【摘要】：為了驗證小麥籽粒大小相關基因TaCYP78A5在小麥籽粒發(fā)育中的功能,對pINO啟動子驅(qū)動的TaCYP78A5基因過表達的轉基因小麥后代株系進行了鑒定,檢測了T_0代植株目標基因拷貝數(shù),定量分析了7個T_1代陽性植株的目標基因表達,并對其籽粒大小進行了統(tǒng)計。結果表明,利用Bar試紙條和目標基因特異PCR檢測相結合的方法對21株轉基因T_0代再生苗進行檢測,共鑒定出14個陽性植株,除2個植株的目標基因拷貝數(shù)為3和1個植株為7外,其余11個T_0代轉基因植株目標基因插入拷貝數(shù)均為1~2個,其中有6個單拷貝植株。與野生型相比,7個T_1代陽性植株目標基因表達量均極顯著增加,粒厚和粒寬均有不同程度增加,粒重極顯著增加。
【圖文】：

Ｔ０代轉基因植株進行了Ｂａｒ試紙條檢測及多次重復ＰＣＲ檢測，圖２Ａ中Ｂａｒ試紙條檢測結果顯示，陰性對照（野生型ＪＷ１）和陰性轉基因植株只顯示一條控制線，而陽性轉基因植株則可同時顯出控制線和檢測線；圖２Ｂ中ＰＣＲ檢測檢測結果顯示，空白對照（ｄｄＨ２Ｏ）和陰性對照（野生型ＪＷ１）基因組均沒有擴增出預期目的條帶，而陽性對照（ｐＣＡＭＢＩＡ３３０１－ＴａＣＹＰ７８Ａ５質(zhì)粒）與陽性轉基因植株可擴增出與理論值一致的１３５３ｂｐ目的條帶。從圖２中可以看出，Ｂａｒ試紙條檢測結果與ＰＣＲ檢測結果一致，２１株轉基因再生苗中共鑒定出１４株陽性植株。２．２Ｔ０代轉基因植株的轉入基因拷貝數(shù)以Ｔ０Ａ５－２１的基因組ＤＮＡ（５倍的稀釋，設置５個梯度）作為模板進行實時定量ＰＣＲ，得到Ｐｉｎｂ和ＴａＣＹＰ７８Ａ５基因的擴增曲線，并以模板濃度（Ｃ）的Ｌｏｇ值和對應的Ｃｔ值為Ｘ軸和Ｙ軸，得到Ｐｉｎｂ和ＴａＣＹＰ７８Ａ５基因的標準曲線（圖３）。２個基因的擴增標準曲線的相關系數(shù)都為０．９９８，接近于１，所以得到的標準曲線可以用于測定Ｔ０代轉基因植株的目標基因拷貝數(shù)。分別以各轉基因陽性植株的基因組ＤＮＡ為模板，用內(nèi)參基因Ｐｉｎｂ和ＴａＣＹＰ７８Ａ５基因特異引物和探針進行ＴａｑＭａｎ實時定量ＰＣＲ擴增，每個待測樣品設定３個重復，得到其Ｃｔ值（表２），參照劉振華等［１４］和Ｗｅｎｇ等［１５］的方法進一步計算各轉基因陽性植株中目標基因的拷貝數(shù)（表２）。農(nóng)桿

