【摘要】：昆蟲密度依賴的抗病性觀點(diǎn)已得到學(xué)術(shù)界的廣泛認(rèn)可,然而密度依賴的抗病免疫功能變化的分子機(jī)制尚不清楚。生物胺是昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)與免疫系統(tǒng)聯(lián)系的紐帶。已有研究表明,章魚胺對(duì)粘蟲幼蟲密度依賴的免疫功能具有重要調(diào)控作用。本文對(duì)高、低密度飼養(yǎng)的粘蟲幼蟲頭部、血細(xì)胞、脂肪體的轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析,篩選出粘蟲幼蟲密度依賴的免疫及其調(diào)控相關(guān)的基因,初步闡明粘蟲幼蟲密度依賴的抗病免疫的分子機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:室內(nèi)條件下(溫度23土1℃,RH70%±5%,光周期16L:8D)飼養(yǎng)的高、低密度(10、1頭/瓶)粘蟲幼蟲血淋巴對(duì)不同病原菌的抑制效果測(cè)定結(jié)果表明,高、低密度飼養(yǎng)的粘蟲幼蟲對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、弧菌和鯰愛德華氏菌的抑制效果存在顯著差異。10頭/瓶幼蟲血淋巴對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、弧菌和鯰愛德華氏菌的抑菌活力明顯高于1頭/瓶和對(duì)照組幼蟲。在供試36h范圍內(nèi),隨著時(shí)間的延長,抑菌作用愈加明顯。因此,粘蟲高密度幼蟲血淋巴抗菌能力顯著高于低密度幼蟲。為探明粘蟲幼蟲密度依賴的抗病能力變化的分子機(jī)制,對(duì)10、1頭/瓶飼養(yǎng)的粘蟲幼蟲頭部、血細(xì)胞、脂肪體進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析。通過功能注釋高、低密度粘蟲幼蟲三個(gè)組織的差異基因,共鑒定出免疫相關(guān)的基因模式識(shí)別蛋白19個(gè),抗菌肽基因25個(gè),酚氧化酶原級(jí)聯(lián)反應(yīng)相關(guān)的基因15個(gè),其他細(xì)胞免疫相關(guān)的有9個(gè),與調(diào)控免疫相關(guān)的生物胺合成酶及生物胺受體基因有6個(gè)。隨機(jī)選取4個(gè)抗菌肽基因進(jìn)行RT-PCR驗(yàn)證,結(jié)果表明,10頭/瓶飼養(yǎng)的粘蟲幼蟲體內(nèi)4個(gè)抗菌肽基因相對(duì)表達(dá)量均顯著高于1頭/瓶飼養(yǎng)的幼蟲,這與我們的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果均為一致。通過分析篩選出對(duì)免疫調(diào)控其關(guān)鍵作用的差異基因之一酪胺β羥化酶的功能進(jìn)一步深入研究。通過注射法RNA干擾高密度飼養(yǎng)(10頭/瓶)的粘蟲幼蟲酪胺-β羥化酶基因后,研究粘蟲幼蟲的血細(xì)胞總數(shù)、酚氧化酶活力及溶菌酶活力等免疫指標(biāo)及幼蟲抵抗蘇云金芽孢桿菌桿菌侵染能力的變化。結(jié)果表明,注射TβHdsRNA后高密度幼蟲的dsTβH基因表達(dá)量顯著下降。同時(shí),RNA干擾幼蟲的血細(xì)胞總數(shù)、溶菌酶活性、酚氧化酶活力分別下降55.77%、88.48%、82%。RNA干擾后幼蟲抵抗蘇云金芽孢桿菌的侵染能力明顯降低,幼蟲的校正存活率下降55.77%。結(jié)果表明,酪胺β羥化酶在粘蟲幼蟲密度依賴的抗病免疫過程中起重要作用。
【圖文】：

３．２不同密度粘蟲幼蟲血淋巴對(duì)３種革蘭氏陰性菌的抑菌活性逡逑添加不同密度粘蟲幼蟲血淋巴的弧菌（愛德華氏菌（￡邋／ｃ／ｄｗＷ）、逡逑嗜水氣單胞菌的吸光度值測(cè)定結(jié)果（見圖２－２Ｄ、Ｅ、Ｆ）表明，１逡逑頭／瓶、１０頭／瓶和對(duì)照組三種菌液吸光度變化都隨時(shí)間延長均呈增長趨勢(shì)�；【义显冢埃玻担璺秶鷥�(nèi)，１頭／瓶和空白對(duì)照組的菌液吸光度值無顯著差異，１０頭／瓶的逡逑菌液吸光度顯著低于其他兩個(gè)處理。２５ｈ后，吸光度值１頭／瓶的處理組明顯低于逡逑空白對(duì)照組，且隨著時(shí)間的延長，差異愈加明顯。說明，，１０頭／瓶的幼蟲血淋巴逡逑對(duì)弧菌的抑菌活性明顯高于１頭／瓶。逡逑愛德華氏菌在0－１３ｈ范圍內(nèi)，１０頭／瓶和空白對(duì)照組的菌液吸光度值有個(gè)輕逡逑微的下降趨勢(shì)，１頭／瓶的菌液吸光度值略高于其他兩組，隨后１８－２３ｈ三組處理逡逑無顯著差異。２３ｈ后３組處理的菌液吸光度以１０頭／瓶的幼蟲血淋巴一直明顯低逡逑于１頭／瓶和對(duì)照組且隨著時(shí)間的延長，差異愈加明顯。１頭／瓶和對(duì)照組的菌液逡逑吸光度值無顯著差異。說明，１０頭／瓶的幼蟲血淋巴對(duì)愛德華氏菌的抑菌活性明逡逑

１２邐揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文邐逡逑顯筒于１頭／瓶。逡逑嗜水氣單胞菌在0＿３６ｈ范圍內(nèi)，三種處理的菌液吸光度值無顯著差異。說明，逡逑１頭／瓶和１０頭／瓶的幼蟲血淋巴對(duì)嗜水氣單胞菌均無明顯的抑菌活性。綜上所述，逡逑與１頭／瓶的幼蟲相比，１０頭／瓶的幼蟲血淋巴對(duì)弧菌和愛德華氏菌有更強(qiáng)的抑菌逡逑活性，１頭／瓶和１０頭／瓶的幼蟲對(duì)嗜水氣單胞菌無抑制能力。逡逑Ａ邐Ｖｉｕｎｏ邐Ｂ邐Ｅｄｗａｒｄｓｕｒｌｌａ逡逑６邋邐邋１邋０邋－｜邐逡逑
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S433.4

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本文編號(hào)：2709521