【摘要】：昆蟲密度依賴的抗病性觀點已得到學術界的廣泛認可,然而密度依賴的抗病免疫功能變化的分子機制尚不清楚。生物胺是昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)與免疫系統(tǒng)聯(lián)系的紐帶。已有研究表明,章魚胺對粘蟲幼蟲密度依賴的免疫功能具有重要調(diào)控作用。本文對高、低密度飼養(yǎng)的粘蟲幼蟲頭部、血細胞、脂肪體的轉錄組學分析,篩選出粘蟲幼蟲密度依賴的免疫及其調(diào)控相關的基因,初步闡明粘蟲幼蟲密度依賴的抗病免疫的分子機制。主要研究結果如下:室內(nèi)條件下(溫度23土1℃,RH70%±5%,光周期16L:8D)飼養(yǎng)的高、低密度(10、1頭/瓶)粘蟲幼蟲血淋巴對不同病原菌的抑制效果測定結果表明,高、低密度飼養(yǎng)的粘蟲幼蟲對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、弧菌和鯰愛德華氏菌的抑制效果存在顯著差異。10頭/瓶幼蟲血淋巴對金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、弧菌和鯰愛德華氏菌的抑菌活力明顯高于1頭/瓶和對照組幼蟲。在供試36h范圍內(nèi),隨著時間的延長,抑菌作用愈加明顯。因此,粘蟲高密度幼蟲血淋巴抗菌能力顯著高于低密度幼蟲。為探明粘蟲幼蟲密度依賴的抗病能力變化的分子機制,對10、1頭/瓶飼養(yǎng)的粘蟲幼蟲頭部、血細胞、脂肪體進行了轉錄組測序分析。通過功能注釋高、低密度粘蟲幼蟲三個組織的差異基因,共鑒定出免疫相關的基因模式識別蛋白19個,抗菌肽基因25個,酚氧化酶原級聯(lián)反應相關的基因15個,其他細胞免疫相關的有9個,與調(diào)控免疫相關的生物胺合成酶及生物胺受體基因有6個。隨機選取4個抗菌肽基因進行RT-PCR驗證,結果表明,10頭/瓶飼養(yǎng)的粘蟲幼蟲體內(nèi)4個抗菌肽基因相對表達量均顯著高于1頭/瓶飼養(yǎng)的幼蟲,這與我們的轉錄組測序結果均為一致。通過分析篩選出對免疫調(diào)控其關鍵作用的差異基因之一酪胺β羥化酶的功能進一步深入研究。通過注射法RNA干擾高密度飼養(yǎng)(10頭/瓶)的粘蟲幼蟲酪胺-β羥化酶基因后,研究粘蟲幼蟲的血細胞總數(shù)、酚氧化酶活力及溶菌酶活力等免疫指標及幼蟲抵抗蘇云金芽孢桿菌桿菌侵染能力的變化。結果表明,注射TβHdsRNA后高密度幼蟲的dsTβH基因表達量顯著下降。同時,RNA干擾幼蟲的血細胞總數(shù)、溶菌酶活性、酚氧化酶活力分別下降55.77%、88.48%、82%。RNA干擾后幼蟲抵抗蘇云金芽孢桿菌的侵染能力明顯降低,幼蟲的校正存活率下降55.77%。結果表明,酪胺β羥化酶在粘蟲幼蟲密度依賴的抗病免疫過程中起重要作用。
【圖文】：

３．２不同密度粘蟲幼蟲血淋巴對３種革蘭氏陰性菌的抑菌活性逡逑添加不同密度粘蟲幼蟲血淋巴的弧菌（愛德華氏菌（￡邋／ｃ／ｄｗＷ）、逡逑嗜水氣單胞菌的吸光度值測定結果（見圖２－２Ｄ、Ｅ、Ｆ）表明，１逡逑頭／瓶、１０頭／瓶和對照組三種菌液吸光度變化都隨時間延長均呈增長趨勢。弧菌逡逑在０－２５ｈ范圍內(nèi)，１頭／瓶和空白對照組的菌液吸光度值無顯著差異，１０頭／瓶的逡逑菌液吸光度顯著低于其他兩個處理。２５ｈ后，吸光度值１頭／瓶的處理組明顯低于逡逑空白對照組，且隨著時間的延長，差異愈加明顯。說明，，１０頭／瓶的幼蟲血淋巴逡逑對弧菌的抑菌活性明顯高于１頭／瓶。逡逑愛德華氏菌在0－１３ｈ范圍內(nèi)，１０頭／瓶和空白對照組的菌液吸光度值有個輕逡逑微的下降趨勢，１頭／瓶的菌液吸光度值略高于其他兩組，隨后１８－２３ｈ三組處理逡逑無顯著差異。２３ｈ后３組處理的菌液吸光度以１０頭／瓶的幼蟲血淋巴一直明顯低逡逑于１頭／瓶和對照組且隨著時間的延長，差異愈加明顯。１頭／瓶和對照組的菌液逡逑吸光度值無顯著差異。說明，１０頭／瓶的幼蟲血淋巴對愛德華氏菌的抑菌活性明逡逑

１２邐揚州大學碩士學位論文邐逡逑顯筒于１頭／瓶。逡逑嗜水氣單胞菌在0＿３６ｈ范圍內(nèi)，三種處理的菌液吸光度值無顯著差異。說明，逡逑１頭／瓶和１０頭／瓶的幼蟲血淋巴對嗜水氣單胞菌均無明顯的抑菌活性。綜上所述，逡逑與１頭／瓶的幼蟲相比，１０頭／瓶的幼蟲血淋巴對弧菌和愛德華氏菌有更強的抑菌逡逑活性，１頭／瓶和１０頭／瓶的幼蟲對嗜水氣單胞菌無抑制能力。逡逑Ａ邐Ｖｉｕｎｏ邐Ｂ邐Ｅｄｗａｒｄｓｕｒｌｌａ逡逑６邋邐邋１邋０邋－｜邐逡逑
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：S433.4

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本文編號：2709521