【摘要】：背景與目的臨床上把聽力下降稱為耳聾,耳聾是人類最常見的感覺缺陷性疾病之一。2006年第二次全國殘疾人抽樣調(diào)查結(jié)果顯示:我國聽力言語殘疾者近3000萬人,單純聽力殘疾者2004萬,占殘疾人總數(shù)的24.16%。新生兒耳聾發(fā)病率為0.1%-0.3%,每年還有6-8萬遲發(fā)性耳聾的患兒被發(fā)現(xiàn),大部分為重度、極重度感音神經(jīng)性耳聾,嚴重影響患者的交流和認知能力,對個人、家庭及社會造成了巨大的經(jīng)濟和生活負擔。耳聾的致病因素非常多,大致可分為環(huán)境因素和遺傳因素兩大類,由遺傳因素所致的先天感音神經(jīng)性耳聾約60%,其余40%可能與環(huán)境因素有關(guān)。遺傳性耳聾根據(jù)是否伴有耳外組織的異�；虿∽兛煞譃榫C合征性耳聾(syndromic hearing loss SHL)和非綜合征性耳聾(nonsyndromic hearing loss NSHL)。NSHL占遺傳性耳聾的70%以上,與遺傳性耳聾相關(guān)的突變基因非常多,已被鑒定遺傳性耳聾基因的突變位點有140多個,且已經(jīng)克隆80多個耳聾致病基因。但經(jīng)國內(nèi)外大規(guī)模的流行病學及耳聾基因診斷學研究發(fā)現(xiàn):NSHL常見于幾個少數(shù)基因的突變,其中,我國NSHL患者中最常見的致病基因為GJB2、SLC26A4及線粒體DNA(mitochondrial,mt DNA)12Sr RAN。根據(jù)遺傳方式不同可將遺傳性耳聾分為常染色體顯性遺傳(AD)、常染色體隱性遺傳(AR)、性遺傳及線粒體遺傳四大類,其中以常染色體隱性遺傳性耳聾最多見,約占75%一80%。其突變形式也多種多樣,包括剪切、無義突變、錯義突變、插入及缺失導致移碼突變等。耳聾基因的流行病學研究不僅有利于揭示耳聾基因在人群中突變的流行病學特征,為耳聾的早期診斷、早期干預、早期治療和遺傳咨詢提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支持,而且有利于我國人口素質(zhì)的提高和國民經(jīng)濟的順利發(fā)展。遺傳性耳聾有高度的異質(zhì)性,即相同的耳聾致病基因可能會致不同的表現(xiàn)型,或相同的表現(xiàn)型其致病的耳聾基因可能不同,而且在不同的民族及地區(qū)中其導致耳聾的基因的突變位點也不相同,因此,在不同地區(qū)進行耳聾基因的分子流行病學調(diào)查,將為該地區(qū)因地制宜地開展遺傳的咨詢、基因的診斷及耳聾的預防和干預提供重要的指導意義。河南對本地區(qū)NSHL患者耳聾基因突變的相關(guān)研究較少,本研究通過對河南地區(qū)100例NSHL患者4個常見耳聾基因及其9個突變位點進行了篩查、分析,初步了解了河南地區(qū)NSHL患者4個常見耳聾基因的突變熱點和突變頻率,也為河南地區(qū)耳聾患者的病因鑒別提供參考意義。方法本研究對所有患者的臨床資料的收集、血樣的采集均獲得了患者和家屬的同意,并簽署了知情同意書。收集100例NSHL患者,來自在河南省鄭州市兒童醫(yī)院2013年12月至2014年12月行電子耳蝸植入的患者,均為漢族,其中男性63例,女性37例,年齡:12個月至17歲,中位年齡:3歲5個月。100例患者聽力學檢查(純音測聽或小兒行為測試)表現(xiàn)為雙耳重度、極重度感音神經(jīng)性耳聾,并且對所有患者行顳骨高分辨率CT、頭顱MRI、內(nèi)聽道掃描、耳蝸水成像檢查,均無聽神經(jīng)瘤等顱腦占位性病變。抽取患者3-5ml外周靜脈血,EDTA抗凝,由DNA提取試劑盒(購自天根生物科技有限公司)提取DNA,參照說明書提供的DNA提取的方法和步驟進行,應用超微量分光光度計對DNA濃度和純度進行檢測,使其濃度為100~200ng/μl,純度OD(260nm/280nm)為1.7~2.0,-20℃的冰箱中保存、備用,然后由北京六合華大基因科技有限公司根據(jù)袁永一、戴樸的研究對四個常見耳聾基因GJB2、SLC26A4、GJB3及mt DNA12Sr RAN進行引物的設(shè)計及合成,后該公司對其進行PCR擴增,PCR產(chǎn)物經(jīng)檢測合格后由北京六合華大基因科技有限公司進行測序,該公司對100例NSHL患者基因組DNA的4個常見耳聾基因:GJB2基因(c.35de1G、c.176de116、c.235de1C、c.299_300de1AT)、SLC26A4基因(c.IVS7-2AG、c.2168AG)、GJB3(c.538CT)、mt DNA12Sr RNA(c.1555AG、c.1494CT)的9個突變位點采用Sanger測序法進行檢測,應用DNAMAN軟件使測序結(jié)果與NCBI基因庫(Gene Bank)公布的4個常見耳聾基因(GJB2、SLC26A4、GJB3及mt DNA12Sr RNA)的參考序列進行比對分析。結(jié)果100例NSHL患者耳聾基因突變的檢出率為40.0%(1例同時含有GJB2、SLC26A4兩個耳聾基因的突變位點),攜帶GJB2基因突變者25例,檢出率為25.0%,其中235del C位點的突變檢出率最高為19.0%,占所有突變患者的47.5%(19/40);攜帶SLC26A4基因突變者13例,檢出率為13.0%,其中IVS7-2AG位點的突變檢出率最高為11.0%,占所有突變患者的27.5%(11/40);GJB3基因突變者0例,攜帶mt DNA12Sr RNA基因突變者3例,其中1555AG位點純合突變者2例;1494CT位點純合突變者1例,其中2例患者有明確的氨基糖苷類抗生素(慶大霉素、阿米卡星)應用史。高分辨顳骨CT示:大前庭導水管綜合癥(Enlarged Vestibular Aqueduct Syndrome,EVAS)患者有15例,其中1例表現(xiàn)為單側(cè),14例表現(xiàn)為雙側(cè),伴有內(nèi)耳畸形者3例,有明確的頭部外傷史者1例。本研究EVAS患者中檢測出攜帶SLC26A4耳聾基因突變者13例,占EVAS耳聾基因突變患者的86.7%(13/15),攜帶IVS7-2AG位點突變者11例,占EVAS基因突變患者的73.3%(11/15)。結(jié)論1、河南地區(qū)散發(fā)的100例NSHL耳聾患者的突變基因檢出率為40.0%(40/100),反映出河南地區(qū)遺傳性耳聾的高發(fā)現(xiàn)象。2、GJB2是河南地區(qū)NSHL耳聾患者的最常見的耳聾突變基因,其235del C為最常見的突變位點。3、SLC26A4是河南地區(qū)NSHL耳聾患者的僅次于GJB2的突變基因,IVS7-2AG為河南地區(qū)NSHL患者SLC26A4基因中最常見的突變位點。4、河南地區(qū)NSHL患者中EVAS患者SLC26A4的基因檢測結(jié)果與其顳骨影像學檢查結(jié)果具有高度的一致性。5、mt DNA12Sr RNA基因突變所導致的遺傳性耳聾與氨基糖苷類抗生素藥物的應用密切相關(guān),1555AG為河南地區(qū)NSHL患者中mt DNA12Sr RNA耳聾基因最常見的突變位點。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R764.43

