【摘要】：目的:構(gòu)建穩(wěn)定沉默細(xì)胞分裂周期蛋白25A(CDC25A)基因的人肝癌HepG2細(xì)胞模型。方法:通過構(gòu)建能夠沉默CDC25A基因表達(dá)的慢病毒RNA干擾載體,感染人肝癌HepG2細(xì)胞,再采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western blot方法驗(yàn)證該基因的沉默效率。結(jié)果:構(gòu)建出穩(wěn)定沉默CDC25A基因的人肝癌細(xì)胞,經(jīng)檢測(cè)其CDC25A基因mRNA及蛋白質(zhì)的表達(dá)水平均呈下調(diào),且CDC25A基因的沉默效率在50%左右。結(jié)論:利用慢病毒載體和RNA干擾技術(shù),可以成功構(gòu)建穩(wěn)定沉默CDC25A基因人肝癌HepG2細(xì)胞株。目的:應(yīng)用基因芯片技術(shù)研究沉默CDC25A基因后Hep G2細(xì)胞的差異基因表達(dá),尋找與CDC25A基因相關(guān)的上下游基因。方法:采用Affymetrix人基因表達(dá)譜芯片,篩選沉默CDC25A基因后Hep G2細(xì)胞的差異表達(dá)基因,進(jìn)一步行IPA(Ingenuity Pathway Analysis)分析。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證芯片結(jié)果中部分細(xì)胞周期相關(guān)差異表達(dá)基因的表達(dá)水平。結(jié)果:通過Affymetrix人基因表達(dá)譜芯片篩選,在沉默CDC25A基因后的人肝癌Hep G2細(xì)胞中,顯著差異表達(dá)基因共有1453個(gè),其中上調(diào)基因有789個(gè),下調(diào)基因有664個(gè)�；贗PA軟件,對(duì)顯著差異表達(dá)基因進(jìn)行經(jīng)典信號(hào)通路富集,結(jié)果發(fā)現(xiàn)顯著差異表達(dá)基因主要涉及IL-6信號(hào)通路、細(xì)胞周期通路、P53信號(hào)通路、PI3K/AKT信號(hào)通路、Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)傳導(dǎo)、c AMP介導(dǎo)的信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路等。其中IL-6信號(hào)通路被顯著抑制,細(xì)胞周期通路亦被抑制。另外,疾病與功能分析顯示Progression of tumor被顯著抑制。q RT-PCR檢測(cè)證實(shí),在沉默CDC25A基因的肝癌Hep G2細(xì)胞中,CCND1、CDKN1A、CDC42、IL6、MAP4K4和CXCL8等細(xì)胞周期通路相關(guān)基因均表現(xiàn)下調(diào),與基因芯片結(jié)果一致。結(jié)論:采用人基因表達(dá)譜芯片,成功篩選出了沉默CDC25A基因后人肝癌Hep G2細(xì)胞中細(xì)胞周期相關(guān)的差異表達(dá)基因,為探究CDC25A基因影響肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)提供了線索。
【圖文】：

圖 1-1 RNAi 慢病毒的構(gòu)建包裝流程圖Figure1-1 The flowchart of RNAinterference lentiviral vector construction and packing其中對(duì)上海吉?jiǎng)P基因公司構(gòu)建的慢病毒載體中的 PCR 陽性克隆進(jìn)行測(cè)序，經(jīng)過測(cè)序序列比對(duì)，結(jié)果顯示其與本課題組前期驗(yàn)證所得的干擾靶點(diǎn)一致，如圖 1-2。

圖 1-1 RNAi 慢病毒的構(gòu)建包裝流程圖Figure1-1 The flowchart of RNAinterference lentiviral vector construction and packing其中對(duì)上海吉?jiǎng)P基因公司構(gòu)建的慢病毒載體中的 PCR 陽性克隆進(jìn)行序，經(jīng)過測(cè)序序列比對(duì)，結(jié)果顯示其與本課題組前期驗(yàn)證所得的干擾靶一致，如圖 1-2。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.7

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊春悅;馬桂琴;李連賀;張宏;方亞群;;下咽癌中CDC25A基因的表達(dá)及臨床意義[J];臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2012年09期

2 袁銳;劉曉群;朱培謙;閔素芳;;CDC25A在結(jié)直腸腺癌中的表達(dá)[J];南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年09期

3 苑召虎;胡子有;姚芳;張?zhí)m蘭;顏曉慧;李科;曾勇;吳炳義;;槲皮素對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期相關(guān)蛋白cdc25A的影響[J];中國神經(jīng)精神疾病雜志;2013年01期

4 王靜;劉亮;李金梅;劉江惠;郭建文;左連富;;青蒿琥酯抗人食管癌作用與調(diào)控CDC25A表達(dá)的關(guān)系[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2007年05期

