【摘要】：擬穴青蟹(Scylla paramamosain)是我國東南沿海地區(qū)主要的海產(chǎn)蟹類之一,隸屬于甲殼綱,青蟹屬。由于性成熟的雌蟹(膏蟹)在營養(yǎng)、經(jīng)濟、醫(yī)藥等多方面的價值,日益受到消費者和研究者的青睞。近年來,研究者對如何在青蟹養(yǎng)殖過程中獲得優(yōu)質的膏蟹進行了大量研究,并取得了一定進展。甲基法尼酯(Methyl farnesoate,MF)是調節(jié)擬穴青蟹生長發(fā)育和繁殖過程中重要的內分泌激素,在青蟹性成熟的過程中起著至關重要的作用。甲基法尼酯在擬穴青蟹大顎器(Mandibular organ,MO)合成后,在進入靶器官發(fā)揮作用的過程中需要借助甲基法尼酯結合蛋白(Methyl farnesoate binding protein,MFBP)的保護和運輸,防止被特異的酯酶降解。特異的羧酸酯酶能夠水解MF,對控制MF的滴度平衡起著至關重要的作用。因此對擬穴青蟹MF代謝過程中相關基因的研究對了解甲殼動物的內分泌調控機制具有良好的指導意義。本研究基于擬穴青蟹的轉錄組數(shù)據(jù),擬從分子生物學的角度,對擬穴青蟹生長發(fā)育和繁殖過程中與MF代謝相關的保幼激素結合蛋白(Juvenile hormone binding protein,JHBP)和保幼激素酯酶(Juvenile hormone esterase,JHE)基因家族進行了克隆和表達模式分析,獲得的主要研究成果如下:1.擬穴青蟹Sp-JHBP的克隆和表達分析JHBP蛋白是一類在保幼激素(Juvenile hormone,JH)信號傳導通路上承擔保護/運輸?shù)戎匾饔玫囊活惖鞍准易?是JH代謝系統(tǒng)中關鍵的組成元素。本研究在擬穴青蟹中克隆獲得七條JHBP,具有JHBP結構域,分析后命名為Sp-JHBP,七條ORF最長為1,326 bp,最短為663 bp,編碼221-441個氨基酸,預測蛋白分子量為24,157-48,188 Da,等電點4.10-5.77。只有Sp-JHBP1不含信號肽。七條Sp-JHBP序列的一致性為38.96%。七條Sp-JHBPs的二級結構包括26.0-39.7%的α-螺旋(alpha helix),28.5-47.6%的鏈(strand),以及25.0-31.8%的環(huán)(loop),除Sp-JHBP5外,均含有2-6個蛋白結合區(qū)域。經(jīng)分子對接模擬預測,七條Sp-JHBP蛋白的三級結構均能結合MF。熒光定量PCR分析表明7個基因在n炞從滋錓-V(Z1-Z5)、大眼幼體(M)、仔蟹(C1-C2)8個幼體發(fā)育階段幾乎都有表達,但Sp-JHBP1和Sp-JHBP5表達量很低。Sp-JHBP2在Z1期表達量最高,Z2-Z4n炞從滋寮負跫觳獠壞獎澩

本文編號：2748950