發(fā)布時(shí)間：2020-05-31 18:46

【摘要】：水稻是世界上主要的糧食作物之一,目前世上超過一半的人口以稻米為主食。而淀粉是稻米胚乳最主要的成分,決定著稻米的品質(zhì)。因此,我們可通過調(diào)控水稻淀粉合成相關(guān)基因的表達(dá),來改良稻米的食味品質(zhì)�？扇苄缘矸酆铣擅�(SSS)是由多基因家族編碼,根據(jù)氨基酸同源性,可將SSS分為SSSⅠ、SSSⅡ、SSSⅢ以及SSSⅣ等4個(gè)亞家族,水稻中SSSⅡ有三種同工型,SSSⅡ-1、SSSⅡ-2和SSSⅡ-3。本研究是對(duì)本實(shí)驗(yàn)室已獲得的無抗性選擇標(biāo)記基因的轉(zhuǎn)OsSSSⅡ-2基因RNA干擾結(jié)構(gòu)水稻的中間試驗(yàn),以進(jìn)一步研究其品質(zhì)性狀及分子特性,結(jié)果如下:1.Real-time PCR分析結(jié)果表明,OsSSSⅡ-2基因在轉(zhuǎn)基因水稻中的表達(dá)量較受體親本明顯降低。2.通過對(duì)成熟稻米的品質(zhì)分析表明,轉(zhuǎn)基因水稻的直鏈淀粉含量較受體親本都是極顯著降低并與南粳46相當(dāng),其膠稠度也都是極顯著增加,說明轉(zhuǎn)基因水稻米質(zhì)變軟。3.通過淀粉粘滯性譜分析結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因水稻的糊化溫度都有所降低,其中崩解值相對(duì)親本都有所增加,消減值與回復(fù)值與親本相比都要明顯降低,說明米質(zhì)與親本相比變軟、更易糊化、有彈性,與南粳46相近,表明稻米的食味品質(zhì)得到了改善。4.通過米飯食味計(jì)測定和蒸煮食味品嘗結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因水稻的光澤、口感、外觀以及粘度都有所提升并且適口性和冷飯質(zhì)地均有所改善,與南粳46接近,說明轉(zhuǎn)基因稻米的蒸煮食味品質(zhì)得到了改良。5.對(duì)成熟水稻農(nóng)藝性狀調(diào)查結(jié)果表明,除轉(zhuǎn)基因水稻的千粒重及部分轉(zhuǎn)基因株系的株高與受體親本相比有極顯著降低之外,其他農(nóng)藝性狀較受體親本沒有明顯變化,原因可能是影響了淀粉合成后對(duì)千粒重產(chǎn)生影響。同時(shí)轉(zhuǎn)基因水稻的外觀品質(zhì)與受體親本相比無明顯變化,且優(yōu)于南粳46。6.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果表明五個(gè)獨(dú)立轉(zhuǎn)化子來源的轉(zhuǎn)基因水稻目的基因插入均為單拷貝。7.通過反向PCR的方法確定了 SSSⅡ-2-5、SSSⅡ-2-13和SSSⅡ-2-23這三個(gè)轉(zhuǎn)化子外源基因的插入位點(diǎn),其目的基因插入位點(diǎn)分別在水稻第2、11和5號(hào)染色體上。
【圖文】：

徐志豪：無抗性選擇標(biāo)記轉(zhuǎn)ＱｓＳ怒／／－２基因ＲＮＡ干擾結(jié)構(gòu)水稻的品質(zhì)分析及其分子特性研宄邐１７逡逑二、材料與方法逡逑２．１實(shí)驗(yàn)材料逡逑本研宄所用水稻材料為抗條武運(yùn)粳８號(hào)、ＳＳＳＩＩ－２－５、ＳＳＳＩＩ－２－９、ＳＳＳＩＩ－２－１３、ＳＳＳＩＩ－２－２３、逡逑ＳＳＳｎ－２－１６、以及兩個(gè)軟米品種南粳邋４６邋（ＮＪ４６）。其中邋ＳＳＳＩＩ－２－５、ＳＳＳＩＩ－２－９、ＳＳＳＩＩ－２－１３、逡逑ＳＳＳＩＩ－２－２３和ＳＳＳＩＩ－２－１６為不含抗性選擇標(biāo)記基因的轉(zhuǎn)Ｍ５／／－２基因ＲＮＡ干擾結(jié)構(gòu)水稻，逡逑是以粳稻抗條武運(yùn)粳８號(hào)為受體、經(jīng)根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)超雙元載體法轉(zhuǎn)化獲得的共轉(zhuǎn)化植株逡逑后代中篩選出的。本研宄使用這８個(gè)水稻材料進(jìn)行小區(qū)種植，每個(gè)小區(qū)１00苗，每個(gè)小區(qū)逡逑種植３個(gè)重復(fù)。圖２．１．１為用于共轉(zhuǎn)化的超雙元載體的Ｔ－ＤＮＡ區(qū)。逡逑

