【摘要】：研究背景及目的原發(fā)性肝癌是全球?qū)嶓w瘤中第五位發(fā)病和第三位死因的癌癥,其中大多數(shù)屬于肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)。我國(guó)在2015年開展癌癥統(tǒng)計(jì)調(diào)查結(jié)果顯示,肝癌死因順位高居第三位�？梢�,肝癌已成為威脅人類健康的主要腫瘤之一。目前,HCC的一線治療方法是肝切除術(shù)和局部射頻消融,但其治療效果常常受到各種因素的限制,例如肝功能衰竭、多病灶、病人自身健康狀況等。因此,HCC的多種替代療法也應(yīng)運(yùn)而生,包括選擇性動(dòng)脈內(nèi)的放射治療(SIRT)和分子靶向治療(索拉菲尼)等。HCC對(duì)傳統(tǒng)的化療和放療不敏感,因此患者術(shù)后也常加以輔助免疫治療來(lái)縮小殘余瘤灶。然而,HCC很容易發(fā)生復(fù)發(fā),尤其是肝內(nèi)復(fù)發(fā),因此患者只有不足30%的長(zhǎng)期生存率。HCC的形成和進(jìn)展是一個(gè)復(fù)雜的多基因改變的過程,如相關(guān)癌基因的過表達(dá)和某些抑癌基因的失活等。因此,深入研究與HCC密切相關(guān)的基因并闡明其對(duì)HCC的作用,有助于我們了解HCC的發(fā)生發(fā)展機(jī)制,也對(duì)提高HCC的診治水平和預(yù)后評(píng)估具有重要意義。腫瘤蛋白D52(tumor protein D52,TPD52)在20年前被首次發(fā)現(xiàn)。人TPD52長(zhǎng)度約為180-200個(gè)氨基酸殘基,包含了許多順序結(jié)構(gòu),如Coil-coil序列,PEST基序等。許多研究表明,TPD52參與調(diào)解多種細(xì)胞功能,如細(xì)胞增殖、生存、DNA修復(fù)、胞外分泌以及囊泡運(yùn)輸,但其在惡性腫瘤中的作用仍存在爭(zhēng)議。TPD52在多種腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)水平,包括乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、伯基特淋巴瘤、黑色素瘤和卵巢癌等;而在一些腫瘤,如乳突狀腎細(xì)胞瘤、腎透明細(xì)胞瘤、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤和肺癌中的表達(dá)是下調(diào)的,但關(guān)于TPD52在HCC中的表達(dá)及診治意義尚缺乏相關(guān)的研究報(bào)道。本研究欲通過熒光定量rt-pcr、westernblotting和免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)tpd52在hcc中的表達(dá)情況,分析其與hcc腫瘤特征及患者臨床參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系,并進(jìn)一步探究tpd52在hcc發(fā)生發(fā)展中的分子機(jī)制,從而為將來(lái)肝癌疾病的臨床診斷及治療提供新的理論依據(jù)。研究方法采用熒光定量rt-pcr、westernblotting和免疫組化方法檢測(cè)tpd52在肝癌組織和肝癌細(xì)胞中的表達(dá)情況,探討tpd52與hcc腫瘤特征及臨床指標(biāo)的關(guān)系,并分析其在患者預(yù)后中的作用。通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法,構(gòu)建過表達(dá)/沉默tpd52的hepg2和bel7402細(xì)胞株,研究tpd52在p21相關(guān)通路上的作用情況。統(tǒng)計(jì)方法:秩和檢驗(yàn)用于比較tpd52在肝癌組織和癌旁組織中的mrna轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達(dá)水平差異;卡方檢驗(yàn)用于分析tpd52表達(dá)水平與臨床參數(shù)或p21表達(dá)水平的關(guān)系;生存分析用于比較tpd52高表達(dá)組和tpd52低表達(dá)組之間總生存期和無(wú)病進(jìn)展生存期的差異;單因素和多因素cox回歸分析用于探究tpd52表達(dá)水平和臨床特征對(duì)hcc術(shù)后生存的影響。結(jié)果1、肝癌組織中tpd52的mrna轉(zhuǎn)錄水平(p0.05)和蛋白表達(dá)水平(p=0.039)明顯低于癌旁組織;同樣地,與正常肝細(xì)胞lo2相比,tpd52在肝癌細(xì)胞株中mrna轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平亦明顯下調(diào)。2、tpd52陽(yáng)性染色主要位于細(xì)胞胞漿和細(xì)胞膜中,其在癌旁組織中的表達(dá)水平明顯比在癌組織中的表達(dá)高;相關(guān)分析表明tpd52表達(dá)水平與tnm分期顯著相關(guān)(p=0.011),高表達(dá)tpd52的患者總生存期(p=0.007)和無(wú)病進(jìn)展生存期(p=0.019)明顯長(zhǎng)于低表達(dá)者;多因素分析表明tpd52表達(dá)水平是患者總生存(p=0.019)和無(wú)病進(jìn)展生存(p=0.019)的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。3、肝癌中tpd52和p21的表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系(r=0.176,p=0.026),且同時(shí)高表達(dá)水平的tpd52和p21能明顯提高患者總生存期(p=0.012)和無(wú)病進(jìn)展生存期(p=0.013)。4、體外實(shí)驗(yàn)證實(shí),過表達(dá)tpd52可上調(diào)p53、p21和下調(diào)mdm2、bcl2及p-gsk-3β的水平;沉默tpd52則可下調(diào)p53、p21和上調(diào)mdm2、bcl2及P-GSK-3β的水平。由此表明,TPD52可能直接或間接地通過MDM2-p53-p21途徑來(lái)影響HCC的發(fā)生發(fā)展。結(jié)論TPD52在HCC形成與發(fā)展過程中起抑制作用,有可能作為HCC診治和患者預(yù)后評(píng)估的標(biāo)志,也可成為HCC分子靶向治療的一個(gè)新潛在靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7

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本文編號(hào)：2750543