【摘要】：古菌是一種區(qū)別于真核生物和細菌的生物,分為廣古菌和泉古菌,其中嗜鹽古菌是廣古菌的一類分支,在高于30%鹽濃度中也能夠生長。蛋白酶是催化水解蛋白質(zhì)的一類酶,主要作用于氨基酸間的肽鍵。蛋白酶在醫(yī)藥化工、食品生產(chǎn)以及釀酒紡織等多個方面具有廣泛的應(yīng)用價值。為了研究古菌來源的蛋白酶,本研究根據(jù)GenBnak中與本實驗室保存的嗜鹽古菌Natrinema-IM-1屬于同一屬的Natrinema-sp-J7-2的全基因組序列,分析其基因組序列,設(shè)計了特異性引物,成功克隆出Natrinema-IM-1的3種不同的蛋白酶基因,并與pET-28a(+)原核表達載體進行連接,成功構(gòu)建出3個重組表達載體,分別命名為pET-28a-MDP、pET-28a-SP、pET-28a-P。該研究為在大腸桿菌中進行嗜鹽古菌的protease、serine protease、Metal-dependent protease表達,分析它們的酶活性打下了基礎(chǔ),也為進一步開發(fā)利用嗜鹽古菌蛋白酶提供了實驗數(shù)據(jù)及理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

學(xué)家們對于地球上生命分類的認知[1]。1977 年，經(jīng)過微生物學(xué)家 Woese 列研究提出：這些在極端條件下也能生存的微生物與細菌和真核生物有著別。且 Woese 等人在研究過后首次提出了 Archaebacteria 這一概念。他們核生物、原核生物和古菌這三類生物的 16SrRNA 序列后，提出了有關(guān)于“三域?qū)W說”，即地球上的生命不僅僅有原核生物和真核生物兩大類，它們菌域（Bacteria）、古菌域（Archaea）、以及真核生物域（Eucarya）三部把 Archaebacteria 改為了 Archaea，這就使得古菌與細菌之間有了更加明。并由此構(gòu)建了一個生物進化總樹，如圖 1。古菌是一類單細胞生物，它著非常獨特的基因結(jié)構(gòu)以及系統(tǒng)發(fā)育生物的大分子序列。大部分的古菌能端環(huán)境中生活，，有的古菌甚至能夠存活在極高的溫度（100℃以上）條件部分古菌能夠在極端寒冷的環(huán)境中或者高鹽、強酸強堿性的水中生存[1]。地球上古菌代表著生命的極限，它拓展了生物圈的范圍，例如熱網(wǎng)菌dictium）能夠在高達 121℃的溫度下存活下來，并正常生長，這是截止到的最耐高溫的生物[3]。

料所用菌株采自于內(nèi)蒙古錫林郭勒盟東烏珠穆沁旗額吉淖爾鹽堿湖、純化、保存且經(jīng)過鑒定的 Natrinema- IM-1 菌種。態(tài)細胞過程中所用到的大腸桿菌感受態(tài)細胞為大腸桿菌 DH5α 感受態(tài)細21（DE3）感受態(tài)細胞，分別購于天根生化科技有限公司、北京全公司。進行過程中，所要用到的質(zhì)粒如下：pGM-T 克隆載體：由天根生化科技有限公司購買。pET-28a（+）質(zhì)粒為本實驗室所保存的通用表達載體，其質(zhì)粒圖譜
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：Q78;Q93

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 杭鋒;劉沛毅;穆海菠;王欽博;劉振民;陳衛(wèi);;細菌來源金屬蛋白酶的研究進展[J];工業(yè)微生物;2015年06期

2 王繼蓮;李明源;陳蕓;;蛋白酶基因的克隆與表達研究進展[J];食品科學(xué);2015年23期

3 蔣敏芝;黃秋雨;;古菌氨氧化與amoA基因的擴增[J];上�；�;2012年06期

4 賀紀正;沈菊培;張麗梅;;土壤中溫泉古菌研究進展[J];生態(tài)學(xué)報;2009年09期

5 胡學(xué)智;王俊;;蛋白酶生產(chǎn)和應(yīng)用的進展[J];工業(yè)微生物;2008年04期

6 汪世華;王文勇;黃益洲;林琳;沙莉;;絲氨酸蛋白酶研究進展[J];福建農(nóng)業(yè)學(xué)報;2007年04期

7 鄧小紅;任海芳;;PCR技術(shù)詳解及分析[J];重慶工商大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2007年01期

8 毛健民,李季平;古菌[J];生物學(xué)教學(xué);2002年04期

9 李t;新的生命形式—極端微生物[J];陰山學(xué)刊;2000年05期

10 王振雄,徐毅,周培瑾;嗜鹽堿古生菌新種的系統(tǒng)分類學(xué)研究[J];微生物學(xué)報;2000年02期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 李雯;猴免疫缺陷病毒p27基因的克隆、表達、單克隆抗體制備及鑒定[D];華中科技大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前5條

1 韓瑞;古菌Pyrobaculum calidifontis的QueF-like的腈類還原酶活性鑒定[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 宋倩;內(nèi)蒙古額吉淖爾鹽堿湖嗜鹽古菌的分離及其bop基因克隆[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 李慧;大腸桿菌雙順反子表達載體中各基因轉(zhuǎn)錄與表達水平的研究[D];天津大學(xué);2009年

4 韓劍;新疆羅布泊嗜鹽細菌的多樣性及產(chǎn)酶特性研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

5 謝瑩;鹽井嗜鹽菌多樣性的初步研究[D];昆明理工大學(xué);2007年

本文編號：2686480