【摘要】：第一部分晚期非小細胞肺癌患者血漿EGFR基因突變狀態(tài)與患者不同轉(zhuǎn)移相關(guān)性的研究目的分析晚期非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)不同轉(zhuǎn)移患者血漿表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突變情況,并分析EGFR突變與晚期NSCLC臨床參數(shù)的相關(guān)性,為闡明晚期NSCLC不同轉(zhuǎn)移患者的EGFR突變特點及探討有效的防治策略提供理論依據(jù)。方法1.收集2015年1月-2017年12月山東大學齊魯醫(yī)院和聊城市人民醫(yī)院收治的105例晚期NSCLC患者,采集清晨空腹全血10ml,乙二胺四乙酸二鉀(ethylene diaminetetraaceticacid-K2,EDTA-K2)抗凝,血液采集后 2 小時內(nèi)離心(2,000g,10 min)分離血漿,-80℃保存。收集其中24例接受手術(shù)治療或穿刺活檢患者的腫瘤組織標本,保存于-80℃低溫冰箱。2.利片用血漿、組織DNA分離試劑盒提取血漿及組織中DNA,擴增阻滯突變系統(tǒng)聚合酶鏈式反應(amplification refractory mutation system polymerase chain reaction,ARMS-PCR)方法檢測血漿及組織中 EGFR 基因(19-Del、21-L858R和20-T790M)突變情況,比較血漿和組織EGFR突變檢測的一致性。分析105例晚期NSCLC不同轉(zhuǎn)移患者血漿EGFR基因突變情況,應用χ 2檢驗分析EGFR基因突變與臨床資料的相關(guān)性,P0.05認為具有統(tǒng)計學意義。結(jié)果1.血漿和組織EGFR突變具有一致性:24例晚期NSCLC患者血漿EGFR總突變率為41.6%(10/24),組織EGFR總突變率為50.0%(12/24)。血漿EGFR 19-Del 突變率為12.5%(3/24),EGFR 21-L858R 突變率為 29.17%(7/24),EGFR 20-T790M 突變率為 0%(0/24)。組織 EGFR 19-Del 突變率為 16.67%(4/24),EGFR21-L858R 突變率為 33.33%(8/24),EGFR 20-T790M 突變率為 0%(0/24)。血漿和組織EGFR突變檢測結(jié)果一致性為71.43%。2.骨轉(zhuǎn)移組和胸膜轉(zhuǎn)移組血漿EGFR 21-L858R突變率高于EGFR19-Del和20-T790M:晚期NSCLC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、骨轉(zhuǎn)移組、胸膜轉(zhuǎn)移組、腦轉(zhuǎn)移組 EGFR 突變率分別為 15.15%(5/33),43.59%(17/39),45.00%(9/20),69.23%(9/13)。其中骨轉(zhuǎn)移組EGFR21-L858R突變率明顯高于EGFR19-Del(P=0.021)和20-T790M(P=0.003);而胸膜轉(zhuǎn)移組EGFR突變類型主要是EGFR 21-L858R,其突變率明顯高于 EGFR 19-Del(P=0.038)和 20-T790M(P=0.0075);腦轉(zhuǎn)移組EGFR 19-Del和21-L8581R突變率未見明顯差異(P0.05);淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組EGFR各突變類型突變率之間無明顯差異(P0.05)。3.EGFR突變與患者臨床參數(shù)具有明顯相關(guān)性:EGFR突變與患者性別、腦轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性:女性患者EGFR突變率(63.64%)明顯高于男性患者(21.31%)(P0.001),腦轉(zhuǎn)移組EGFR突變率(69.23%)高于非腦轉(zhuǎn)移組(33.70%)(P=0.014);EGFR 19-Del突變與患者臨床分期、腦轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性:臨床Ⅲ期NSCLC患者EGFR 19-Del突變率(2.41%)低于臨床Ⅳ期NSCLC患者(45.45%)(P=0.001),腦轉(zhuǎn)移患者中EGFR 19-Del突變率(38.46%)高于未發(fā)生腦轉(zhuǎn)移患者(7.61%)(P=0.001);EGFR21-L858R突變與患者性別具有相關(guān)性:男性患者中EGFR 21-L858R突變率(9.84%)低于女性患者(47.73%)(P=0.001)。結(jié)論血漿EGFR突變檢測結(jié)果與組織一致性較高,對于無法獲得足夠組織標本進行EGFR突變檢測的晚期NSCLC患者,血漿檢測可以成為檢測EGFR突變的替代方法。EGFR19-Del突變、21-L858R突變與晚期NSCLC臨床病理特征的相關(guān)性提示EGFR19-Del突變、21-L858R突變可能作為預判晚期NSCLC轉(zhuǎn)移的標志物,并為晚期NSCLC患者的個體化治療策略提供理論參考。