【摘要】：目的:通過(guò)本實(shí)驗(yàn)研究,認(rèn)識(shí)到微量元素鋅在腭突融合期對(duì)腭突組織發(fā)育的作用與影響,進(jìn)一步篩選參與該過(guò)程的腭裂與正常發(fā)育腭突組織之間鋅指蛋白Sp家族相關(guān)差異候選基因,以期為人類預(yù)防腭裂的發(fā)生提供理論依據(jù)。方法:1.用富鋅飼料(含鋅100 mg/kg)、常鋅飼料(含鋅30 mg/kg)、低鋅飼料(含鋅5 mg/kg)及缺鋅飼料(含鋅0 mg/kg)四種飼料分別喂養(yǎng)四組孕鼠。每組孕鼠各3只于ED14.5脫頸處死,取其胚胎頭部進(jìn)行石蠟包埋和石蠟切片的制作,分別進(jìn)行蘇木精-伊紅染色觀察腭胚突融合期腭突組織形態(tài)發(fā)育狀況和TUNEL染色觀察腭胚突融合期細(xì)胞凋亡情況。2.對(duì)富鋅組、常鋅組、缺鋅組每組孕鼠各3只于ED14.5脫頸處死,取出胎鼠。在體視顯微鏡下,使用DEPC處理過(guò)的手術(shù)器械及器皿來(lái)分離腭突組織,隨后用Trizol法提取腭突組織中total RNA。質(zhì)檢合格后送基因公司再次質(zhì)檢上樣。通過(guò)安捷倫m RNA表達(dá)譜芯片雜交,收集三組基因表達(dá)情況并相互比較組間差異表達(dá),采用2倍表達(dá)差異倍數(shù)對(duì)差異基因進(jìn)行篩選并分析鋅指蛋白Sp家族基因是否有表達(dá)差異。結(jié)果:1.富鋅組腭突組織發(fā)育較好形成完整腭板,常鋅組雙側(cè)腭突組織正在接觸融合,低鋅組雙側(cè)腭突組織上抬完成水平向靠近且距離較遠(yuǎn),不能融合形成腭裂,缺鋅組雙側(cè)腭突組織垂直向生長(zhǎng)且發(fā)育短小,不能融合形成腭裂。2.富鋅組腭板間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)可見零星較少凋亡細(xì)胞,常鋅組腭板內(nèi)凋亡細(xì)胞稍高且集中在腭中縫及周圍間質(zhì)細(xì)胞的腭板中間區(qū)域,低鋅組雙側(cè)腭突組織間質(zhì)細(xì)胞可見較多凋亡細(xì)胞,缺鋅組雙側(cè)腭突組織間質(zhì)細(xì)胞可見大量凋亡細(xì)胞。3.富鋅組相對(duì)于缺鋅腭裂組2倍差異表達(dá)基因?yàn)?63個(gè),富鋅組相對(duì)于常鋅組2倍差異表達(dá)基因?yàn)?7個(gè),缺鋅腭裂組相對(duì)于常鋅組2倍差異表達(dá)基因?yàn)?7個(gè)。4.富鋅組相對(duì)于缺鋅腭裂組2倍差異表達(dá)基因?yàn)?63個(gè),其中上調(diào)差異基因?yàn)?13個(gè),下調(diào)差異基因150個(gè),在篩選出這些與腭裂相關(guān)的顯著下調(diào)差異基因中,發(fā)現(xiàn)Sp5位于其中。富鋅組Sp5平均表達(dá)量比缺鋅腭裂組Sp5平均表達(dá)量低6.787452825倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.缺鋅條件下腭突間質(zhì)細(xì)胞的凋亡細(xì)胞最多且腭突組織發(fā)育較差,阻礙腭突組織的發(fā)育。富鋅條件下腭中縫上皮提前消失,腭突間質(zhì)細(xì)胞的凋亡細(xì)胞最少且腭突組織發(fā)育較好形成完整腭板,促進(jìn)腭突組織的發(fā)育。微量元素鋅在腭突融合期對(duì)于腭的發(fā)育起到關(guān)鍵的促進(jìn)作用。2.鋅指蛋白Sp5基因可能為腭裂Sp家族候選基因,Sp5對(duì)腭突組織的發(fā)育可能起到負(fù)性調(diào)控的作用。
【圖文】：

圖 1 ED14.5 胎鼠形態(tài)圖Fig. 1 ED14.5 fetal mice form figure注：A 為存活胎鼠，B 為死胎胎鼠。Note:Ais a live fetal mouse , B is a stillborn fetal mouse.鋅組、常鋅組、低鋅組、缺鋅組形態(tài)學(xué)蘇木精—伊紅染色實(shí)鋅飼養(yǎng)孕鼠，其子代胎鼠成活率為 100 %，ED 14.5 雙側(cè)腭板上抬完成圖 2A）；常鋅飼養(yǎng)孕鼠，其子代胎鼠成活率為 100 % ，ED 14.5 雙側(cè)完成并接近融合（圖 2B）；低鋅飼養(yǎng)孕鼠，其子代胎鼠成活率為 91.42 %板上抬且相距較遠(yuǎn)不能融合（圖 2C）；缺鋅飼養(yǎng)孕鼠，其子代胎鼠成%，ED 14.5 雙側(cè)腭板垂直向生長(zhǎng)或正在上抬，雙側(cè)腭板無(wú)法融合（圖

圖 2 蘇木精—伊紅染色實(shí)驗(yàn)圖片F(xiàn)ig.2 Hematoxylin - eosin staining experimental images注：A 為富鋅組、B 為常鋅組、C 為低鋅組、D 為缺鋅組ote：Ais the rich zinc group, B is the normal zinc group, C is the low zinc group, and D is the zinc deficien3 富鋅組、常鋅組、低鋅組、缺鋅組腭突組織細(xì)胞凋亡 TUNEL 圖片ED 14.5，缺鋅組和低鋅組腭突組織形態(tài)較小，發(fā)育不佳，腭突間質(zhì)組織胞較多（圖 3C、D）；常鋅組雙側(cè)腭板形態(tài)飽滿，發(fā)育較好，雙側(cè)腭突組部位表面黏膜及周圍組織細(xì)胞凋亡較多，正在融合過(guò)程中（圖 3B）；富鋅突組織融合完成形成完整腭板，，發(fā)育較佳，腭板組織內(nèi)凋亡細(xì)胞較少（圖
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R782.22

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2686569