發(fā)布時間：2020-06-21 20:12

【摘要】：棕櫚酸(Palmitic acid)作為一種飽和脂肪酸,在日常生活中隨處可見,當機體攝入過多棕櫚酸之后,就會將其轉化為游離脂肪酸,積累于血液中影響蛋白質的合成,從而引起多種代謝疾病的發(fā)生。且有研究發(fā)現(xiàn),過多的脂肪酸后會對細胞中Ca2+運輸產(chǎn)生影響,對于肌漿網(wǎng)(內(nèi)質網(wǎng))Ca2+ATP酶(SERCA)的活性有一定的的影響。而在骨骼肌中有研究表明,Sln和s Ank1是SERCA1的重要調(diào)控因子,并且在機體產(chǎn)熱和肌肉收縮耦合中起到很關鍵的作用。而目前對于過多脂肪酸的攝入與SERCA1的主要調(diào)控因子Sln和s Ank1之間的作用關系以及兩者之間的機制還有待進一步研究。本研究首先探究了PA是否會激活內(nèi)質網(wǎng)應激中未折疊蛋白反應(UPR),和PA是否對目的基因Sln和s Ank1基因表達有調(diào)控作用。且接下來分別探究UPR的三條通路(PERK、IRE1和ATF6通路)是否參與到PA調(diào)控Sln和s Ank1基因表達的過程中。對于PERK和IRE1通路的研究,主要采用通路抑制劑和轉染干擾片段的方法對該通路進行抑制和阻斷,并且利用q RT-PCR在m RNA水平和利用western blot在蛋白水平檢驗兩條通路的阻斷情況,在阻斷成功的情況下,檢測了Sln和s Ank1基因的表達情況。對于ATF6通路,主要運用的CRISPR/Cas9技術構建Cas9-ATF6單靶點和雙靶點敲除細胞系,利用敲除細胞系檢測目的基因的表達情況。從而初步確定三條通路是否參與到棕櫚酸誘導的Sln和s Ank1基因的表達過程中。實驗結果顯示,當PERK通路被阻斷后,PA對Sln基因表達的下調(diào)作用明顯減弱,但對s Ank1基因的下調(diào)作用無明顯的影響。而當IRE1通路被阻斷后,是PA對s Ank1基因表達的下調(diào)作用有明顯減弱。對于ATF6通路敲除細胞系的研究發(fā)現(xiàn),在ATF6的敲除細胞系中PA對Sln和s Ank1基因的影響與普通細胞系中的影響程度基本相同。根據(jù)以上結果,可以初步確認,PERK通路參與PA調(diào)控Sln基因的表達,IRE1通路參與PA調(diào)控s Ank1基因的表達,而ATF6對于PA調(diào)控兩個基因的表達都沒有什么影響。該研究為過量棕櫚酸對機體的影響貢獻了新的證據(jù),并且為接下來Ca2+穩(wěn)態(tài)和機體代謝平衡的研究提供了新的思路。
【學位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：Q78
【圖文】：

輸?shù)钠羁赡軙䦟】诞a(chǎn)生一定的質，但同時缺乏和過量攝入棕櫚酸都基因與 SERCA 的關系 40％，并具有能力去發(fā)揮的產(chǎn)熱，是產(chǎn)生熱量的良好機制，其中反復不利的，因此需要用非顫抖來代替網(wǎng)/內(nèi)質網(wǎng) Ca2 +ATP 酶（SERCA）CA）負責將肌鈣蛋白（Ca2+）從胞質肉，SERCA 的螯合活性促進了心臟白是一種分子量為 110 kDa 的跨膜蛋部，含有 2 個 Ca2 +結合位點的跨膜螺要是調(diào)節(jié)肌肉內(nèi) Ca2+處理中的內(nèi)在作肌漿網(wǎng)（SR）腔的轉運，運輸機制如 SR 膜在靜息時存在接近 10000 倍的作用占骨骼肌基礎代謝率的大約 40％

了生物學研究的許多領域[100]。Ebina 等人運用 CRISPR/Cas9 技術用于治療艾的研究，發(fā)現(xiàn)效果顯著[101]。CRISPR / Cas9 技術除了在醫(yī)療方面有重大貢獻生物技術中，精確操作遺傳構建模塊和監(jiān)管機構也有助于逆向工程或重建有生物系統(tǒng)，例如，增強工業(yè)相關生物體中的生物燃料生產(chǎn)途徑，或通過創(chuàng)建染作物來提高農(nóng)作物產(chǎn)量等，為我們的生產(chǎn)生活提供了新的思路[98]。有研究顯示 CRISPR / Cas9 是用于多種細胞類型和生物體的基因組工程具，且具有強大的功能，迄今為止，CRISPR / Cas9 已成功應用于細菌、酵母蠅、斑馬魚、水稻、猴、小鼠和人類[102]。CRISPR / Cas9 技術可用于多種生物因功能鑒定，基因敲除/敲低是研究特定基因的生理和病理功能的基本方法，前的研究中最常用的是 RNAi 技術，主要用于大規(guī)模的基因組篩選，但是技術有一定的弊端，主要弊端就是它不能完全沉默靶基因的表達，從而對實果有一定的影響[103]。在 2014 年，CRISPR / Cas9 系統(tǒng)已經(jīng)快速發(fā)展成為一項模的功能篩選工具，且已經(jīng)成功應用于各種基因組的功能篩選[104]。綜上所CRISPR / Cas9 技術在對于科學研究來說是歷史性的突破，同時也得到的飛速展，且在廣泛被使用的同時，科學家們也在更加努力地優(yōu)化 CRISPR / Cas9 相信在不久的將來，基因組編輯技術將會有更大的發(fā)展和更可觀的前景。

【參考文獻】

相關期刊論文 前6條

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相關博士學位論文 前2條

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本文編號：2724578