【摘要】：隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們生活水平的提高,心腦血管疾病已成為全世界范圍內(nèi)死亡的主要?dú)⑹?是人類共同面臨的健康問(wèn)題之一。其高發(fā)病率、高復(fù)發(fā)率、高致殘率、高病死率、以及并發(fā)癥多的特點(diǎn)使得心腦血管疾病是廣大公眾目前須長(zhǎng)期面對(duì)和解決的重大問(wèn)題。動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是導(dǎo)致冠心病、腦梗塞、腹主動(dòng)脈瘤、間歇性跛行以及慢性腎病等疾病的共同病理基礎(chǔ)。病理學(xué)研究證實(shí)AS是一種以炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、脂質(zhì)沉積、纖維組織增生為特征的慢性疾病,通常累及全身大、中型彈性動(dòng)脈和肌性動(dòng)脈。對(duì)AS發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)有多種理論,包括脂質(zhì)浸潤(rùn)學(xué)說(shuō)、炎癥反應(yīng)學(xué)說(shuō)、內(nèi)皮損傷學(xué)說(shuō)、和氧化應(yīng)激學(xué)說(shuō)等。脂質(zhì)代謝紊亂作為AS發(fā)生發(fā)展的重要誘因,具有至關(guān)重要的影響,在長(zhǎng)期血脂偏高的因素下,各種炎性因子及黏附因子表達(dá)增加,單核細(xì)胞穿越內(nèi)皮細(xì)胞移行至血管內(nèi)膜下,轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞,吞噬大量脂質(zhì)轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞。單核巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)從而形成泡沫細(xì)胞為AS進(jìn)程中的典型病理學(xué)特征。因此減少泡沫細(xì)胞的產(chǎn)生,抑制AS發(fā)生和發(fā)展,是心血管研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。近些年來(lái),新一代高通量測(cè)序技術(shù)迎來(lái)了突飛猛進(jìn)的發(fā)展,以此為基礎(chǔ),高通量RNA測(cè)序技術(shù)即RNA-seq也迅速進(jìn)展。與傳統(tǒng)的基因芯片技術(shù)比較,RNA-seq能在全基因組范圍內(nèi)使用單堿基分辨率檢測(cè)及量化轉(zhuǎn)錄本,無(wú)需使用探針,并能對(duì)基因組圖譜并未完成的生物物種進(jìn)行檢測(cè),不但分辨率高,且具有信噪比高、應(yīng)用范圍廣的優(yōu)勢(shì),正成為基因表達(dá)研究的重要實(shí)驗(yàn)手段及工具。梔子苷是從我國(guó)傳統(tǒng)清熱解毒類中藥梔子中提取的環(huán)烯醚萜苷類化合物,目前研究表明,梔子苷具有抗AS作用,與其抗氧化、抗炎、保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞、調(diào)脂、抑制平滑肌細(xì)胞增生等功能相關(guān),但機(jī)制尚未十分明確,猜測(cè)其可能具有調(diào)節(jié)泡沫細(xì)胞相關(guān)基因表達(dá)的作用�；诖�,我們?cè)O(shè)計(jì)了本次實(shí)驗(yàn),試圖從RNA測(cè)序角度研究其對(duì)泡沫細(xì)胞的基因表達(dá)作用,探索梔子苷抗AS作用的新機(jī)制。目的:基于RNA測(cè)序,研究解毒中藥梔子的主要活性成分梔子苷,對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞來(lái)源泡沫細(xì)胞基因的表達(dá)作用。方法:造模:選用RAW264.7細(xì)胞,通過(guò)ox-LDL誘導(dǎo)形成泡沫細(xì)胞模型;細(xì)胞毒性檢測(cè):用CCK-8法檢測(cè)不同濃度梔子苷對(duì)泡沫細(xì)胞的增殖及抑制作用,選出合適的濃度;分組:空白對(duì)照組、模型組、小劑量梔子苷組、大劑量梔子苷組;不同濃度梔子苷處理24小時(shí)后分別收集細(xì)胞,提取RNA,隨后進(jìn)行RNA樣品測(cè)序,并對(duì)差異表達(dá)基因進(jìn)行GO與Pathway富集分析。結(jié)果:細(xì)胞油紅0染色結(jié)果:經(jīng)過(guò)80ug/ml ox-LDL處理的RAW264.7來(lái)源細(xì)胞泡沫化最明顯,大部分細(xì)胞內(nèi)側(cè)聚集大量紅色脂質(zhì)顆粒,超過(guò)了細(xì)胞周長(zhǎng)的2/3;CCK-8法結(jié)果:梔子苷對(duì)RAW264.7來(lái)源泡沫細(xì)胞無(wú)細(xì)胞毒性作用;RNA測(cè)序結(jié)果:與空白對(duì)照組比較,模型組有大量異常高表達(dá)和低表達(dá)的基因。對(duì)這些異常的基因進(jìn)行GO與Pathway富集分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些被改變的基因涉及了多個(gè)與AS相關(guān)的功能及通路,如與脂質(zhì)代謝相關(guān)通路、MAPK信號(hào)通路、TOLL樣受體信號(hào)通路、血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移、平滑肌細(xì)胞增殖遷移、PPAR信號(hào)通路以及炎癥信號(hào)通路等;與模型組相比較,發(fā)現(xiàn)大、小劑量梔子苷(80μg/ml、30 μg/ml)能改變泡沫細(xì)胞中異常高表達(dá)或低表達(dá)基因,進(jìn)而調(diào)節(jié)MAPK信號(hào)通路、脂質(zhì)代謝相關(guān)等通路,且大劑量梔子苷在調(diào)節(jié)MAPK信號(hào)通路的同時(shí),能針對(duì)泡沫細(xì)胞中異常表達(dá)的Nr4a1基因和Fos基因進(jìn)行靶向上調(diào),從而達(dá)到抗AS的目的。結(jié)論:1.梔子苷可能通過(guò)調(diào)節(jié)MAPK靶信號(hào)通路來(lái)改善ox-LDL誘導(dǎo)的RAW264.7來(lái)源細(xì)胞泡沫化。2.梔子苷可能通過(guò)調(diào)節(jié)泡沫細(xì)胞中異常表達(dá)的Nr4a1基因和Fos基因來(lái)達(dá)到抗AS的目的。
【圖文】：