第二部分晚期非小細胞肺癌不同轉(zhuǎn)移患者血漿EGFR突變與血清腫瘤標志物的相關(guān)性研究目的分析晚期NSCLC不同轉(zhuǎn)移患者的臨床參數(shù)、EGFR基因突變、血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、糖類抗原 125(carbohydrate antigen 125,CA125)、細胞角蛋白片段 21-1(cytokeratin fragment 211,CYFRA21-1)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuronen-spezifischeenolase,NSE)和唾液酸(sialic acid,SA)腫瘤標志物的關(guān)系,探索血清中腫瘤標志物能否用于預判晚期NSCLC轉(zhuǎn)移和EGFR突變類型。方法1.標本采集:采集患者空腹靜脈血5 ml置于真空采血管,待血液充分凝固后,3,000r/min、10min離心分離血清,-80℃冰箱保存。2.采用電化學發(fā)光免疫分析技術(shù)檢測2015年1月-2017年12月山東大學齊魯醫(yī)院和聊城市人民醫(yī)院收治的105例晚期NSCLC患者血清CEA、CA125、CYFRA21-1、NSE 和 SA 水平。3.EGFR各突變類型組、各轉(zhuǎn)移組血清腫瘤標志物濃度用中位數(shù)(四分位數(shù))表示,采用Mann-Whitney U檢驗進行兩組數(shù)據(jù)間血清腫瘤標志物的比較;采用Kruskal-Wallis檢驗進行多組數(shù)據(jù)間的比較。結(jié)果1.骨轉(zhuǎn)移組血清CEA水平明顯高于胸膜轉(zhuǎn)移和腦轉(zhuǎn)移組:通過比較不同轉(zhuǎn)移組間各血清腫瘤標志物水平,發(fā)現(xiàn)骨轉(zhuǎn)移組血清CEA水平(57.180 ng/ml(11.000,166.590))明顯高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(22.720 ng/ml(6.760,35.410)),胸膜轉(zhuǎn)移組(18.560 ng/ml(11.800,71.040))和腦轉(zhuǎn)移組(8.450 ng/ml(3.510,50.550))(P=0.031),胸膜轉(zhuǎn)移組和腦轉(zhuǎn)移組血清CEA水平高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組,但差異不具有統(tǒng)計學意義(P0.05);而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組、骨轉(zhuǎn)移組、胸膜轉(zhuǎn)移組、腦轉(zhuǎn)移組的CA125水平未見明顯差異(P0.05);各轉(zhuǎn)移組間CYFRA21-1未見明顯差異(P0.05);各轉(zhuǎn)移組問NSE水平亦無明顯改變;此外各組間SA水平未檢測到明顯改變(P0.05)。2.EGFR 21-L858R突變組血清CEA水平升高:EGFR突變組CEA(29.26 ng/ml(14.98,163.88))水平明顯高于未突變組(16.68 ng/ml(6.48,43.38))(P=0.006)。進一步分別對EGFR不同突變類型和血清腫瘤標志物的關(guān)系分析顯示:EGFR21-L858R 突變組血清 CEA 水平(62.89ng/ml(15.64,166.34))高于未突變組(16.68 ng/ml(6.48,43.38))(P=0.003),而EGFR21-L858R突變組與未突變組CYFRA21-1、CA125、NSE、SA水平無明顯差異(P0.05);此外,EGFR 19-Del突變組與未突變組相比,CEA、CYFRA21-1、CA125、NSE、SA水平無明顯差異。3.骨轉(zhuǎn)移EGFR突變組和胸膜轉(zhuǎn)移EGFR突變組血清CA125水平高于腦轉(zhuǎn)移EGFR突變組:我們對EGFR突變的41例晚期NSCLC患者按不同轉(zhuǎn)移進行分組,比較各組血清腫瘤標志物的水平,發(fā)現(xiàn)骨轉(zhuǎn)移EGFR突變組和胸膜轉(zhuǎn)移EGFR 突變組血清 CA125 水平分別為(47.450 U/ml(25.998,103.025)和(66.300 U/ml(38.250,132.450))明顯高于腦轉(zhuǎn)移 EGFR 突變組(19.900 U/ml(8.725,30.230))(P=0.027);而 CEA、CYFRA21-1、NSE、SA腫瘤標志物濃度在不同轉(zhuǎn)移部位EGFR突變組之間未見明顯差異(P0.05)。結(jié)論骨轉(zhuǎn)移組血清CEA水平高于胸膜轉(zhuǎn)移組和腦轉(zhuǎn)移組,并且血清CEA與晚期NSCLC患者EGFR 21-L858R突變相關(guān),提示血清CEA可能作為預判晚期NSCLC骨轉(zhuǎn)移和預測患者EGFR 21-L858R突變的潛在標志物;骨轉(zhuǎn)移EGFR突變組和胸膜轉(zhuǎn)移EGFR突變組血清CA125水平分別高于腦轉(zhuǎn)移EGFR突變組,提示發(fā)生骨轉(zhuǎn)移或胸膜轉(zhuǎn)移的晚期NSCLC患者,CA125升高提示發(fā)生EGFR突變的可能。但CEA和CA125作為預判晚期NSCLC轉(zhuǎn)移和EGFR突變類型的潛在標志物應用于臨床的可行性仍需進一步驗證。
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2

【參考文獻】

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本文編號：2748901