對(duì)卵巢成熟有抑制作用;5-HT7受體和DA2受體參與中華絨螯蟹的光期適應(yīng)和攝食消化過(guò)程。本論文通過(guò)投喂不同濃度(0.36%(A組),0.47%(B組),0.73%(C組)和1.05%(D組))色氨酸飼料,探討色氨酸對(duì)中華絨螯蟹腦神經(jīng)節(jié)、胸神經(jīng)節(jié)、腸道和肝胰腺四種組織中5-HT受體基因(5-HT1B、5-HT2B、5-HT7)、蛻殼相關(guān)基因(Chi、EcR、MIH)表達(dá)水平和肝胰腺消化酶的影響。結(jié)果顯示,隨著飼料中色氨酸濃度的增加,血淋巴中5-HT水平逐漸上升;腦、胸神經(jīng)節(jié)中5-HT1B受體mRNA的表達(dá)水平也逐漸升高;腸道中5-HT2B受體mRNA的表達(dá)水平逐漸下降;腦神經(jīng)節(jié)和腸道中5-HT7 mRNA的表達(dá)水平也逐漸上升。此外,胸神經(jīng)節(jié)中幾丁質(zhì)酶(Chi)基因mRNA的表達(dá)量隨色氨酸濃度的升高而增加;蛻皮激素受體基因(EcR)在肝胰腺中的表達(dá)量呈下降趨勢(shì);腸道中B組和胸神經(jīng)節(jié)中C組的蛻皮抑制激素(MIH)基因的表達(dá)量顯著高于其他三組。肝胰腺蛋白酶活性C組顯著高于A、B兩組,C組與D組無(wú)顯著性差異;隨著色氨酸濃度增加,淀粉酶活性和脂肪酶活性呈下降趨勢(shì)。這些結(jié)果表明色氨酸作為5-HT的前體物質(zhì),對(duì)5-HT受體的表達(dá)發(fā)揮顯著的影響作用,而且參與調(diào)控中華絨螯蟹蛻殼,但對(duì)消化酶活性具有一定的抑制效果。以上研究表明中華絨螯蟹各組織中均有5-HT7和DA2基因表達(dá),它們參與中華絨螯蟹繁殖、光期適應(yīng)和攝食消化等生理過(guò)程,對(duì)中華絨螯蟹的生長(zhǎng)發(fā)育具有重要作用,另外,色氨酸作為5-HT的前體物質(zhì),能夠調(diào)節(jié)中華絨螯蟹蛻殼和消化。
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S917.4
【圖文】：

-HT的生物合成路徑1

[11]。圖1-2 DA的生物合成和代謝路徑Fig. 1-2 The biosynthesis and metabolic pathways of DA2 5-HT 和 DA 的受體分類及功能2.1 5-HT 受體分類與功能2.1.1 5-HT 受體分類細(xì)胞外或突觸間隙的 5-HT 通過(guò)與細(xì)胞膜或突觸后膜上相應(yīng)的 5-HT 受體結(jié)合發(fā)揮作用。5-HT 受體廣泛分布于機(jī)體各組織中，分為 7 種亞型（5-HT1  5-HT7），超過(guò) 14 個(gè)小亞型，其中除了 5-HT3 為配體門控離子通道以外，其余均為 G-蛋白

ioEdit7 軟件及多序列對(duì)比工具進(jìn)行氨基酸序列對(duì)比。EGA5.0 軟件的鄰接法（Neighbor-Joining，NJ）構(gòu)建不同進(jìn)化樹(shù)。 5-HT7 受體基因的全長(zhǎng)克隆及其生物信息學(xué)分析長(zhǎng) cDNA 序列的獲得組數(shù)據(jù)中 5-HT7 受體的 EST，進(jìn)行 RACE 克隆，獲得的 3’和約為 480bp 和 1600bp（圖 2-1）。將 PCR 的條帶回收及克段大小分別為 467bp 和 1522bp，然后將 EST 與 3’-RA進(jìn)行拼接，獲得中華絨螯蟹 5-HT7 cDNA 全長(zhǎng)為 2328bp。

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉青;劉皓;吳旭干;何杰;董鵬生;王幼鵬;成永旭;;長(zhǎng)江、黃河和遼河水系中華絨螯蟹野生和養(yǎng)殖群體遺傳變異的微衛(wèi)星分析[J];海洋與湖沼;2015年04期

2 胡晨;馬澤兵;馮曉琪;羅強(qiáng);;5-羥色胺和多巴胺與攻擊行為關(guān)系的研究進(jìn)展[J];遼寧體育科技;2015年01期

3 張強(qiáng);王志斌;楊顯斌;朱世海;;池塘中水草覆蓋度對(duì)中華絨螯蟹生長(zhǎng)的影響[J];畜牧與飼料科學(xué);2014年12期

4 周航宇;姜淮蕪;王明佳;;5-羥色胺及其受體研究進(jìn)展[J];山東醫(yī)藥;2014年12期

5 王瑤;楊志剛;郭子好;姚琴琴;曾奇韜;楊筱珍;成永旭;;中華絨螯蟹RXR基因全長(zhǎng)cDNA克隆及表達(dá)分析[J];水產(chǎn)學(xué)報(bào);2013年12期

6 段云峰;吳曉麗;王濤;金鋒;;五羥色胺和多巴胺與攻擊行為的關(guān)聯(lián)研究進(jìn)展[J];生命科學(xué);2013年10期

7 蔣琦辰;張文逸;譚紅月;張悅恬;楊家新;李楓;;不同光周期下紅螯螯蝦幼蝦攝食節(jié)律的研究[J];淡水漁業(yè);2012年05期

8 陳新;張國(guó)亮;欒建革;高立平;溫士旺;劉俊峰;;多巴胺受體的分子生物學(xué)及相關(guān)胃腸疾病研究[J];河北醫(yī)藥;2008年03期

9 印遇龍;孔祥峰;李鐵軍;;新世紀(jì)我國(guó)畜禽養(yǎng)殖業(yè)面臨的主要問(wèn)題及應(yīng)對(duì)措施[J];飼料工業(yè);2007年14期

10 黃旭雄,陳馬康,劉波;光周期對(duì)鹵蟲(chóng)繁殖的影響[J];水生生物學(xué)報(bào);2001年03期

本文編號(hào)：2805789