圖３內(nèi)參基因Ｐｉｎｂ（Ａ）和目標基因ＴａＣＹＰ７８Ａ５（Ｂ）的擴增標準曲線Ｆｉｇ．３ＳｔａｎｄａｒｄｃｕｒｖｅｓｏｆｒｅｆｅｒｅｎｃｅｇｅｎｅＰｉｎｂ（Ａ）ａｎｄｅｘｏｇｅｎｏｕｓｇｅｎｅＴａＣＹＰ７８Ａ５（Ｂ）表２轉基因植株目標基因ＴａＣＹＰ７８Ａ５的拷貝數(shù)Ｔａｂｌｅ２ＣｏｐｙｎｕｍｂｅｒｏｆＴａＣＹＰ７８Ａ５ｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔｓ轉基因植株ＴｒａｎｓｇｅｎｉｃｐｌａｎｔＣｔ（Ｐｉｎｂ）Ｃｔ（ＴａＣＹＰ７８Ａ５）Ｘ拷貝數(shù)估測值ＥｓｔｉｍａｔｅｄｃｏｐｉｅｓＴ０Ａ５－１２７．２２±０．０４０３０．１６±０．００５０．１４１Ｔ０Ａ５－２２６．５６±０．０５０２７．４８±０．０３００．７３１Ｔ０Ａ５－３２５．１３±０．０２５２４．６７±０．０３０２．６８３Ｔ０Ａ５－４２７．６４±０．０１０２７．７６±０．０１０１．１８２Ｔ０Ａ５－６２５．１１±０．０３０２５．１１±０．１１０１．８７２Ｔ０Ａ５－１０２５．８３±０．０１５２４．１０±０．１６５６．５８７Ｔ０Ａ５－１３２５．４９±０．０８０２６．４４±０．０５００．８４１Ｔ０Ａ５－１５２５．３５±０．０２０２６．４９±０．０１５０．７６１Ｔ０Ａ５－１６２６．３３±０．０１０２６．２９±０．０１０１．６１２Ｔ０Ａ５－１８２６．３１±０．０１５２７．３８±０．０７５０．６７１Ｔ０Ａ５－１９２５．０９±０．０３５２４．９６±０．０３５２．０８３Ｔ０Ａ５－２１２６．０２±０．０２５２６．０１±０．１００１．６５２Ｔ０Ａ５－２２２８．７２±０．０２０２８．２８±０．０２５１．５６２Ｔ０Ａ５－２４２８．２６±０．０

【參考文獻】

相關期刊論文 前5條

1 金松燦;王春平;孔欣欣;蔡珊利;陳培軍;;黃淮麥區(qū)小麥產(chǎn)量和生理性狀的遺傳增益研究[J];種子;2014年09期

2 劉振華;劉香利;李冰冰;趙惠賢;;小麥轉基因株系中外源脂氧合酶抑制基因(Loxi)拷貝數(shù)分析[J];農(nóng)業(yè)生物技術學報;2014年08期

3 李欣;杜麗璞;殷桂香;徐惠君;林志珊;佘茂云;葉興國;;轉bar基因小麥和非轉基因小麥抗除草劑鑒定方法比較[J];植物遺傳資源學報;2012年04期

4 陳俊男;高潤紅;鄧志英;田紀春;;小麥成熟胚組織培養(yǎng)體系優(yōu)化及優(yōu)良轉化受體基因型的篩選[J];山東農(nóng)業(yè)科學;2010年11期

5 楊立桃,趙志輝,丁嘉羽,張承妹,賈軍偉,張大兵;利用實時熒光定量PCR方法分析轉基因水稻外源基因拷貝數(shù)[J];中國食品衛(wèi)生雜志;2005年02期

相關碩士學位論文 前1條

1 程繪繪;TaCYP78A3和TaCYP78A5基因表達載體的構建及小麥的遺傳轉化[D];西北農(nóng)林科技大學;2015年

【共引文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉芳亮;任益鋒;王衛(wèi)東;黨忠;張保軍;;播期和密度對冬小麥普冰151籽粒灌漿特性及產(chǎn)量的影響[J];山東農(nóng)業(yè)科學;2017年06期

2 劉大同;余徐潤;朱冬梅;劉健;張曉;高德榮;;揚麥16“灌漿快”與穎果顯微結構和內(nèi)源生長素的關系[J];麥類作物學報;2017年06期

3 吳秀寧;宋昭昭;王新軍;;商麥1619籽粒灌漿的特性[J];商洛學院學報;2017年02期

4 任全茂;李援農(nóng);谷曉博;徐袁博;王凱瑜;;覆膜集雨及行距配置對冬小麥灌漿特性的影響[J];節(jié)水灌溉;2017年04期

5 蔣進;王淑榮;張連全;馮曉;左娟;劉利;;種植密度和施肥量對南麥618農(nóng)藝性狀、葉綠素含量及產(chǎn)量的影響[J];南方農(nóng)業(yè)學報;2017年03期

