發(fā)布時間：2020-06-05 15:30

【摘要】：目的:胃癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一,由于缺乏有效的早期檢測指標(biāo),胃癌患者就診發(fā)現(xiàn)時往往處于進(jìn)展期或晚期。近年來,隨著分子生物技術(shù)的完善,國內(nèi)外大量學(xué)者開始從遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)兩個層面深入探究胃癌發(fā)病的機(jī)制,其中表觀遺傳學(xué)已然成為目前主流的研究方向。它是指是在不改變DNA序列的情況下獲得遺傳表型變異,涵蓋了DNA甲基化、基因沉默等。大量研究表明抑癌基因啟動子區(qū)發(fā)生甲基化改變,將會導(dǎo)致胃癌的發(fā)生和發(fā)展。本研究旨在探討SPARC基因在胃癌不同細(xì)胞株和組織中的表達(dá)水平,分析其表達(dá)情況是否和某些臨床病理特征之間存在關(guān)系;研究SPARC基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)及其對胃癌患者臨床病理特征的影響;再通過質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)過表達(dá)SPARC基因,觀察其對胃癌細(xì)胞產(chǎn)生的生物學(xué)功能影響,明確SPARC基因?qū)ξ赴┘?xì)胞生物學(xué)功能的調(diào)控作用。方法:1.實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測正常人胃黏膜細(xì)胞株GES-1,和4株胃癌細(xì)胞株,66對配對樣本中的表達(dá)水平;2.采用甲基化特異性PCR(MSP)檢測在4株胃癌細(xì)胞和66對配對樣本組織中SPARC基因啟動子區(qū)是否存在異常甲基化,分析其與胃癌患者臨床病理特征的關(guān)系;并使用去甲基化藥物5-氮雜胞苷和乙�；种苿㏕SA處理低表達(dá)胃癌細(xì)胞BGC-823,對處理后的細(xì)胞中SPARC基因表達(dá)水平和啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)分析。3.構(gòu)建SPARC基因穩(wěn)定過表達(dá)轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞BGC-823后,CCK-8檢測細(xì)胞增殖能力,劃痕法檢測細(xì)胞遷移能力,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡和周期變化,Transwell小室方法檢測細(xì)胞侵襲能力的改變。結(jié)果:1.qRT-PCR的結(jié)果顯示:與正常胃黏膜細(xì)胞和非癌組織相比,在胃癌細(xì)胞和組織中SPARC基因的表達(dá)水平明顯下降(P0.05),且與患者的Borrmann分型(P=0.015)、TNM分期(P=0.001)和有無淋巴轉(zhuǎn)移(P=0.001)密切相關(guān)。2.MSP結(jié)果顯示在胃癌細(xì)胞和組織中SPARC基因的啟動子區(qū)分別存在不同程度的甲基化狀態(tài)的改變,而這些改變與胃癌患者的Borrmann分型(P=0.002)、TNM分期(P=0.001)和有無淋巴轉(zhuǎn)移(P=0.001)有關(guān)。使用藥物處理后發(fā)現(xiàn),單獨(dú)運(yùn)用去甲基化藥物后細(xì)胞的表達(dá)水平和啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)得到一定程度的逆轉(zhuǎn),而單獨(dú)運(yùn)用乙�；种苿┖蟛o明顯變化,聯(lián)合用藥與單獨(dú)使用去甲基化藥物的結(jié)果一致。3.通過過表達(dá)SPARC質(zhì)粒載體,構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的胃癌細(xì)胞BGC-823。采用CCK-8、劃痕法、流式細(xì)胞儀和Transwell等技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染后的胃癌細(xì)胞BGC-823生物學(xué)功能。結(jié)果表明:SPARC基因可抑制胃癌細(xì)胞株BGC-823的增殖、遷移、侵襲和周期,和促進(jìn)細(xì)胞凋亡。結(jié)論:1.SPARC基因在胃癌細(xì)胞株和癌組織中呈低表達(dá)狀態(tài)。2.SPARC基因在胃癌細(xì)胞和組織中低表達(dá)狀態(tài)受其啟動子區(qū)甲基化的影響,且與患者的Borrmann分型、TNM分期和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),使用去甲基化藥物5-Aza-Cdr可以恢復(fù)其表達(dá)水平和逆轉(zhuǎn)其甲基化狀態(tài)。3.SPARC基因可以明顯抑制胃癌細(xì)胞BGC-823的增殖、遷移和侵襲,阻滯細(xì)胞周期,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。4.SPARC基因參與調(diào)控胃癌發(fā)生、發(fā)展,在總個過程中起到抑癌基因的作用。
【圖文】：

和B四株胃癌細(xì)胞及正常胃黏膜細(xì)胞中SPARC基因mRNA和蛋白相對表達(dá)量C

10圖 1C 八對胃癌組織及配對的癌旁正常組織中 SPARC 基因蛋白表達(dá)量圖中 N 表示癌旁非癌組織，T 表示癌組織，*表示 P<0.05。.2 胃癌和癌旁配對組織中基因 SPARC 的表達(dá)水平和臨床病理學(xué)特之間的關(guān)系。我們采用 qRT-PCR 技術(shù)對 66 對篩選出來的胃癌組織和與其配對的癌旁非癌組
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.2

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本文編號：2698246