微滴式數(shù)字PCR定量監(jiān)測(cè)C-KIT基因突變水平在核心結(jié)合因子白血病中的臨床意義

發(fā)布時(shí)間：2020-05-07 21:25

【摘要】：目的:C-KIT基因在核心結(jié)合因子急性髓系白血病(CBF-AML)患者中的發(fā)生率為30-50%,伴C-KIT基因突變的CBF-AML(本研究中用CBF-AML-CK表示)患者預(yù)后差,標(biāo)準(zhǔn)化治療達(dá)到完全緩解(CR)后易復(fù)發(fā),因此緩解期的MRD監(jiān)測(cè)對(duì)患者意義重大,目前主要通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測(cè)RUNX1-RUNX1T1或CBFβ/MYH11融合基因水平,以及流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)異常表型的白血病細(xì)胞(LAIP)比例等。本研究旨在利用微滴式數(shù)字PCR(ddPCR)研究CR時(shí)C-KIT基因突變水平與預(yù)后的關(guān)系,從而將C-KIT基因作為分子標(biāo)志物監(jiān)測(cè)MRD,為預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)、評(píng)估預(yù)后、及時(shí)調(diào)整治療方案等提供臨床指導(dǎo)。方法:1、收集20例CBF-AML-CK患者的骨髓標(biāo)本并提取DNA、RNA保存。2、采用基于MGB探針的ddPCR技術(shù),在DNA水平絕對(duì)定量20例CBF-AMLCK患者的C-KIT基因突變水平。3、采用基于TaqMan探針的RT-qPCR技術(shù),在cDNA水平檢測(cè)20例CBF-AMLCK患者的RUNX1-RUNX1T1或CBFβ/MYH11融合基因水平。4、普通PCR法擴(kuò)增C-KIT基因并進(jìn)行Sanger一代測(cè)序法檢測(cè)20例CBF-AMLCK患者的C-KIT基因突變。5、應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)20例CBF-AML-CK患者的異常表型白血病細(xì)胞的比例。結(jié)果:1、根據(jù)隨訪期間患者是否復(fù)發(fā)將20例CBF-AML-CK患者分為持續(xù)緩解組和復(fù)發(fā)組,CR時(shí)C-KIT基因平均突變水平在持續(xù)緩解組(6例)為0.07324±0.32116%,在復(fù)發(fā)組(14例)為8.79605±4.44686%,兩組之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.005)。2、CR時(shí)C-KIT基因的突變水平與相應(yīng)的RUNX1-RUNX1T1或CBFβ/MYH11融合基因的表達(dá)水平的相關(guān)系數(shù)為0.618,兩指標(biāo)之間的相關(guān)性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004)。3、根據(jù)CR時(shí)C-KIT基因的突變水平分組,與低水平組相比,高水平組的一年復(fù)發(fā)率高(P=0.004)、一年生存率低(P=0.039),兩組之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、CR時(shí)C-KIT基因的突變水平與一年復(fù)發(fā)率、生存率、OS、EFS、CRD之間的相關(guān)系數(shù)均比RUNX1-RUNX1T1或CBFβ/MYH11融合基因表達(dá)水平高,并且動(dòng)態(tài)結(jié)果顯示C-KIT基因的突變水平在復(fù)發(fā)前上升程度更明顯、時(shí)間更提前。5、ddPCR、RT-qPCR、FCM、Sanger一代測(cè)序四種方法檢測(cè)MRD的結(jié)果比較顯示ddPCR的陽(yáng)性檢出率最高,并且與其他方法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Sanger一代測(cè)序?qū)?fù)發(fā)的預(yù)測(cè)與其它三種方法相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.008),ddPCR、RT-qPCR與其他方法相比對(duì)生存的預(yù)測(cè)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.003,P=0.021)。6、四種方法檢測(cè)得到的MRD結(jié)果與預(yù)后的關(guān)系比較顯示:年齡≥11.5歲、男性患者、LAIP比例高、C-KIT基因突變水平高、SWOG分組未達(dá)到CRm均為影響預(yù)后的不利因素。結(jié)論:1、CR時(shí)C-KIT基因的突變水平是影響CBF-AML-CK患者預(yù)后的重要因素,C-KIT基因可以作為MRD分子學(xué)標(biāo)志。2、ddPCR技術(shù)比其他技術(shù)更能敏感地反映患者的MRD情況。
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