發(fā)布時(shí)間：2020-05-07 03:40

【摘要】：桃屬于薔薇科李屬植物,是我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)果樹。由于桃易腐爛、不耐貯藏,年供應(yīng)期較短。選育不同成熟期的品種可有效延長(zhǎng)桃果實(shí)的年供應(yīng)期。因此果實(shí)成熟期是桃的重要經(jīng)濟(jì)性狀也是育種的重要目標(biāo)之一,鑒定并研究桃果實(shí)成熟期相關(guān)基因可為今后的轉(zhuǎn)基因育種工作提供優(yōu)良的基因資源,同時(shí)對(duì)桃分子標(biāo)記輔助育種工作的開展也具有重要意義。(1)本文以199份桃種質(zhì)資源為試材驗(yàn)證前人針對(duì)單個(gè)雜交群體開發(fā)的11個(gè)與桃果實(shí)成熟有關(guān)的分子標(biāo)記,其中NAC72-Indel標(biāo)記可以較好地區(qū)分出極早熟和晚熟品種。這表明該位點(diǎn)可能含有調(diào)控桃果實(shí)成熟期的重要基因。(2)通過分析桃NAC72-Indel位點(diǎn)基因組序列,發(fā)現(xiàn)PpNAC72與PpNAC56串聯(lián)在一起,基因間隔19,863 bp。同時(shí),分析發(fā)現(xiàn)番茄和甜瓜中與果實(shí)成熟有關(guān)的位點(diǎn),NOR和ETHQV6.3,也存在兩個(gè)NAC基因串聯(lián)在一起的現(xiàn)象,且兩個(gè)NAC基因分別與PpNAC72和PpNAC56高度同源。這表明桃PpNAC56和PpNAC72基因串聯(lián)現(xiàn)象在果實(shí)成熟調(diào)控中可能扮演了非常重要的角色。(3)克隆并測(cè)序桃PpNAC72、PpNAC56基因的編碼區(qū)序列,序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn)PpNAC56與桃參考基因組序列之間無差異;PpNAC72存在兩種轉(zhuǎn)錄本,與參考序列相比,其中一種轉(zhuǎn)錄本(PpNAC72m)含一個(gè)9 bp插入。對(duì)PpNAC72和PpNAC56基因qRT-PCR分析發(fā)現(xiàn),PpNAC72基因的轉(zhuǎn)錄水平在果實(shí)成熟前期都出現(xiàn)一個(gè)轉(zhuǎn)錄高峰,隨后轉(zhuǎn)錄水平平緩下降;而PpNAC56基因在三個(gè)品種整個(gè)果實(shí)成熟過程中表現(xiàn)出較高的轉(zhuǎn)錄水平。這意味PpNAC72可能直接參與果實(shí)的成熟期調(diào)控。(4)利用酵母雙雜交系統(tǒng),分析了PpNAC56、PpNAC72和PpNAC72m的轉(zhuǎn)錄激活活性以及彼此之間是否存在蛋白互作。結(jié)果表明三個(gè)NAC蛋白都具有轉(zhuǎn)錄激活活性,因此在進(jìn)行蛋白互作試驗(yàn)之前,需分析NAC56/72的轉(zhuǎn)錄激活域。然后,檢測(cè)桃NAC72和NAC56基因之間有無互作還需進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。(5)利用番茄遺傳轉(zhuǎn)化體系,觀察‘A57’品種CK的下胚軸和子葉分化情況發(fā)現(xiàn)其下胚軸的分化能力高于子葉。雖然未得到轉(zhuǎn)基因株系,但為進(jìn)一步研究PpNAC72和PpNAC56基因的功能奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

圖 2-2 部分桃材料的基因組 DNAFig.2-2 Genomic DNA extracted from peach leaves記的驗(yàn)證查閱，我們共選取了 11 對(duì)與成熟相關(guān)的分子標(biāo)記（表 2-2）在 19

圖 2-3 多對(duì)引物在部分品種中的擴(kuò)增情況 The amplification of Several pairs primer in part peach germplasm with different maturity dates2-Indel 標(biāo)記在 199 份不同成熟期品種中的擴(kuò)增Indel 標(biāo)記在極早熟（編號(hào) 1-13）、晚熟和極晚熟（編號(hào) 13-54）種質(zhì)資源中擴(kuò)
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S662.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2652376