6 程芮;王浩;孫艷華;理東生;;小麥新品種泛麥536的灌漿速率研究[J];種子科技;2017年01期

7 滕躍;高玉亮;張雁;金美玉;李葵花;;酸脅迫對馬鈴薯脫毒試管苗結薯特性及其幾種糖代謝的影響[J];作物雜志;2017年01期

8 孫金英;曹宏鑫;焦玉光;王進;;9個品種(系)冬小麥籽粒灌漿特性分析[J];大麥與谷類科學;2016年04期

9 鄭許光;齊軍倉;惠宏杉;黃湘怡;;青稞籽粒灌漿期淀粉質(zhì)量分數(shù)的動態(tài)變化[J];西北農(nóng)業(yè)學報;2016年12期

10 李豪圣;曹新有;宋健民;劉鵬;程敦公;劉愛峰;王燦國;劉建軍;孫正娟;;不同小麥品種粒重和蛋白質(zhì)含量的穗粒位效應分析[J];作物學報;2017年02期

相關博士學位論文 前1條

1 余徐潤;小麥穎果發(fā)育及其對氮素和干旱脅迫響應的研究[D];揚州大學;2016年

【二級參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 孫重霞;楊鳳萍;張婷;隋曉燕;梁榮奇;LIU Qing;張曉東;李保云;;利用RNAi技術抑制籽粒PPO合成改良小麥面粉白度的研究[J];中國農(nóng)業(yè)科學;2013年06期

2 于彩虹;田少亭;路興波;李凡;楊淑珂;孫紅煒;;轉植酸酶基因(phyA2)玉米定性、定量PCR檢測[J];農(nóng)業(yè)生物技術學報;2012年04期

3 王渭霞;賴鳳香;洪利英;傅強;;實時定量PCR檢測轉基因水稻科豐6號插入拷貝數(shù)和轉基因含量[J];農(nóng)業(yè)生物技術學報;2012年01期

4 仇有文;張明輝;高學軍;曲波;敖金霞;袁肖寒;劉營;霍楠;;Taqman定量PCR技術檢測轉基因大豆中外源基因拷貝數(shù)[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2011年17期

5 周淼平;余桂紅;任麗娟;朱偉芳;馬鴻翔;;轉抗除草劑基因小麥植株的篩選方法研究[J];麥類作物學報;2008年06期

6 劉香利;劉縉;郭藹光;趙惠賢;;小麥不同外植體離體培養(yǎng)與再生研究[J];麥類作物學報;2008年04期

7 邢莉萍;王華忠;蔣正寧;錢晨;曹愛忠;陳佩度;;小麥幼胚再生培養(yǎng)體系優(yōu)化及優(yōu)良轉化受體基因型的篩選[J];麥類作物學報;2008年02期

8 王新國;任江萍;;不同培養(yǎng)基及激素配比對小麥成熟胚離體培養(yǎng)的影響[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2008年06期

9 張遲;謝從華;柳俊;宋波濤;劉勛;;RNA干涉對馬鈴薯內(nèi)源酸性轉化酶活性的影響[J];農(nóng)業(yè)生物技術學報;2008年01期

10 丁莉萍;高瑩;李圣純;汪成;汪越勝;何光源;;基因槍介導小麥成熟胚遺傳轉化的影響因素[J];武漢植物學研究;2007年03期

相關碩士學位論文 前1條

1 陳小霞;小麥耐熱性鑒定及熱激蛋白基因的克隆與表達分析[D];河南農(nóng)業(yè)大學;2009年

本文編號：2737085