【摘要】：背景干擾素-α是臨床上廣泛應(yīng)用的一種抗病毒、抗腫瘤藥物,但長療程應(yīng)用患者易出現(xiàn)精神抑郁等不良反應(yīng),且發(fā)病率較高。目前IFN-α引起抑郁癥的發(fā)病機制尚不確定,中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)學(xué)說是重要的假說之一,認(rèn)為大腦中單胺遞質(zhì)水平不足時,大腦細(xì)胞之間的信號傳遞就會出現(xiàn)故障,進(jìn)而出現(xiàn)抑郁癥樣行為。有研究報道外周血中adcy3,dgka,fam46a,igsf4a,kiaa1539,marcks,raph1,psme1基因表達(dá)的改變與抑郁癥有密切關(guān)系。故闡明IFN-α引起抑郁癥的分子機制,利于其發(fā)揮最大療效。目的探討IFN-α對人神經(jīng)母細(xì)胞瘤中adcy3,dgka,fam46a,igsf4a,kiaa1539,marcks,raph1,psme1基因表達(dá)水平的影響。方法1.細(xì)胞培養(yǎng):將SH-sy5y細(xì)胞懸液加入RPMI1640培養(yǎng)基中(含10%滅活胎牛血清、25m M Hepes、2m M L--谷氨酰胺、100 ug/m L鏈霉素、100U/m L青霉素),放置于37℃、含5%CO2、70%-80%濕度的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),每隔兩天給細(xì)胞換液一次。2.藥物處理:培養(yǎng)的SH-sy5y細(xì)胞分為兩組:實驗組給予濃度為1000IU/ml干擾素α-2b注射液,對照組加入PBS緩沖液,藥物刺激16小時。3.Real Time PCR檢測:Trizol法分別提取兩組細(xì)胞總RNA,并鑒定所提取的RNA質(zhì)量,反轉(zhuǎn)錄合成c DNA,根據(jù)已知基因序列設(shè)計兩端引物,以c DNA為模板進(jìn)行實時熒光定量PCR,檢測兩組細(xì)胞adcy3,dgka,fam46a,igsf4a,kiaa1539,marcks,raph1,psme1基因表達(dá)情況。4.統(tǒng)計學(xué)分析:實驗結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)來表示,利用單因素方差分析,獨立樣本t檢驗,P0.05為差異顯著,有統(tǒng)計學(xué)意義,Graph Pad Prism 5軟件進(jìn)行結(jié)果分析并制做柱狀圖。結(jié)果實時熒光定量PCR結(jié)果顯示,IFN-α組adcy3,dgka,fam46a,marcks,raph1,psme1基因表達(dá)水平與PBS組有顯著性差異(P0.05),其中adcy3和marcks基因表達(dá)水平比PBS組減少,而dgka,fam46a,raph1,psme1基因比PBS組表達(dá)增加;igsf4a,kiaa1539基因在兩組表達(dá)無顯著性差異(P0.05)。結(jié)論1.IFN-α刺激能使SH-sy5y細(xì)胞adcy3和marcks基因表達(dá)水平顯著降低;而dgka,fam46a,raph1,psme1基因表達(dá)則顯著升高。2.IFN-α對SH-sy5y細(xì)胞igsf4a,kiaa1539基因表達(dá)無顯著影響。
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R749.4
【圖文】：

15 秒 40 循環(huán)45 秒熒光 PCR 反應(yīng)結(jié)束后，分析反應(yīng)并記錄保存，對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分用 EXCEL 表格處理，結(jié)果用均本 t 檢驗，P<0.05 表示顯著差異結(jié)果分析并制做柱狀圖。膠電泳檢測 RNA 的完整性細(xì)胞 SH-sy5y 的 RNA 后，用 1泳條帶均清晰，且 28s 約為 18s 的明 RNA 提取成功，可以逆轉(zhuǎn)錄

熒光定量PCR擴(kuò)增曲線圖

熒光定量PCR溶解曲線圖（adcy3）

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本文編號：2796940