【摘要】：研究目的使用慢病毒載體介導(dǎo)Apelin基因轉(zhuǎn)染胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞,觀察Apelin基因?qū)υ摷?xì)胞葡萄糖攝取的影響。研究方法(1)使用0.5mM3-異丁基-1-甲基黃嘌呤、1μM地塞米松和10μg/ml胰島素共同作用3T3-L1前脂肪細(xì)胞,將其誘導(dǎo)為成熟脂肪細(xì)胞,油紅“O”染色鑒定;(2)TNF-α刺激誘導(dǎo)建立3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型,葡萄糖攝取試劑盒檢測(cè)鑒定;(3)通過基因亞克隆建立攜帶Apelin基因的慢病毒載體重組質(zhì)粒,利用HEK293T細(xì)胞包裝收集慢病毒液,將濃縮后的病毒液感染胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞,(1)提取細(xì)胞內(nèi)RNA,利用RT-PCR反應(yīng)驗(yàn)證Apelin基因水平表達(dá)(2)提取細(xì)胞內(nèi)蛋白,利用Western Blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證Apelin蛋白水平表達(dá)(3)使用葡萄糖攝取試劑盒檢測(cè)葡萄糖攝取值的變化。研究結(jié)果(1)油紅“O”染色結(jié)果證實(shí)80%以上3T3-L1前脂肪細(xì)胞成功誘導(dǎo)為成熟脂肪細(xì)胞;(2)TNF-α使胰島素刺激的3T3-L1脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取值降低32.7%,與對(duì)照組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);(3)將Apelin基因轉(zhuǎn)染至胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞后,(1)RT-PCR反應(yīng)驗(yàn)證轉(zhuǎn)染Apelin基因組成功擴(kuò)增出Apelin基因片段(2)Western Blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證轉(zhuǎn)染Apelin基因組細(xì)胞內(nèi)8Kd左右出現(xiàn)明顯蛋白條帶,而未轉(zhuǎn)染的對(duì)照組中未出現(xiàn)明顯蛋白條帶(3)葡萄糖攝取實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證轉(zhuǎn)染Apelin基因組葡萄糖攝取值顯著增長(zhǎng)達(dá)42.2%,與未處理的對(duì)照組對(duì)比,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。研究結(jié)論慢病毒載體介導(dǎo)Apelin基因成功轉(zhuǎn)染胰島素抵抗3T3-L1脂肪細(xì)胞后,該細(xì)胞內(nèi)葡萄糖攝取值明顯增加,從而改善胰島素抵抗。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R541.4

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2733692