【摘要】：背景:結(jié)腸癌是最常見的惡性腫瘤之一,在西方國(guó)家,其發(fā)病率位居腫瘤第2位,在我國(guó)居惡性腫瘤第3位。在結(jié)腸癌微轉(zhuǎn)移灶形成早期,SMC1A基因就已經(jīng)啟動(dòng)了高表達(dá)。SMC1A在結(jié)腸癌肝臟轉(zhuǎn)移灶組織中的表達(dá)顯著高于結(jié)腸癌原發(fā)灶組織和正常腸黏膜。SMC1A基因位于X號(hào)染色體上,通過選擇性剪切產(chǎn)生六個(gè)轉(zhuǎn)錄本,其中只有SMC1A-001和SMC1A-201可以翻譯出成熟蛋白產(chǎn)物。同一基因的不同剪切異構(gòu)體之間可以通過競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源調(diào)控的方式,在轉(zhuǎn)錄后水平影響該基因最終的mRNA產(chǎn)物水平。目的:為了研究SMC1A基因剪切轉(zhuǎn)錄本之間的內(nèi)源性競(jìng)爭(zhēng)調(diào)控關(guān)系,以及不同轉(zhuǎn)錄本的功能差異。方法:分別合成SMC1A轉(zhuǎn)錄本001和201的過表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染野生型RKO細(xì)胞,通過細(xì)胞劃痕試驗(yàn)、Transwell試驗(yàn)和細(xì)胞因子檢測(cè)比較兩者轉(zhuǎn)移能力差異。分別合成SMC1A轉(zhuǎn)錄本002、003、004、005的過表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染野生型RKO細(xì)胞、突變型RKO細(xì)胞、HCT116細(xì)胞、SW480細(xì)胞與SW620細(xì)胞后,提取ⅡRNA,通過熒光定量PCR驗(yàn)證過表達(dá)效果。確認(rèn)成功過表達(dá)后,再次提取RNA,采用熒光定量PCR分別檢測(cè)不同轉(zhuǎn)錄本過表達(dá)后001和201的表達(dá)情況。結(jié)果:第一、在第24h和48h時(shí)過表達(dá)SMC1A-201組和過表達(dá)SMC1A-001組細(xì)胞的遷移距離均顯著大于過表達(dá)陰性對(duì)照組。過表達(dá)SMC1A-201組和過表達(dá)SMC1A-001組細(xì)胞遷移能力明顯提高,但SMC1A-001組比SMC1A-201組遷移能力要高。過表達(dá)SMC1A-001組細(xì)胞分泌SDF-1,IL-6因子的能力更強(qiáng)。第二、野生型RKO細(xì)胞中,002、004、005過表達(dá)24、48h后,201的表達(dá)和空載組對(duì)比沒有顯著差異,但003過表達(dá)后,24、48h后201的表達(dá)都顯著增加。野生型RKO細(xì)胞中,002、003、004、005轉(zhuǎn)錄本過表達(dá)48h后001的表達(dá)量均高于各轉(zhuǎn)錄本過表達(dá)24h后,其中003過表達(dá)后001的表達(dá)增加最明顯。突變型RKO細(xì)胞缺少201的表達(dá),與野生型RKO細(xì)胞組相比,突變型RKO細(xì)胞中各轉(zhuǎn)錄本過表達(dá)后,除了 004過表達(dá)組,其他各組001的表達(dá)量在48h也比24h更高,趨勢(shì)和野生型RKO細(xì)胞內(nèi)相似。第三,在HCT116和SW620細(xì)胞中,各轉(zhuǎn)錄本的過表達(dá)趨勢(shì)與野生型RKO細(xì)胞內(nèi)的有所差異,而SW480細(xì)胞中各轉(zhuǎn)錄本的過表達(dá)趨勢(shì)則與野生型RKO細(xì)胞中的相似。結(jié)論:SMC1A基因不同轉(zhuǎn)錄本之間存在著功能差異,SMC1A轉(zhuǎn)錄本001可使腫瘤轉(zhuǎn)移潛能明顯增加,而SMC1A轉(zhuǎn)錄本201促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的潛能則相對(duì)較弱。在RKO細(xì)胞和SW480細(xì)胞中,SMC1A轉(zhuǎn)錄本003對(duì)轉(zhuǎn)錄本001和201的表達(dá)有調(diào)控作用。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.35

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本文編號(hào)：2737010