本實(shí)驗(yàn)是采用反向ＰＣＲ和ＴＡＩＬ－ＰＣＲ技術(shù)相結(jié)合的方式擴(kuò)增轉(zhuǎn)基因水稻中Ｔ－ＤＮＡ區(qū)逡逑的側(cè)翼序列，在Ｔ－ＤＮＡ的ＬＢ端酶切位點(diǎn)前設(shè)計(jì)三對(duì)巢式引物（ＳＰ１和ＳＰ２、ＳＰ３和ＳＰ４、逡逑ＳＰ５和ＳＰ６，引物序列的位置見圖２．６），分別用這三對(duì)引物進(jìn)行三輪ＰＣＲ擴(kuò)增外源片段。逡逑然后取適量擴(kuò)增產(chǎn)物和水稻基因組ＤＮＡ進(jìn)行酶切，酶切體系為３0４，其中ＤＮＡｄｕｇ／ｐｌ）逡逑２￣４ｎｌ，擴(kuò)增產(chǎn)物４ｎｌ，ｌ0ｘｂｕｆｆｅｒ３ｊｉｌ，酶１？３ｎｌ，剩余用ｄｄＨ２０補(bǔ)足。反應(yīng)條件為：溫度逡逑依酶而定，３￣５ｈ，邋７２°Ｃ失活ｌＯｍｉｎ，�。担懊盖挟a(chǎn)物，用１％瓊脂糖凝膠電泳檢測。然后將逡逑產(chǎn)物進(jìn)行回收、純化和連接。純化步驟為：①加入１／１０體積的３Ｍ醋酸納（ＰＨ５．２）和２逡逑倍體積的冷無水乙醇，一２０°Ｃ，ｌｈ；②０°Ｃ，邋１４０００ｒｐｍ，離心３０ｍｉｎ；③棄上清，，加ｌｍｌ逡逑乙醇（７０％），０°Ｃ，１２０００ｒｐｍ，離心ｌＯｍｉｎ；④棄上清，空氣中干燥。⑤加１０｜Ｌｉｌ邋ＴＥ１．０溶逡逑解。酶切產(chǎn)物的連接體系為３0４，其中ｄｄＨ２０邋１６４，邋Ｔ４邋ＤＮＡｌｉｇａｓｅｌｕｌ，ＤＮＡ邋１（＾１，邋１０逡逑ｘＴ４邋ＤＮＡ邋ｌｉｇａｓｅ邋ｂｕｆｆｅｒ邋３ｐｌ。反向邋ＰＣＲ邋第一輪擴(kuò)增引物為邋５７１－Ｓ１邋ＴＣＴＡＧＴＡＡＣＡＴＡ逡逑
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S511

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 朱霽暉;張昌泉;顧銘洪;劉巧泉;;水稻W(wǎng)x基因的等位變異及育種利用研究進(jìn)展[J];中國水稻科學(xué);2015年04期

2 郭桂英;趙全志;王青林;余新春;馬漢云;扶定;沈光輝;霍二偉;;稻米食味品質(zhì)改良研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2012年02期

3 錢雪艷;楊向東;郭東全;趙桂蘭;王丕武;;植物葉綠體遺傳轉(zhuǎn)化及研究進(jìn)展[J];分子植物育種;2008年05期

4 李俊輝;朱智偉;謝黎虹;;我國稻米食味品質(zhì)的研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢[J];中國稻米;2008年02期

5 李軼女;孫丙耀;蘇寧;孟祥勛;張志芳;沈桂芳;;水稻葉綠體表達(dá)體系的建立及抗PPT葉綠體轉(zhuǎn)化植株的獲得[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年09期

6 辜瓊瑤;盧義宣;劉小利;李華慧;涂鍵;郭詠梅;;云南軟米資源研究與利用[J];云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年02期

7 何瑞鋒;王媛媛;杜波;唐明;游艾青;祝莉莉;何光存;;水稻雙元細(xì)菌人工染色體載體系統(tǒng)轉(zhuǎn)化體系的建立(英文)[J];遺傳學(xué)報(bào);2006年03期

8 王為民,趙倩,于靜娟,朱登云,敖光明;水稻轉(zhuǎn)高賴氨酸蛋白質(zhì)基因(sb401)植株的獲得及種子中蛋白質(zhì)和氨基酸的含量分析[J];作物學(xué)報(bào);2005年05期

9 周玲艷,姜大剛,吳豪,莊楚雄,劉耀光,梅曼彤;基于TAC載體的水稻轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的建立[J];遺傳學(xué)報(bào);2005年05期

10 朱昌蘭,沈文飚,翟虎渠,萬建民;水稻低直鏈淀粉含量基因育種利用的研究進(jìn)展[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2004年02期

本文編號(hào)：2690301