【摘要】：棉花黃萎病是一種具有世界性危害的土傳真菌維管束病害,每年在世界范圍內(nèi)會造成數(shù)十億美元的經(jīng)濟(jì)損失。因黃萎病菌生存能力強(qiáng)、存活時間長、寄主范圍廣、轉(zhuǎn)播途徑多等特性,很難對黃萎病菌進(jìn)行有效的防治。棉花黃萎病已經(jīng)成為我國棉花高產(chǎn)優(yōu)產(chǎn)的主要限制因素,所以迫切需要找到可以有效防治棉花黃萎病的方法。通過發(fā)掘研究棉花黃萎病菌相關(guān)致病基因來研究其致病機(jī)理,對于研究尋找防治棉花黃萎病的方法具有重要意義。本實驗室在前期的研究中通過Pull-down實驗找到一個可以和棉花抗病蛋白GbSBT1相互作用的黃萎病菌蛋白VdPHB,這預(yù)示著VdPHB蛋白可能在黃萎病菌感染植物時發(fā)揮作用。為了研究VdPHB基因在黃萎病菌致病過程中的作用及相關(guān)的致病機(jī)理,應(yīng)用同源重組原理構(gòu)建VdPHB基因缺失突變體。通過研究突變體ΔVdphb的生理生化表型和致病性來分析其基因功能。本研究的實驗結(jié)果及主要結(jié)論如下:通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的真菌轉(zhuǎn)化實驗得到64個候選突變體,隨機(jī)挑選10個候選突變體,通過基因組和基因表達(dá)水平檢測得到2個ΔVdphb突變體:ΔVdphb-14和ΔVdphb-16。對野生型Vd991和突變體ΔVdphb的生長速度、胞外酶活性、致病力等方面進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)生長速度和胞外酶活性沒有明顯差異。通過致病力分析,發(fā)現(xiàn)突變體ΔVdphb致病力顯著低于野生型Vd991。同時,在觀察感病植株莖稈剖面時發(fā)現(xiàn),突變體ΔVdphb病菌侵染的棉桿維管束沒有變?yōu)楹稚?而野生型Vd991侵染的棉桿維管束變?yōu)榱撕稚�。以上結(jié)果表明,VdPHB基因雖然沒有參與黃萎病菌生長速度和胞外酶活性的調(diào)控,但其對黃萎病菌的致病力具有較大的影響,說明VdPHB基因可能在黃萎病菌對棉花植株侵染定殖過程中起作用。
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S435.621.2
【圖文】：

圖 1、采用無縫克隆技術(shù)構(gòu)建敲除質(zhì)粒原理圖因的上游 UPSteam、潮霉素基因 Hyg-BOX、VdPHB 基因載體上。ig.1 Construction of knockout plasmids by seamless cloning tedPHB gene upstream, hygromycin Hyg-BOX, and downstre the knockout vector in turn.

圖 2、敲除載體構(gòu)建示意圖同源基因；Hyg：潮霉素基因；Down：VdPHB 上游同源Fig.2 the construction of knockout vectormologous genes of VdPHB; Hyg: Hygromycin gene;dPHB; HSV TK: Lethal genes

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2716821