【摘要】：WRKY基因作為重要的轉(zhuǎn)錄因子主要參與響應(yīng)植物生物和非生物脅迫。桉樹(shù)作為華南地區(qū)第一大造林樹(shù)種,受到焦枯病、青枯病、寒害等生物和非生物的危害。桉樹(shù)中的WRKY蛋白可能參與到桉樹(shù)響應(yīng)逆境脅迫。因此本研究利用已完成測(cè)序的桉樹(shù)基因組為基礎(chǔ),結(jié)合生物信息學(xué)分析,系統(tǒng)地對(duì)巨桉WRKY家族基因進(jìn)行了分析。在此基礎(chǔ)上采用RT-PCR對(duì)EgrWRKY基因在不同組織中的表達(dá)進(jìn)行分析,通過(guò)熒光定量PCR分析其響應(yīng)不同激素處理(SA、MeJA、BR)和脅迫處理(冷脅迫、鹽脅迫)的基因差異表達(dá)分析。試驗(yàn)結(jié)果表明,巨桉79個(gè)EgrWRKY基因主要分布在染色體Chl3、Chl7、Chlll上,約占35%的WRKY基因參與基因復(fù)制現(xiàn)象。EgrWRKY轉(zhuǎn)錄因子分為Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ組,第二組分為Ⅱa至Ⅱ亞組。EgrWRKY基因的啟動(dòng)子分析鑒定了與應(yīng)激和防御反應(yīng)相關(guān)的各種順式作用元件。8個(gè)EgrWRKY基因在花,成熟葉和根中顯示出更高的表達(dá)。此外,葉中的表達(dá)譜顯示響應(yīng)于植物激素和非生物脅迫的多種表達(dá)模式。所有EgrWRKY基因顯示對(duì)至少一種非生物脅迫處理的不同程度的反應(yīng),除了三個(gè)EgrWRKY基因未檢測(cè)到以外。大多數(shù)EgrWRKY基因在響應(yīng)于植物激素處理時(shí)被上調(diào)。此外,許多EgrWRKY基因在168小時(shí)的鹽脅迫后上調(diào)。此外,EgrWRKY基因主要在兩個(gè)和六個(gè)小時(shí)的冷應(yīng)激后誘導(dǎo)。值得注意的是,幾個(gè)EgrWRKY基因表達(dá)譜顯示對(duì)不同的處理的共反應(yīng),表明多種應(yīng)激抵抗相關(guān)的功能。這些發(fā)現(xiàn)有助于確定EgrWRKY基因功能和加強(qiáng)理解WRKY基因在桉樹(shù)應(yīng)激后的復(fù)雜調(diào)控機(jī)制。除此之外,本研究開(kāi)展了EgrWRKY70的克隆和初步功能鑒定。研究表明,巨桉EgrWRKY70基因編碼321個(gè)氨基酸,蛋白分子量為36.18 kDa,含有一個(gè)WRKY結(jié)構(gòu)域,屬于Ⅲa類(lèi)成員。從進(jìn)化樹(shù)分析看,EgrWRKY70與麻風(fēng)樹(shù)的JcuWRKY70的進(jìn)化關(guān)系最近,相似性可達(dá)到58.2%。半定量RT-PCR分析表明,EgrWRKY70主要在巨桉葉片、根和花中表達(dá),而在莖部表達(dá)量較低。實(shí)時(shí)定量qRT-PCR分析顯示,WgrWRKY70基因在低溫脅迫下,表達(dá)量驟然上升然后下降。而在鹽脅迫下EgrWRKY70基因表達(dá)仍保持較高水平。在油菜素內(nèi)酯和水楊酸處理時(shí),EgrWRKY70基因能夠快速的響應(yīng),然而在使用茉莉酸甲酯處理時(shí)其表達(dá)量沒(méi)有發(fā)生明顯的變化。由此表明,EgrWRKY70能夠通過(guò)不同的響應(yīng)方式參與桉樹(shù)生物和非生物脅迫的應(yīng)答。
【圖文】：

圖１巨桉ＷＲＫＹ基因的染色體位置逡逑Ｆｉｇ．ｌ邋Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ邋ｌｏｃａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ邋ｇｒａｎｄｉｓ＇Ｗ＾ＫＹ邋ｇｅｎｅｓ逡逑

圖５邋￡＾ＷＲ／ｉｒｙ基因各種順式作用元件的數(shù)目逡逑Ｆｉｇ．５邋Ｔｈｅ邋ｎｕｍｂｅｒ邋ｏｆ邋ＥｇｒＷＲＫＹ邋ｇｅｎｅｓ邋ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ邋ｖａｒｉｏｕｓ邋ｍ－ａｃｔｉｎｇ邋ｅｌｅｍｅｎｔｓ逡逑
【學(xué)位授予單位】：海南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：Q943.2;S792.39

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2653924