【摘要】：大量研究表明,在畜禽及水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖中長(zhǎng)期大量使用抗菌藥物導(dǎo)致耐藥菌株出現(xiàn),養(yǎng)殖動(dòng)物攜帶的耐藥細(xì)菌可以通過(guò)直接接觸、食物鏈和環(huán)境污染等將其耐藥性及耐藥基因傳播給人類(lèi),對(duì)人類(lèi)的健康造成嚴(yán)重威脅,這已構(gòu)成一個(gè)巨大的世界性公共衛(wèi)生問(wèn)題。氟喹諾酮類(lèi)藥物是一類(lèi)人工合成的抗菌藥物,因具有廣譜、優(yōu)秀的藥物動(dòng)力學(xué)性能和強(qiáng)大的抗菌活性、以及與其他類(lèi)抗菌藥物之間沒(méi)有交叉耐藥性等特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)中。我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)量居于世界首位,水產(chǎn)品已成為人們?nèi)粘Ｊ澄锏闹匾M成部分。因此,開(kāi)展水產(chǎn)品攜帶的細(xì)菌對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物耐藥性、耐藥基因存在情況檢測(cè)和分析,具有重要意義,可以為食品安全監(jiān)管監(jiān)測(cè)提供科學(xué)依據(jù)。本研究以市售羅非魚(yú)水產(chǎn)品為研究對(duì)象,從廣州市超市、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)等水產(chǎn)品交易市場(chǎng)隨機(jī)購(gòu)買(mǎi)鮮活的羅非魚(yú)商品魚(yú),開(kāi)展水產(chǎn)品攜帶的細(xì)菌耐藥性和耐藥基因檢測(cè)分析。首先,利用高通量測(cè)序方法分析水產(chǎn)品攜帶的優(yōu)勢(shì)菌群;然后運(yùn)用細(xì)菌篩選培養(yǎng)結(jié)合分子生物學(xué)鑒定方法分離鑒定目標(biāo)細(xì)菌;采用瓊脂二倍稀釋法對(duì)分離菌株進(jìn)行氟喹諾酮類(lèi)藥物敏感性測(cè)試;最后采用PCR擴(kuò)增的方法檢測(cè)分析分離菌株P(guān)MQR基因攜帶和QRDR靶基因突變情況;為水產(chǎn)品中攜帶的耐藥細(xì)菌和耐藥基因風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估積累科學(xué)數(shù)據(jù)。細(xì)菌分離和藥敏檢測(cè)結(jié)果顯示:市售羅非魚(yú)商品魚(yú)各組織的優(yōu)勢(shì)菌均為氣單胞菌和大腸埃希菌;從廣州市14家水產(chǎn)品交易市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)的100條羅非魚(yú)樣品的鰓、肌肉和腸組織中共分離出280株氣單胞菌和182株大腸埃希菌;氣單胞菌對(duì)恩諾沙星和環(huán)丙沙星的耐藥率分別為2.50%和2.14%;大腸埃希菌對(duì)恩諾沙星和環(huán)丙沙星的耐藥率分別為25.82%和18.13%。大腸埃希菌對(duì)受試藥物的耐藥率高于氣單胞菌,不同組織中分離的細(xì)菌耐藥率存在差異,肌肉中分離的細(xì)菌耐藥率最低。PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:從分離的氣單胞菌菌株中只檢測(cè)到qnrS和aac(6')-Ib-cr兩種PMQR基因,攜帶率分別為4.29%和2.86%;而從大腸埃希菌分離菌株中檢測(cè)出qnrB、qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxAB和qnrD五種PMQR基因,攜帶率分別為12.64%、36.81%、9.89%、11.54%和0.55%。大腸埃希菌PMQR基因攜帶率高于氣單胞菌,且種類(lèi)也較多。QRDR靶基因突變結(jié)果顯示,103株發(fā)生QRDR靶基因突變的氣單胞菌中有98株(95.1%)發(fā)生了gyrA基因突變、5株(4.85%)只發(fā)生parC基因突變,而發(fā)生gyr A和parC基因雙突變的有41株(39.8%);103株發(fā)生了QRDR靶基因突變的氣單胞菌只有7株(6.8%)表現(xiàn)出對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物耐藥。60株發(fā)生QRDR靶基因突變的大腸埃希菌中,41株(68.3%)發(fā)生gyrA基因突變、19株(31.7%)只發(fā)生par C突變,有17株(28.3%)發(fā)生了gyrA和parC基因雙突變;60株發(fā)生了QRDR靶基因突變的大腸埃希菌有34株(56.7%)表現(xiàn)出對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物耐藥。研究結(jié)果表明:市售羅非魚(yú)水產(chǎn)品中氣單胞菌和大腸埃希菌是主要攜帶的細(xì)菌種群,不論是對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物的耐藥率、PMQR基因種類(lèi)還是PMQR基因的攜帶率分離的大腸埃希菌均高于氣單胞菌,水產(chǎn)品攜帶的氟喹諾酮類(lèi)耐藥細(xì)菌和PMQR耐藥基因風(fēng)險(xiǎn)主要與大腸埃希菌有關(guān)。肌肉中分離的氣單胞菌和大腸埃希菌對(duì)恩諾沙星和/或環(huán)丙沙星的耐藥率均低于鰓和腸道的,顯示羅非魚(yú)可食用部分?jǐn)y帶的耐藥菌很少,食品相對(duì)安全;水產(chǎn)品攜帶的細(xì)菌耐藥性風(fēng)險(xiǎn)主要來(lái)自腸道和鰓組織。此外,比較分析大腸埃希菌和氣單胞菌攜帶PMQR基因、QRDR基因突變與耐藥表型之間的相關(guān)性發(fā)現(xiàn),兩種細(xì)菌對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物的耐藥機(jī)制可能存在不同,具體差異還有待進(jìn)一步研究。
【圖文】：

