【摘要】：老芒麥?zhǔn)菑V泛分布在我國(guó)西北地區(qū)的一種優(yōu)質(zhì)牧草,飼草及種子產(chǎn)量較高,適應(yīng)性較強(qiáng)。但在種子保存過程中,常會(huì)因更新繁殖不及時(shí)或較差的保存環(huán)境,使種子發(fā)生老化。本研究以內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)育成的國(guó)審品種“農(nóng)牧老芒麥”種子為材料,在高溫高濕條件下老化,獲得相對(duì)發(fā)芽率75.21%、54.00%和36.00%的樣本材料,以未經(jīng)老化處理的種子(相對(duì)發(fā)芽率100%)為對(duì)照,相對(duì)應(yīng)的老化時(shí)間為0 h、24h、72 h和144 h。對(duì)老化的種子活力、生理生化和差異基因表達(dá)等進(jìn)行研究,擬探討農(nóng)牧老芒麥種子老化的可能原因,揭示其種子老化機(jī)理以及抗老化的生理和分子機(jī)制,為種子生產(chǎn)和長(zhǎng)期保存提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:(1)農(nóng)牧老芒麥種子相對(duì)發(fā)芽勢(shì)、相對(duì)發(fā)芽率、相對(duì)發(fā)芽指數(shù)、相對(duì)活力指數(shù)、抗氧化酶活性和可溶性蛋白含量均隨老化時(shí)間的延長(zhǎng)而下降;而電導(dǎo)率、丙二醛含量、脯氨酸和可溶性糖逐漸升高。老化處理抑制農(nóng)牧老芒麥的萌發(fā),隨老化程度的加深,細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能遭到破壞。(2)相關(guān)分析表明,超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化物酶(POD)、過氧化氫酶(CAT)活性和可溶性蛋白與各個(gè)活力指標(biāo)之間呈現(xiàn)極顯著正相關(guān)關(guān)系;電導(dǎo)率、丙二醛、脯氨酸和可溶性糖與各個(gè)活力指標(biāo)之間呈現(xiàn)顯著或極顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系。該結(jié)果表明,上述代謝調(diào)節(jié)物質(zhì)含量及相關(guān)酶活性可以用作判斷農(nóng)牧老芒麥種子老化階段程度的指標(biāo)。(3)利用256對(duì)引物組合,對(duì)農(nóng)牧老芒麥的四個(gè)老化梯度進(jìn)行cDNA-AFLP分析,共篩選出136對(duì)多態(tài)性較好、條帶清晰的引物組合,經(jīng)擴(kuò)增得到2720個(gè)條帶,回收了老化過程中一直保留的50條上調(diào)表達(dá)條帶。(4)回收的50條差異片段二次擴(kuò)增后,對(duì)亮度較好的22個(gè)條帶測(cè)序分析,其中與NCBI blast比對(duì)的19個(gè)差異表達(dá)片段中有13個(gè)與已知序列同源,功能上主要涉及細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育、能量代謝、防御和修復(fù)機(jī)制等類別;另外6個(gè)差異表達(dá)片段在數(shù)據(jù)庫(kù)里暫時(shí)沒有找到同源序列,它們可能屬于與老化相關(guān)的未知基因序列。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S543.9
【圖文】：

.01 or P=0.05 levels,respectively四個(gè)梯度農(nóng)牧老芒麥葉片進(jìn)整齊清晰，無拖尾。紫外分A280 均在 1.9～2.0，表明總A 的試驗(yàn)要求（圖 5）。T 活性 電導(dǎo)率 丙二醛 脯.943**-0.837*-0.964**-0.984**-0.864*-0.943**-0.972**-0.852*-0.941**-0.900**-0.860*-0.972**-0

圖6 雙鏈 cDNA 電泳檢測(cè)圖Fig. 6 2nd cDNA electrophoresis test results泳道 M：2000 bp ladder；泳道 1：對(duì)照；泳道 2-4：老化 24 h，72 h，144 hlane M：2000 bp ladder；lane 1：ck；lane 2-4：aging 24 h，72 h，144 h3.6 cDNA-AFLP 差異基因表達(dá)分析3.6.1 預(yù)擴(kuò)增結(jié)果預(yù)擴(kuò)增既能反應(yīng)酶切與連接效果的好壞，又能為 AFLP 選擇性擴(kuò)增提供模版。對(duì)雙鏈 cDNA 進(jìn)行雙酶切，采用表 1 中的接頭和預(yù)擴(kuò)引物進(jìn)行連接和預(yù)擴(kuò)增，預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng) 1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)顯示

圖6 雙鏈 cDNA 電泳檢測(cè)圖g. 6 2nd cDNA electrophoresis test resladder；泳道 1：對(duì)照；泳道 2-4：老化 ladder；lane 1：ck；lane 2-4：aging 2達(dá)分析連接效果的好壞，又能為 A采用表 1 中的接頭和預(yù)擴(kuò)引電泳檢測(cè)顯示，條帶均勻彌散擴(kuò)增模版進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2784803