【摘要】：本課題選用8981基因?yàn)槟康幕?通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因轉(zhuǎn)入植物基因組中,本課題主要進(jìn)行后期鑒定,利用除草劑、PCR、生理篩選、Southern雜交以及Tail-PCR等技術(shù),最終獲得能夠穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)基因旱稻新品系。具體研究結(jié)果有以下幾點(diǎn):(1)候選純合株系的篩選在試驗(yàn)田采用濃度為0.8mg/mL的草銨膦進(jìn)行噴灑,篩選出97個(gè)具有抗除草劑的抗性株系進(jìn)行PCR鑒定,篩選出候選純合株系93個(gè),雜合株系4個(gè)。(2)抗性株系鑒定及突變體篩選將篩選出的93個(gè)候選純合株系,通過NaCl脅迫后得到8個(gè)比野生型耐鹽性強(qiáng)的株系、PEG脅迫后得到7個(gè)比野生型抗旱性強(qiáng)的株系、極限實(shí)驗(yàn)篩選出高抗除草劑的株系93個(gè)以及目前最高的除草劑耐受濃度8mg/mL;并獲得了具有特殊農(nóng)藝性狀的矮桿株系6個(gè)以及籽粒飽滿的株系33個(gè)。(3)Southern雜交分析本實(shí)驗(yàn)采用地高辛試劑盒進(jìn)行Southern雜交,從25個(gè)株系中篩選出了能夠穩(wěn)定遺傳的單拷貝轉(zhuǎn)基因株系2個(gè);二拷貝轉(zhuǎn)基因株系12個(gè);多拷貝轉(zhuǎn)基因株系11個(gè)。(4)TAIL-PCR分析目的基因的插入位點(diǎn)將得到的能夠穩(wěn)定遺傳的2個(gè)單拷貝轉(zhuǎn)基因株系2-9-5、2-19-5分別進(jìn)行TAIL-PCR鑒定,確定了株系2-9-5目的基因的插入位點(diǎn)在10號(hào)染色體Os10g0351500基因中,此基因編碼Tyrosine protein;株系2-19-5目的基因的插入位點(diǎn)在1號(hào)染色體Os01g0884300基因中,此基因編碼NAW protein。
【圖文】：

圖 2-1 質(zhì)粒的提取草劑抗性篩選2 所示，分別表示株系未經(jīng)除草劑噴灑前及經(jīng)除草劑2-7-4、2-8-1 經(jīng) 0.8mg/mL 草銨膦噴灑后 8d，植株WT）對(duì)照組植株全部死亡，如圖 2-2 所示，可以表；但是 3-2-1 株系有個(gè)別植株葉片出現(xiàn)變黃、干枯、如圖 2-2 所示。

圖 2-1 質(zhì)粒的提取抗除草劑抗性篩選 2-2 所示，分別表示株系未經(jīng)除草劑噴灑前及經(jīng)除草劑噴灑后的生1-3、2-7-4、2-8-1 經(jīng) 0.8mg/mL 草銨膦噴灑后 8d，植株更壯，并無死（WT）對(duì)照組植株全部死亡，如圖 2-2 所示，可以表明 2-1-3、2-7系；但是 3-2-1 株系有個(gè)別植株葉片出現(xiàn)變黃、干枯、死亡，說明，如圖 2-2 所示。
【學(xué)位授予單位】：河北科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S511.6

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2686242