圖3-1 qnrB基因PCR電泳圖1-11：部分樣品PCR產(chǎn)物；M:DL2000；P:陽(yáng)性對(duì)照Fig.3-1 PCR amplification products of qnrB genes.

圖3-2 aac(6')-Ib-cr基因PCR電泳圖1-8：部分樣品PCR產(chǎn)物；M:DL2000;P:陽(yáng)性對(duì)照;N:陰性對(duì)照Fig.3-2 PCR amplification products of aac(6')-Ib-cr genes.
【學(xué)位授予單位】：上海海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S943

【參考文獻(xiàn)】

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1 周向陽(yáng);江玲麗;相興偉;邵宏宏;周秀錦;施進(jìn);萬(wàn)婧;劉穎;;水產(chǎn)品中金黃色葡萄球菌的藥敏分析和耐藥基因的檢測(cè)[J];中國(guó)抗生素雜志;2014年12期

2 程波;李樂(lè);康銅;黃磊;宋懌;;中國(guó)羅非魚(yú)質(zhì)量安全現(xiàn)狀調(diào)查分析[J];中國(guó)漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn);2014年06期

3 鄧冠華;查龍應(yīng);張國(guó)霞;王玉;黎耀濤;彭欣;周宏偉;劉移民;;高通量16S rRNA標(biāo)簽測(cè)序法比較人與不同動(dòng)物腸道微生物組多樣性[J];生態(tài)科學(xué);2014年05期

4 譚愛(ài)萍;鄧玉婷;姜蘭;吳雅麗;馮永永;黃玉萍;羅理;王偉利;;養(yǎng)殖龜鱉源氣單胞菌耐藥性與質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮類(lèi)耐藥基因分析[J];水產(chǎn)學(xué)報(bào);2014年07期

5 黃玉萍;鄧玉婷;姜蘭;譚愛(ài)萍;吳雅麗;王偉利;羅理;;復(fù)合水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中氣單胞菌耐藥性及其同源性分析[J];中國(guó)水產(chǎn)科學(xué);2014年04期

6 方一風(fēng);潘曉藝;藺凌云;沈錦玉;尹文林;姚嘉峗;郝貴杰;徐洋;;嗜水氣單胞菌對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物耐藥的分子機(jī)制[J];微生物學(xué)報(bào);2014年02期

7 梁利國(guó);謝駿;;青魚(yú)病原嗜水氣單胞菌分離鑒定、毒力因子檢測(cè)及藥敏試驗(yàn)[J];生態(tài)學(xué)雜志;2013年12期

8 黃文明;王利;冀國(guó)楨;韋璇;王海娟;趙靜;茍小蘭;龍鐘明;;胭脂魚(yú)維氏氣單胞菌和中間氣單胞菌的鑒定及藥物敏感性[J];水產(chǎn)科學(xué);2013年04期

9 吳雅麗;鄧玉婷;姜蘭;譚愛(ài)萍;薛慧娟;王偉利;羅理;趙飛;;廣東省水產(chǎn)動(dòng)物源氣單胞菌對(duì)抗菌藥物的耐藥分析[J];上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào);2013年02期

10 林居純;覃春紅;賴(lài)婧;舒剛;吳聰明;;食品動(dòng)物源沙門(mén)氏菌質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮類(lèi)耐藥基因的檢測(cè)與分析[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào);2012年05期

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1 葉蕾;廣州市水產(chǎn)養(yǎng)殖品中耐藥共生菌分布及耐藥基因傳播機(jī)制的研究[D];華南理工大學(xué);2012年

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1 譚愛(ài)萍;水產(chǎn)動(dòng)物源氣單胞菌耐藥性與質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮類(lèi)耐藥研究[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

2 苑青艷;豬鏈球菌對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物耐藥性與耐藥基因的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

3 符幸濤;實(shí)驗(yàn)室誘導(dǎo)志賀菌屬耐喹諾酮類(lèi)抗生素靶基因突變時(shí)序檢測(cè)[D];鄭州大學(xué);2007年

4 楊海燕;臨床分離志賀菌屬細(xì)菌多重耐藥機(jī)制的研究[D];鄭州大學(xué);2003年

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本文編號(hào)：2665042