本文關(guān)鍵詞：GP73基因沉默誘導(dǎo)Hep G2細(xì)胞株自噬對(duì)細(xì)胞活力和凋亡的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景我們的前期研究顯示,在沉默GP73基因的Hep G2細(xì)胞株中存在較高水平的自噬現(xiàn)象,作為一種分子生物學(xué)現(xiàn)象,自噬已經(jīng)被證實(shí)對(duì)多種腫瘤的一系列行為發(fā)揮著重要的影響。目的本研究的目的在于進(jìn)一步與腫瘤細(xì)胞比較GP73基因沉默細(xì)胞中其誘導(dǎo)所產(chǎn)生自噬的水平,初步探索此種自噬對(duì)于Hep G2細(xì)胞活力和凋亡的影響。方法設(shè)計(jì)針對(duì)人類GP73基因的小干擾RNA(siRNA),并在Hep G2細(xì)胞株中進(jìn)行沉默其表達(dá)。通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)在信使RNA(mRNA)水平和通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)在蛋白質(zhì)水平檢測(cè)沉默效率。使用甲丹磺酰尸胺(MDC)染料和和Beclin 1檢測(cè)在一般形態(tài)和定性分析方面確定自噬的水平。同時(shí)聯(lián)合使用3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制劑和雷帕霉素誘導(dǎo)劑,觀察其對(duì)自噬的影響,并進(jìn)一步研究改變后的自噬水平對(duì)于Hep G2細(xì)胞的影響。細(xì)胞活力和凋亡的影響分別通過(guò)3,4,5-三羥基苯甲酸二聚體(MTT)實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行觀察和測(cè)定。結(jié)果沉默GP73基因后,和空白對(duì)照組比較其mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著降低(P0.05)。MDC染色結(jié)果顯示,沉默后細(xì)胞的熒光密度和MDC標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)量均較高,同時(shí)可特異性反應(yīng)自噬水平的Beclin 1基因亦較對(duì)照組增高(P0.05)。而GP73基因沉默后,細(xì)胞增殖受到抑制和誘導(dǎo)凋亡細(xì)胞增多。通過(guò)進(jìn)一步聯(lián)合自噬調(diào)節(jié)藥物,結(jié)果顯示3-MA和雷帕霉素均可顯著影響細(xì)胞自噬的水平。其中3-MA抑制了自噬,同時(shí)進(jìn)一步顯著影響了Hep G2細(xì)胞的增殖活力和凋亡水平(P0.05),而雷帕霉素對(duì)于上述的指標(biāo)未見(jiàn)明顯的影響。結(jié)論GP73基因沉默可誘導(dǎo)Hep G2細(xì)胞株產(chǎn)生較高水平的自噬,而自噬的抑制可能會(huì)進(jìn)一步影響Hep G2細(xì)胞的活力和凋亡水平。
【關(guān)鍵詞】：高爾基體糖蛋白73 GP73 siRNA 自噬 Hep G2
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要3-4
• ABSTRACT4-6
• 第一章 前言6-10
• 第二章 材料與方法10-20
• 1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象和試劑10-12
• 2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料12-13
• 3 實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)13
• 4 實(shí)驗(yàn)步驟13-18
• 5 實(shí)驗(yàn)分組18
• 6 技術(shù)路線18-19
• 7 統(tǒng)計(jì)分析19-20
• 第三章 結(jié)果20-28
• 1 轉(zhuǎn)染條件摸索和優(yōu)化20-21
• 2 轉(zhuǎn)染效率鑒定21-23
• 3 MDC染色自噬體23
• 4 RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)Beclin 1 水平23-24
• 5 MTT檢測(cè)細(xì)胞活力變化24-26
• 6 流式PI-FITC雙染檢測(cè)凋亡情況26-28
• 第四章 討論28-33
• 第五章 結(jié)論33-34
• 參考文獻(xiàn)34-39
• 在學(xué)期間的研究成果39-40
• 縮略詞表40-41
• 致謝41

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本文編號(hào)：271798