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 錢旭麗;曹新;;耳聾相關(guān)基因COCH的非同義單核苷酸多態(tài)性致聾表型預測[J];遺傳;2015年07期

2 王淑娟;梁鵬飛;王劍;陳陽;邱建華;;50個聾兒家庭再生育前的基因突變分析研究[J];中華耳科學雜志;2015年01期

3 劉艷平;朱慶文;袁永一;;單側(cè)前庭導水管擴大研究進展[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2015年01期

4 黃莎莎;黃邦清;董敏;孟肖肖;戴樸;;單側(cè)大前庭水管綜合征SLC26A4基因的突變分析[J];中華耳科學雜志;2014年01期

5 趙亮;王保龍;孫敬武;羅以勤;姚麗娟;羅彬;李娟;;大前庭水管綜合征4個家系SLC26A4基因突變分析[J];安徽醫(yī)科大學學報;2013年10期

6 崔慶佳;黃麗輝;;GJB2基因突變與聽力損失的關(guān)系[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2013年19期

7 伍越;鄭靜;鄭斌嬌;方芳;梁玲芝;呂建新;管敏鑫;;氨基糖苷類抗生素耳毒性的保護和修飾[J];中華耳科學雜志;2012年02期

8 左路杰;張勛;袁永一;王國建;康東洋;張昕;戴樸;;北京地區(qū)耳聾殘疾人群大前庭水管相關(guān)SLC26A4基因熱點突變分子流行病學調(diào)查[J];中華耳科學雜志;2012年02期

9 郭億蓮;何琦;袁慧軍;;TECTA基因突變與常染色體顯性遺傳非綜合征型DFNA8/12型聾的研究進展[J];聽力學及言語疾病雜志;2012年03期

10 王蘋;趙佳;于姝媛;金鵬;祝威;杜波;;應用耳聾基因芯片探討聾啞夫婦的生育風險[J];中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2011年06期

本文編號：2751842