【摘要】：黃瓜(CucumissativusL.),2n=2x=14,為葫蘆科甜瓜屬一年生草本蔓生攀緣植物,是世界重要的蔬菜之一,在蔬菜作物周年供應(yīng)中占有重要的地位。隨著黃瓜全基因組測(cè)序的完成,為黃瓜分子標(biāo)記輔助育種、基因定位和功能驗(yàn)證及其它方面提供了極大的便利。分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)被廣泛的應(yīng)用到作物遺傳育種當(dāng)中。為了將黃瓜自交系H19中的小葉基因(Little Leaf)轉(zhuǎn)入到其它不同生態(tài)型的黃瓜當(dāng)中,本實(shí)驗(yàn)以華北鮮食型黃瓜9930和北美加工型黃瓜Gy14為受體親本材料,黃瓜自交系小葉材料H19為供體親本材料,利用一次雜交、兩次回交、一次自交以及三次分子標(biāo)記輔助選擇,分別構(gòu)建小葉基因在不同遺傳背景下的近等基因系。具體結(jié)果如下:1.利用覆蓋黃瓜全基因組的288對(duì)SSR標(biāo)記,以親本組合9930×H19、Gy14×H19為模板,分別在兩對(duì)組合中篩選出在黃瓜7條染色體上均勻分布且有顯著差異的102對(duì)和88對(duì)SSR標(biāo)記用于分子標(biāo)記輔助的背景選擇。兩親本組合篩選得到的標(biāo)記間平均間距分別為1.61Mb和2.18Mb,標(biāo)記密度適中,適合應(yīng)用于各世代的背景選擇。2.構(gòu)建小葉基因近等基因系,利用與目標(biāo)基因共分離的dCAPS標(biāo)記為前景選擇標(biāo)記,篩選出的102對(duì)和88對(duì)SSR標(biāo)記為背景選擇標(biāo)記,分別在BC1F1、BC2F1和BC2F2進(jìn)行分子輔助選擇。在9930×H19組合中,最終在BC2F2群體的54個(gè)候選單株中篩選出10株含有小葉基因且背景回復(fù)率最高的單株;Gy14×H19組合中,從BC2F1群體中的43個(gè)候選單株選擇出10株背景回復(fù)率高的單株進(jìn)行下一步的自交。3.利用Graphical GenoTypes軟件對(duì)各世代回交群體的入選單株進(jìn)行圖示基因型分析。通過(guò)圖示基因型分析表明,在9930遺傳背景下,BC2F1和BC2F2代群體遺傳背景均得到較高的回復(fù),平均遺傳背景回復(fù)率分別達(dá)到了 90.2%和92.22%,基本符合預(yù)期;在Gy14遺傳背景下,BC1F1和BC2F1代群體平均遺傳背景回復(fù)率為66.45%和69.19%。本研究利用分子標(biāo)記輔助選擇快速構(gòu)建小葉基因在不同遺傳背景中的近等基因系,為我們研究該基因在不同背景中的表現(xiàn),也為后續(xù)深入研究小葉基因的功能及其調(diào)控器官大小的作用機(jī)理提供了堅(jiān)實(shí)的材料基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S642.2
【圖文】：

圖 3-2 9930×H19、Gy14×H19 組合所選標(biāo)記在染色體組上的具體位置分布Fig.3-2 The specific chromos location of selected markers in 9930×H19&Gy14×H19注：A、B 分別為 9930×H19、Gy14×H19 組合背景選擇標(biāo)記在染色體組上的分布。Note：A and B respect the specific chromos location of background selected markers in 9930×H19&Gy14×H19.3.2 BC1F1、BC2F1群體候選單株的篩選3.2.1 BC1F1群體分析在 9930×H19 的 51 株 BC1F1群體中通過(guò) dCAPS 標(biāo)記前景選擇，篩選出 28 株基因型為雜合碩點(diǎn) Ll 的單株，用 102 對(duì) SSR 標(biāo)記對(duì) 28 個(gè) BC1F1群體單株進(jìn)行背景回復(fù)率分析，結(jié)果顯示，該群體背景回復(fù)率平均值為 73.67%，最高的單株可達(dá) 84.31%，最低的僅 57.84%。大部分單株的背景回復(fù)率都在 72%以上，其中有 3 株的背景回復(fù)率超過(guò)了 80%。以遺傳背景回復(fù)率達(dá) 79%以上為標(biāo)

圖 3-3 9930×H19 組合 BC1F1群體前景選擇及背景選擇部分電泳結(jié)果Fig.3-3 The electrophoresis results of FS and BS in BC1F1population of 9930×H19注： A 為前景選擇結(jié)果，1 和 3、2 和 4 分別為親本 9930 經(jīng) dCAPS 標(biāo)記擴(kuò)增酶切前后的擴(kuò)增條帶，5 和 6 分別為H19 酶切前后擴(kuò)增條帶，7 到 12 為部分 BC1F1群體單株酶切后的的條帶；B 為某一背景選擇標(biāo)記的擴(kuò)增結(jié)果，1 和2 分別為親本 9930、H19，3 到 30 為 BC1F1群體單株的擴(kuò)增結(jié)果；M 為 Marker。Note： A is the results of foreground selection，1&3、2&4 and 5、6 respectively are the electrophoresis reslts of dCPASmarker in 9930&H19，7 to 12 are the enzymatic results in BC1F1population；B is the results of background selection，1 and2 are the electrophoresis results of SSR marker in parents 9930 and H19，3 to 30 are the electrophoresis results of SSRmarker in in BC1F1population ；M is Marker.在 82 株 Gy14×H19 的 BC1F1群體中，通過(guò)前景選擇篩選出 35 株基因型為雜合碩點(diǎn) Ll 的單株，用 88 對(duì) SSR 標(biāo)記的篩選出的 35 個(gè) BC1F1群體單株進(jìn)行背景回復(fù)率分析，結(jié)果顯示，該群體背景

23圖 3-4 BC1F1群候選單株圖示基因型Fig.3-4 Graphical genotypes for the candidate plant of BC1F1population注：A、B 分別為 9930 和 Gy14 背景下的 BC1F1群體單株圖示基因型，圖示基因型中灰色和黑色分別代表輪回親本遺傳背景和供體親本導(dǎo)入的染色體片段。Note:A & B represent graphical genotypes of BC1F1population in 9930 and Gy14 genetic background.Graphicrepresentation of the genotypic make-up for the recurrent parent 9930 and Gy14(gray), the donor parent H19(black).

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2800499