5 張利宣;曲藝;;表沒食子兒茶素沒食子酸酯調(diào)控CDC25A表達(dá)與抑制食管癌細(xì)胞增殖作用及機(jī)制[J];中國藥業(yè);2015年09期

6 劉亮;劉江惠;巨英超;周榮秒;王光大;;胃腺癌CDC25A表達(dá)及青蒿琥酯干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2017年07期

7 郭艷;王茜;楊志杰;;原發(fā)性肝細(xì)胞癌CDC25A的表達(dá)與多普勒超聲影像特征的關(guān)聯(lián)性分析[J];世界華人消化雜志;2013年26期

8 王靜;劉亮;李金梅;劉江惠;郭建文;左連富;;青蒿琥酯抗人食管癌作用與調(diào)控CDC25A、TGFβ有關(guān)[J];腫瘤;2007年04期

9 王靜;劉亮;李金梅;劉江惠;郭建文;左連富;;青蒿琥酯抑制人食管癌Eca-109細(xì)胞系的CDC25A表達(dá)[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2007年02期

10 劉天德;余新;袁榮發(fā);王慶諾;楊志強(qiáng);邵江華;;Rock2對(duì)細(xì)胞周期檢查點(diǎn)Cdc25A的調(diào)節(jié)作用[J];中國病理生理雜志;2012年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前6條

1 王靜;李金梅;劉亮;劉江惠;郭建文;左連富;;CDC25A及Smad3在食管鱗狀細(xì)胞癌的表達(dá)及其意義[A];第五屆全國中醫(yī)藥免疫學(xué)術(shù)研討會(huì)——暨環(huán)境·免疫與腫瘤防治綜合交叉會(huì)議論文匯編[C];2009年

2 王靜;左連富;劉亮;李金梅;劉江惠;郭建文;;青蒿琥酯抗人食管癌作用及其對(duì)CDC25A、TGF β的調(diào)控[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

3 葉俊杰;謝叢華;梅自潔;;CDC25A基因的表達(dá)高低影響肺腺癌H1299細(xì)胞株的放射敏感性(摘要)[A];第四屆湖北省抗癌協(xié)會(huì)青年委員會(huì)學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2012年

4 李金梅;王靜;左連富;劉江惠;郭建文;;CDC25A、CDC25B在食管鱗癌中的表達(dá)及其生物學(xué)意義[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

5 劉亮;王靜;左連富;劉江惠;郭建文;;利用動(dòng)物模型研究青蒿琥酯抗食管癌機(jī)制[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會(huì)暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

6 朱秀明;吳靈嬌;楊榮;王強(qiáng)鳳;蔣晗;吳福生;吳國清;;MicroRNA let-7c在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)、功能及靶點(diǎn)研究[A];首屆浙贛兩省腫瘤研究交流會(huì)論文匯編[C];2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 葉俊杰;CDC25A影響肺癌細(xì)胞系放射敏感性的研究[D];武漢大學(xué);2013年

2 張暉;四種發(fā)育調(diào)控因子mRNA在早期雞胚中的分布及其在胚胎發(fā)育中的作用研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 何盼;沉默CDC25A基因后肝癌HepG2細(xì)胞差異表達(dá)基因的篩選[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2018年

2 盧曉旭;應(yīng)用基因富集及Meta分析方法跨種屬篩選肝癌關(guān)鍵基因及候選分子Cdc25a的驗(yàn)證[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2013年

3 王浜琴;CDC25A、CDC25B、TGF-β1蛋白在非霍奇金淋巴瘤中的表達(dá)和臨床意義[D];中南大學(xué);2011年

4 胡磊;Cdc25A抑制RIG-Ⅰ介導(dǎo)的信號(hào)通路機(jī)制研究[D];安徽大學(xué);2014年

5 李薇;RNA干擾技術(shù)沉默CDC25a基因?qū)θ烁伟〩epG2細(xì)胞增殖和裸鼠移植瘤的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年

6 張桂東;Survivin、VEGF-C、CyclinD1、CDC25A和PCNA在膽管癌中的表達(dá)及意義的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

7 趙璞;CyclinE、CDK2、p57和CDC25A在胃癌中的表達(dá)及其意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

8 張?jiān)诒?糖尿病大鼠心肌梗死后缺血區(qū)miRNA-503及其靶基因CCNE1和cdc25A的動(dòng)態(tài)變化[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

9 馬海霞;急性羰基鎳中毒對(duì)大鼠DNA加合物及損傷修復(fù)相關(guān)基因Chk1和Cdc25A表達(dá)的影響研究[D];蘭州大學(xué);2009年

10 張鳳枝;低劑量棉酚與甾體激素聯(lián)合用藥對(duì)大鼠睪丸Cdc25A、cyclin B1及AR蛋白表達(dá)的影響[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

，

本文編號(hào)：2658925