【摘要】：本試驗以芍藥吸脹前(PIB)、吸脹后(PIA)、露白(PDA)、長芽(PUA)四個時期的雜交種子(♀‘粉玉奴’×♂‘粉玉樓’)作為試驗材料,成功從芍藥種子中獲得PlSAURs基因的cDNA全長,然后將構(gòu)建成功的表達載體借助農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法導(dǎo)入擬南芥植株中,為進一步了解PlSAURs基因?qū)π菝吲c萌發(fā)的作用奠定了良好的基礎(chǔ)。本試驗主要結(jié)果如下:1、為了研究PlSAURs基因在芍藥種子萌發(fā)不同關(guān)鍵期表達量的變化,分別提取種子四個關(guān)鍵時期的總RNA,通過實時熒光定量RT-PCR技術(shù)對PlSAURs基因進行表達量檢測,結(jié)果表明,PlSAUR1在露白時期表達量最高,PlSAUR2在長芽時期表達量最高,PlSAUR3在長芽時期表達量最高,PlSAUR4在吸脹后時期表達量最高。這也為最終確定PlSAURs基因克隆植物材料最適時期的選取奠定理論基礎(chǔ)。2、通過PCR擴增技術(shù),成功從芍藥種子里克隆得到PlSAURs基因:PlSAUR1開放閱讀框的全長是495 bp,共編碼164個氨基酸;PlSAUR2開放閱讀框的全長是381 bp,共編碼126個氨基酸;PlSAUR3開放閱讀框的全長是300 bp,共編碼99個氨基酸;PlSAUR4開放閱讀框的全長是558 bp,共編碼185個氨基酸。將所得PlSAURs基因的氨基酸序列分別與NCBI數(shù)據(jù)庫中已提交的植物氨基酸序列進行比對,選取相似度和序列覆蓋度高的同源序列,進行多序列的同源性比對和進化樹構(gòu)建,并利用在線軟件對PlSAURs的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)等生物信息學(xué)進行分析。3、將獲得的PlSAURs基因編碼區(qū)插入pBI121的植物表達載體中,借助農(nóng)桿菌介導(dǎo)法獲取擬南芥轉(zhuǎn)基因植株。通過在DNA、RNA水平上對轉(zhuǎn)基因植株的檢測表明,PlSAURs基因已經(jīng)被成功轉(zhuǎn)入擬南芥植株中。
【圖文】：

圖 2-1 芍藥種子總 RNA 電泳檢測Figure 2-1 Electrophoresis detection of total RN合成第一鏈 cDNA瓊脂糖凝膠電泳進行 cDNA 的質(zhì)量驗證得的條帶均在 200 bp 左右，符合預(yù)期，且比較成功，可以用于后續(xù)試驗。圖 2-2 反轉(zhuǎn)錄獲得的 cDNAFigure 2-2 Detection of cDNA100 bp→250 bp→500 bp→750 bp→1000bp→2000bp→

第二章 PlSAURs 基因表達分析圖 2-1 芍藥種子總 RNA 電泳檢測Figure 2-1 Electrophoresis detection of total R錄合成第一鏈 cDNA%的瓊脂糖凝膠電泳進行 cDNA 的質(zhì)量驗證所得的條帶均在 200 bp 左右，，符合預(yù)期，且錄比較成功，可以用于后續(xù)試驗。28→18→
【學(xué)位授予單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S682.12;Q943.2

【相似文獻】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 費日雯;芍藥PlSAURs基因的克隆及對擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化[D];沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

本文編號：2708073