【摘要】：目的:口腔鱗癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)占口腔頜面部惡性腫瘤的90%,是最常見的惡性腫瘤。目前經(jīng)治療后OSCC的5年生存率也僅為50%-60%。近幾年隨著腫瘤免疫學(xué)研究的深入,人們認(rèn)識(shí)到腫瘤的免疫逃逸導(dǎo)致了機(jī)體對(duì)腫瘤的免疫無(wú)應(yīng)答或免疫反應(yīng)低下,通過(guò)對(duì)腫瘤免疫逃逸機(jī)制的了解,對(duì)臨床的免疫治療,預(yù)后判斷及療效評(píng)價(jià)具有很大的指導(dǎo)意義。第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶和張力蛋白同源物(Phosphatase and tension homolog deleted on chromosome ten,PTEN)是迄今發(fā)現(xiàn)的第1種具有雙特異性磷酸酶活性的腫瘤抑制基因,通過(guò)發(fā)揮磷酸酶作用,參與調(diào)控細(xì)胞內(nèi)諸多重要的信號(hào)通路,其中包括PI3K/AKT信號(hào)通路。研究發(fā)現(xiàn),在人類多種腫瘤中包括口腔鱗癌均發(fā)現(xiàn)有PTEN的低表達(dá)或不表達(dá)等失活現(xiàn)象,其表達(dá)情況與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后有一定的相關(guān)性。本研究使用PTEN表達(dá)不同的兩種口腔鱗癌細(xì)胞株和一種正�？谇火つぜ�(xì)胞株,采用分子生物學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù),檢測(cè)免疫抑制因子(IL-6,IL-10,VEGF)和共刺激分子(B7-H1)的表達(dá);使用PI3K/AKT信號(hào)通路抑制劑干預(yù)后,檢測(cè)免疫抑制因子(IL-6,IL-10,VEGF)和共刺激分子(B7-H1)的濃度變化。探討PTEN失活后口腔鱗癌免疫逃逸的具體作用途徑和分子靶點(diǎn);揭示PTEN失活在口腔鱗癌免疫逃避中作用和分子機(jī)制。材料與方法:1.實(shí)驗(yàn)材料口腔鱗癌細(xì)胞株SCC-4:購(gòu)置于美國(guó)ATCC公司口腔鱗癌細(xì)胞株Tca8113:購(gòu)置于上海九院正常口腔黏膜細(xì)胞株HGFs(正常對(duì)照,來(lái)源于正常牙齦組織):來(lái)源于本院病理研究室2研究方法2.1采用免疫組化(immunohistochemistry,IHC)和蛋白印跡法(WesternBlot)檢測(cè)三種細(xì)胞株(SCC-4、TCa8113和HGFs)中PTEN蛋白的表達(dá)情況。2.2采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)三種細(xì)胞株(SCC-4、TCa8113和HGFs)中免疫抑制因子(IL-6,IL-10和VEGF)和共刺激分子(B7-H1)的含量。2.3使用PI3K的抑制劑(LY294002)干預(yù)三種細(xì)胞株(SCC-4、TCa8113和HGFs),采用ELISA檢測(cè)干預(yù)后免疫抑制因子(IL-6,IL-10和VEGF)和共刺激分子(B7-H1)的表達(dá)變化情況。結(jié)果:1.免疫組化和Western Blot檢測(cè)結(jié)果均顯示正�？谇火つぜ�(xì)胞株HGFs中PTEN蛋白為正常表達(dá),口腔鱗癌細(xì)胞TCa8113中PTEN蛋白為中表達(dá),口腔鱗癌細(xì)胞SCC-4中PTEN蛋白為低表達(dá);2.ELISA結(jié)果顯示HGFs、TCa8113和SCC-4中的免疫抑制因子(IL-6、IL-10、VEGF)濃度依次升高,且每?jī)煞N細(xì)胞之間均有顯著性差異(P0.05);3.ELISA結(jié)果顯示HGFs、TCa8113和SCC-4中的共刺激分子(B7-H1)濃度依次升高,且每?jī)煞N細(xì)胞之間均有顯著性差異(P0.05);4.使用PI-3K抑制劑LY294002干預(yù)后,HGFs、TCa8113和SCC-4中的免疫抑制因子(IL-6、IL-10、VEGF)濃度均降低,SCC-4降低最為顯著(P0.05);5.使用PI-3K抑制劑LY294002干預(yù)后,HGFs、TCa8113和SCC-4中的共刺激分子(B7-H1)濃度降低,且SCC-4降低最為顯著(P0.05).6.三種細(xì)胞中PTEN與IL-6、IL-10、VEGF和B7-H1相關(guān)性分析:PTEN與IL-6、IL-10、VEGF和B7-H1濃度呈明顯負(fù)相關(guān),r值分別-0.985、-0.97、-0.945、-0.975,P0.05。結(jié)論:1.PTEN基因的低表達(dá)可以引起免疫抑制因子(IL-6、IL-10、VEGF)的表達(dá)增多,從而導(dǎo)致鱗癌逃避機(jī)體免疫監(jiān)視。2.PTEN基因的低表達(dá)可以引起共刺激分子(B7-H1)的表達(dá)增多,從而促進(jìn)鱗癌的免疫逃逸。3.PTEN基因?qū)τ诿庖咭种埔蜃雍凸泊碳し肿拥恼{(diào)控為負(fù)調(diào)節(jié)作用,是通過(guò)信號(hào)通路PI3K/AKT實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R739.8
【圖文】：

1 PTEN 在正�？谇火つぜ�(xì)胞株 HGFs 中的表達(dá)情況（免疫組化，×.1 Expression of PTEN in normal oral mucosal cell line HGFs（IHC，×

1 PTEN 在正常口腔黏膜細(xì)胞株 HGFs 中的表達(dá)情況（免疫組化，×.1 Expression of PTEN in normal oral mucosal cell line HGFs（IHC，×

3 PTEN 在口腔鱗癌細(xì)胞株 SCC-4 中的表達(dá)情況（免疫組化，×40ig.3 Expression of PTEN in oral squamous cell line SCC-4（IHC，×4HGFs TCa8113 SCC-41 2 3 4 5 6PTENGAPDH 4 三種細(xì)胞株(HGFs、TCa8113 和 SCC-4)中 PTEN 蛋白的 WB 結(jié)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2779040