圖２分析流程圖逡逑２．６．２．?dāng)?shù)據(jù)分析結(jié)果逡逑２．６．２．１測(cè)序序列格式展示逡逑ＮＧＳ邋（Ｎｅｘｔ邋Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ邋Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，二代高通量測(cè)序）如：ｉｌｌｕｍｉｎａ邋Ｈｉｓｅｑ逡逑

°邐１２３４５６７８９邐１５－１９邋２５－２９邋３５－３９邋４５－４９邋５５－５９邋６５－６９邋７５－７９邋８５－８９邋９５－９９邐１１０－１１４邐１２５逡逑Ｐｏｓｉｔｉｏｎ邋ｉｎ邋ｒｅａｄ邋（ｂｐ）逡逑圖３邋Ｑ值盒圖統(tǒng)計(jì)示意圖逡逑基分布圖：用來(lái)觀測(cè)測(cè)序過(guò)程堿基均衡性，出現(xiàn)波動(dòng)是正常ＧＣ及ＡＴ堿基對(duì)均衡分布。逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R54

【參考文獻(xiàn)】

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1 孫龍飛;安冬青;;炎性信號(hào)通路在動(dòng)脈粥樣硬化中的機(jī)制與中醫(yī)藥干預(yù)作用研究進(jìn)展[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2015年11期

2 蔡智慧;任麗平;;梔子苷對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用[J];中國(guó)公共衛(wèi)生;2015年12期

3 彭銳;潘華峰;吳偉;吳輝;李榮;褚慶民;;從SRA信號(hào)通路研究黃芩苷對(duì)Ac-LDL+LPS誘導(dǎo)的與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的巨噬細(xì)胞凋亡的影響[J];中華中醫(yī)藥雜志;2015年08期

4 王恩力;董方;姚景春;;梔子苷藥理學(xué)和毒理學(xué)研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥房;2015年19期

5 王欣;張海燕;劉星星;方洋;賴瓊;羅光明;楊明;;梔子水提取物的抗血栓作用[J];中國(guó)新藥雜志;2015年08期

6 陳廣進(jìn);洪永敦;趙靜;傅思瑩;余鋒;;溫陽(yáng)活血解毒方對(duì)ApoE~(-/-)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊及斑塊內(nèi)血管新生的影響[J];中藥新藥與臨床藥理;2015年02期

7 彭孟云;朱曉寧;汪靜;;MAPK信號(hào)通路與非酒精性脂肪肝關(guān)系的研究進(jìn)展[J];廣東醫(yī)學(xué);2015年05期

8 黃雪君;孫冬梅;姚楠;黃丹娥;陳玉興;曾巧煌;;穿心蓮內(nèi)酯對(duì)新西蘭兔動(dòng)脈粥樣硬化的影響[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2015年03期

9 張智華;吳建紅;李德順;呂銀娟;王世友;朱光建;袁華品;;小陷胸湯合丹參飲含藥血清對(duì)Ang-Ⅱ損傷人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1表達(dá)的影響[J];湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2014年06期

10 馬曉娟;郭春雨;殷惠軍;劉s，

本文編號(hào)：2698414