發(fā)布時間：2020-05-26 16:42

【摘要】：目的利用生物信息學(xué)和雙熒光素酶實驗篩選、驗證靶向調(diào)控絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥腎陰虛證關(guān)聯(lián)基因CLCF1的microRNA(miRNAs),并對篩選出的miRNAs進(jìn)行體內(nèi)驗證,旨在miRNAs調(diào)節(jié)水平探索絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥腎陰虛證的分子實質(zhì)。方法1.microRNA篩選:①用生物信息學(xué)軟件根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則預(yù)測與目的基因CLCF1基因3'非編碼區(qū)(3'Non encoding area,3'UTR)存在互補(bǔ)作用的miRN As;②對生物信息學(xué)篩選出的miRNAs,用雙熒光素酶進(jìn)行實驗驗證其與CLCF1的靶向調(diào)控關(guān)系。2.miR-655的體內(nèi)驗證:①隨機(jī)選取福州漢族絕經(jīng)后女性進(jìn)行問卷調(diào)查,并根據(jù)《中醫(yī)虛證辨證參考標(biāo)準(zhǔn)》和《中國人骨質(zhì)疏松癥診斷標(biāo)準(zhǔn)專家共識》及雙能X線骨密度儀對實驗對象進(jìn)行篩選,共篩選出131例,并分組:PMOP腎陰虛證組50例、PMOP腎陽虛證組33例、健康對照組48例;②利用qRT-PCR和we stern blot技術(shù)檢測三組hsa-miR-655、CLCF1mRNA及蛋白表達(dá)水平,研究hsa-miR-655與PMOP腎陰虛證的相關(guān)性。結(jié)果1.microRNA 篩選和驗證結(jié)果:①CLCF1 的靶標(biāo) miRNAs:TargetScan 44 個,miRanda 21 個,microrna 27 個,三者的交集共有 5 個:hsa-miR-655、hsa-miR-300、hsa-miR-381、hsa-miR-374c、hsa-miR-515;②用雙熒光素酶對篩選出的 5個靶標(biāo)miRNAs進(jìn)行的實驗驗證,篩選出表達(dá)差異性最顯著的一組,后續(xù)做進(jìn)一步的實驗分析。實驗結(jié)果顯示:與對照組相比較,hsa-miR-655組熒光活性下調(diào)至33.09%,(P=0.001),對CLCF1 3'UTR的基因表達(dá)水平抑制作用最為顯著;hsa-miR-655與CLCF1 3'UTR結(jié)合位點發(fā)生突變后,熒光活性上調(diào)至67.22%,提示CLCF1 3'UTR的基因表達(dá)水平受hsa-miR-655特異性的抑制作用。實驗結(jié)果表明:CLCF1基因的3'UTR能夠與hsa-miR-655發(fā)生特異性結(jié)合,特異性的抑制CLCF 1基因的表達(dá)。2.hsa-miR-655與PMOP腎陰虛證相關(guān)性實驗研究:(①三組實驗研究對象一般資料年齡、絕經(jīng)年齡、BMI進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)比較,三組一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義;②用2-△△Ct法對三組的CLCF1 mRNA和has-miR-655表達(dá)水平進(jìn)行相對定量分析:PMOP腎陰虛證組CLCF1 mRNA表達(dá)量明顯低于健康對照組,P0.01,比較有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義;PMOP腎陰虛證組has-miR-655表達(dá)水平顯著高于健康對照組(P0.01),統(tǒng)計學(xué)有顯著性差異;PMOP腎陰虛證組與PMOP腎陽虛證組的CLCF1 mRNA和has-miR-655表達(dá)水平比較無顯著性差異(P0.05);③用wester blot法檢測三組CLCF1蛋白的表達(dá)情況:健康對照組:0.564±0.158,P MOP腎陰虛證組:0.325±0.125,PMOP腎陽虛證組:0.474±0.178,PMOP腎陰虛證組CLCF1蛋白表達(dá)水平明顯低于健康對照組,P0.01,比較有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義;PMOM腎陰虛證組與PMOP腎陽虛證組比較無顯著性差異(P0.05)。結(jié)論Hsa-miR-655能夠通過靶向結(jié)合CLCF1 mRNA的3'UTR區(qū),在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)性調(diào)控絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥腎陰虛證。
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R259

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王丹;田付華;;腎陰虛證研究概況[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2008年04期

2 張小虎,趙嫻;腎陰虛證實驗研究的現(xiàn)狀與思索[J];陜西中醫(yī)函授;2001年01期

3 申紅強(qiáng);曹明明;;探討滋陰補(bǔ)腎中藥治療糖尿病腎陰虛證的臨床效果[J];糖尿病新世界;2017年12期

4 原雪;李福鳳;王憶勤;;腎陰虛證本質(zhì)的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展[J];遼寧中醫(yī)雜志;2012年09期

5 嚴(yán)惠芳,馬居里;對腎陰虛證動物實驗研究的理性思考[J];中醫(yī)藥學(xué)刊;2004年06期

6 于立志;于春泉;;腎陰虛證癥狀表現(xiàn)規(guī)律的系統(tǒng)評價[J];天津中醫(yī)藥;2011年05期

7 陳小燕;;腎陰虛證客觀化研究的現(xiàn)狀與思考[J];陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2006年01期

8 嚴(yán)惠芳,馬居里;對腎陰虛證動物實驗研究現(xiàn)狀分析與思考[J];陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2003年06期

