【摘要】：半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)是廣泛分布于中國沿海的一種具有重要經(jīng)濟價值的海水魚類。半滑舌鰨營養(yǎng)豐富,味道鮮美,使其成為近年來海水魚類主要優(yōu)良養(yǎng)殖品種,具有較高的經(jīng)濟價值。目前半滑舌鰨已實現(xiàn)了工廠化養(yǎng)殖與全人工繁殖。隨著產(chǎn)業(yè)規(guī)模的不斷擴大,近年來養(yǎng)殖半滑舌鰨陸續(xù)發(fā)生各種疾病。疾病的頻繁暴發(fā)容易造成魚群大量死亡,嚴重制約了養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。病害已成為制約其發(fā)展的重大障礙。采用傳統(tǒng)育種技術(shù)與現(xiàn)代分育種技術(shù)相結(jié)合培育抗病高產(chǎn)的魚類新品種將是解決魚類病害問題的重要途徑。凝集素(lectin)家族是一類非抗體的蛋白質(zhì)或糖蛋白,可以和糖類物質(zhì)特異性結(jié)合,具有凝集細胞和沉降聚糖和復合糖的作用。半乳糖凝集素(galectin)屬于S-型凝集素,可以結(jié)合半乳糖苷,并作為一種模式識別受體可以特異性識別相關病原體分子從而間接參與抗體調(diào)理、細胞吞噬、補體激活和對微生物的致死等一系列生物體免疫活動。近來研究發(fā)現(xiàn)一種與半乳糖凝集素同源,但是缺乏與半乳糖苷結(jié)合能力的新型半乳糖凝集素相關蛋白(galectin-related protein)。本實驗對半滑舌鰨GRP基因進行了克隆并將其命名為Cs GRP。半滑舌鰨Cs GRP基因全長785bp,ORF528 bp,共編碼176個氨基酸�；蚪Y(jié)構(gòu)分析顯示Cs GRP包含5個外顯子和4個內(nèi)含子。通過序列比對并對其進行相應的進化分析發(fā)現(xiàn):Cs GRP和瑪麗魚的相似性最高,其次是深裂眶鋸雀漰,相似性分別是68%和67%。qPCR結(jié)果顯示較其他免疫器官,Cs GRP在肝臟中表達量最高。被哈維氏弧菌感染后,Cs GRP的表達量呈現(xiàn)下調(diào)趨勢。此外,通過檢測發(fā)現(xiàn),Cs GRP的Cp G島在抗病家系中的甲基化程度高于易感家系。實驗結(jié)果表明,Cs GRP可能作為一種模式識別受體,在半滑舌鰨免疫調(diào)節(jié)機制中發(fā)揮重要作用。此外,DNA甲基化模式為研究表觀遺傳調(diào)控與免疫之間的關系提供了有價值的數(shù)據(jù),并有助于未來動物遺傳學和育種的研究。36 ku囊泡整合膜蛋白(VIP36)屬于L-型凝集素,參與細胞內(nèi)分泌途徑中糖蛋白的運輸,能識別甘露聚糖且參與甘露聚糖的運輸和分類。本研究克隆得到了半滑舌鰨VIP36基因兩個轉(zhuǎn)錄本VIP36 X1和VIP36-X2的c DNA全長序列并進行了生物信息學分析,探討了該基因在物種間的進化關系。該基因兩個轉(zhuǎn)錄本m RNA在半滑舌鰨不同組織、哈維氏弧菌感染后不同時間段的免疫組織中的相對表達結(jié)果表明:VIP36基因在半滑舌鰨腦組織中表達量最高,在其他免疫組織中表達量較低;在哈維氏弧菌感染后不同時間段的腦組織中VIP36 X1表現(xiàn)為輕微上調(diào)趨勢,而VIP36-X2的表達量未出現(xiàn)明顯變化趨勢。以上結(jié)果表明:VIP36基因在哈維氏弧菌感染半滑舌鰨后發(fā)揮的免疫調(diào)功能可能比較小。
【學位授予單位】：上海海洋大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S917.4
【圖文】：

圖 2-1CsGRP全稱 cDNA序列和推導的氨基酸序列注：核苷酸序列用小寫字母表示，按酒算序列用大寫字母表示。起始密碼子（atg）和終止密碼子（tga）用方框標出。氨基酸序列中的陰影部分表示半乳糖苷凝集結(jié)構(gòu)域。紅色字母標出的表示在糖類結(jié)合中重要的氨基酸殘基。

圖 2-3 CsGRP 蛋白的多重序列比對注：紅色方框表示半乳糖苷凝集結(jié)合結(jié)構(gòu)域。hGal-7中直接參與糖類化合物調(diào)節(jié)作用的氨基酸殘基用星號標出。保守的殘基序列用小寫字母在序列底部標出。Fig. 2-3 Multiple sequence alignment of CsGRP protein sequences

Fig.2-6 CsGRP expression pattern in liver in response to V.harveyi stimulation3.4CsGRP在抗病和易感家系中的表達及甲基化調(diào)控分析研究發(fā)現(xiàn)在 CsGRP 的第一個內(nèi)含子中有 CpG 島，故對抗病家系和易感家系中 CsGRP 甲基化水平進行比較。結(jié)果顯示，CsGRP 在抗病家系中的甲基化程度(mC% = 9.1%)明顯高于易感家系(mC% = 5.4%)。通過進一步分析 CsGRP的 CpG島發(fā)現(xiàn) CpG1, CpG2 and CpG3 在抗病家系的水平明顯高于易感家系中，

【參考文獻】

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本文編號：2800231