【摘要】：維生素D受體(Vitamin D Receptor,VDR)作為核轉(zhuǎn)錄因子,廣泛分布于多種組織細(xì)胞。VDR通過參與AKT、Wnt/β-Catenin及NF-κB等關(guān)鍵信號通路,調(diào)節(jié)體內(nèi)鈣鹽離子平衡、抑制細(xì)胞增殖以及刺激細(xì)胞成熟等生理功能。VDR突變或缺失會引發(fā)睪丸、皮膚、骨骼、乳腺及前列腺等組織發(fā)生病變。本研究前期發(fā)現(xiàn)雄性VDR敲除小鼠生殖能力較低,推測VDR基因敲除影響雄性小鼠的生殖機(jī)能。因此,本研究首先采用RNA-seq技術(shù)檢測6月齡野生鼠和VDR敲除鼠睪丸組織,初步分析野生鼠和敲除鼠差異表達(dá)基因,篩選與雄性生殖機(jī)能相關(guān)的差異基因,通過qPCR技術(shù)驗(yàn)證其表達(dá)水平;其次,從小鼠cDNA文庫中,采用酵母雙雜交技術(shù)篩選與VDR互作的蛋白因子,分析其生理功能;結(jié)合RNA-seq數(shù)據(jù)和酵母雙雜交篩選結(jié)果,進(jìn)一步揭示VDR通過直接和間接作用影響雄性小鼠生殖機(jī)能的分子機(jī)制,為解析VDR的生理功能提供基礎(chǔ)理論數(shù)據(jù)。本研究主要獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.與野生鼠比較,VDR敲除鼠的肺、腎、皮膚、小腸、睪丸和胸腺等組織中VDR基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平顯著增強(qiáng),但Western-blot實(shí)驗(yàn)在VDR敲除鼠的皮膚、小腸、腎臟及睪丸等組織中未檢測VDR表達(dá)。另外,本研究通過qPCR證明不同組織中受VDR調(diào)控的基因CYP24A1轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平顯著降低。所有數(shù)據(jù)說明本實(shí)驗(yàn)用鼠為全身性VDR基因敲除小鼠,VDR敲除后影響了其靶基因的表達(dá),為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供了實(shí)驗(yàn)材料保證。2.分析睪丸轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù),在野生鼠與敲除鼠中共獲得258個差異表達(dá)基因,其中上調(diào)基因122個,下調(diào)基因136個;其中KLK1、KLHL4、Angptl4和Car3等基因與雄性生殖相關(guān),Azgp1和ApoF基因與脂代謝相關(guān),最終通過qPCR進(jìn)一步驗(yàn)證。3.通過酵母雙雜交技術(shù)從小鼠cDNA文庫中篩選獲得12個與VDR互作的候選蛋白,其中AKAP10、FKBP51蛋白因子可能與VDR結(jié)合調(diào)控蛋白激酶磷酸化或去磷酸化以影響精子形成、發(fā)育和精子活力等;CYP2J5蛋白可能與VDR結(jié)合而調(diào)節(jié)睪酮激素代謝或介導(dǎo)其他蛋白因子與VDR結(jié)合影響細(xì)胞增殖、分化、遷移和運(yùn)動,甚至脂代謝等相關(guān)功能。
【學(xué)位授予單位】：陜西理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：Q75
【圖文】：

R 應(yīng)答元件阻遏基因的表達(dá)第Ⅴ及第Ⅵ外顯子編碼）有 13三層夾心結(jié)構(gòu)，36 個氨基酸殘有能與配體連接的氫鍵。AF-2 與，同時AF-2區(qū)的調(diào)節(jié)因子可XR 異源二聚體與配體結(jié)合后，致 VDR 對某些基因的轉(zhuǎn)錄激活中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中對集基因具有轉(zhuǎn)錄抑制作用[20]。圖 1-1 VDR 結(jié)構(gòu)示意圖1-1 VDR schematic diagram of stru

的組蛋白乙�；D(zhuǎn)移酶。這一機(jī)制主要是調(diào)控角質(zhì)形成細(xì)胞的分化，抑制表皮角質(zhì)形成細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)（見圖 1-3）。圖1-3 角質(zhì)形成細(xì)胞分化過程VDR輔助激活劑和SRC/P160在轉(zhuǎn)錄激活選擇性利用模型[26]Fig.1-3 Model Showing Selective Utilization of Two Distinct VDR Coactivators ofDRIP/Mediator and SRC/p160 in Transcriptional Activation during KeratinocyteDifferentiationVDR 即能調(diào)控復(fù)合物，也參與到維生素 D 的生物合成與降解，進(jìn)而維持機(jī)

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2737683