9 王彬;韓永龍;;腎陰虛證的代謝組學(xué)研究[J];西部中醫(yī)藥;2015年03期

10 張技;韓玉萍;羅梅;;2型糖尿病腎陰虛證患者差異lncRNA的篩選及分析[J];中醫(yī)雜志;2018年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 謝麗華;李生強(qiáng);許惠娟;陳娟;賴玉鏈;邱龍龍;倪晨波;葛繼榮;;利用基因芯片技術(shù)從血液和骨組織中篩選絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥腎陰虛證的差異表達(dá)基因[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

2 謝麗華;趙毅鵬;陳可;賴玉鏈;葛繼榮;;絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松腎陰虛證相關(guān)基因的信息學(xué)分析[A];中華醫(yī)學(xué)會第三次骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病中青年學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

3 馮興中;尹英杰;李銳;姜敏;周銘;盧葦;張永祥;;六味地黃湯治療糖尿病腎陰虛證與非腎陰虛證的臨床實驗研究[A];六味地黃類中成藥與方劑——臨床應(yīng)用研究論文集[C];2012年

4 于曉霞;盛麗;;滋腎液治療腎陰虛證臨床觀察小結(jié)[A];’98全國中藥研究暨中藥房管理學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];1998年

5 王學(xué)良;羅仁;;亞健康狀態(tài)流行病學(xué)調(diào)查及其腎陰虛證的蛋白組學(xué)研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會亞健康分會換屆選舉暨“‘治未病’及亞健康防治論壇”論文集[C];2008年

6 連方;姜曉媛;;腎陰虛證、腎陽虛證不孕患者卵巢顆粒細(xì)胞基因表達(dá)譜研究[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會生殖醫(yī)學(xué)分會首屆學(xué)術(shù)年會暨生殖醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會成立大會論文匯編[C];2014年

7 李婷;;糖尿病腎病患者高同型半胱氨酸水平的中醫(yī)腎虛分型[A];中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會第十六次全國學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

8 黃堯州;謝雁鳴;崔天紅;高蕊;馬海波;李承軍;涂人順;李映歐;;骨健膠囊治療原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥(腎陰虛證)臨床研究[A];全國老年骨質(zhì)疏松專題學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2000年

9 閻博華;李朝敏;王仲;暴鵬;余潔;邵明義;畢京峰;;六味地黃軟膠囊治療消渴病(2型糖尿病)腎陰虛證的臨床研究[A];第十三次全國臨床藥理學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2012年

10 賈麗娜;王興娟;;辨證論治對多囊卵巢綜合征血清睪酮胰島素影響的臨床觀察[A];第三屆江浙滬中西醫(yī)結(jié)合高峰論壇論文匯編[C];2011年

相關(guān)重要報紙文章 前4條

1 鐘華遠(yuǎn);老年人要注意防止腎陰虛[N];中國中醫(yī)藥報;2005年

2 張霞;六味地黃丸專攻腎陰虛證[N];上海中醫(yī)藥報;2003年

3 顧劉寶 卞茸文;2型糖尿病腎陰虛證有家族聚集傾向[N];中國醫(yī)藥報;2006年

4 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 張明雪;腎陰虛證與腎精不足證鑒別[N];中國中醫(yī)藥報;2013年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 趙曉山;腎陰虛證相關(guān)基因的初步研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

2 張技;糖尿病腎陰虛證lncRNA/mRNA表達(dá)譜的研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2016年

3 魏敏;腎陰虛證和腎陽虛證基因表達(dá)譜的比較研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

4 孫曉敏;腎陰虛證的血漿蛋白組學(xué)初步研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2008年

5 尹英杰;六味地黃丸（湯）異病同治規(guī)律的理論與臨床研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2003年

6 唐楊;陰陽互根理論在腎虛證中的臨床應(yīng)用及機(jī)制探討[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

7 李悅;基于骨代謝探討腎陰虛證與腎陽虛證PM0P的差異及兩種補(bǔ)腎法的干預(yù)機(jī)制[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 馬海珍;基于miRNA介導(dǎo)的CLCF1基因翻譯調(diào)控功能探討絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥腎陰虛證分子機(jī)制[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2018年

2 陳小燕;糖尿病腎病腎陰虛證與內(nèi)皮素-1相關(guān)性的臨床研究[D];陜西中醫(yī)學(xué)院;2006年

3 雷洋;間寧湯治療經(jīng)間期出血腎陰虛證的臨床觀察[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2015年

4 陳敏敏;百合知母湯及其有效部位治療圍絕經(jīng)期綜合征腎陰虛證的藥理作用與機(jī)理研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2009年

5 趙毅鵬;絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥腎陰虛證相關(guān)基因初探[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2011年

6 畢建璐;腎陽虛證和腎陰虛證血漿蛋白表達(dá)譜的比較研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

7 陳舒芳;知柏地黃湯加用制大黃、百令膠囊對CKD2、3期腎陰虛證的臨床療效觀察[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

8 丁銘;老年高血壓腎虛證的動脈功能研究Ⅱ[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2009年

9 余f*f*;維腎膏對慢性腎臟病非透析患者生存質(zhì)量影響的研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2014年

10 李林;腎俞貼敷療法治療慢性再生障礙性貧血的機(jī)理研究及臨床療效觀察[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2011年

，

本文編號：2682124