發(fā)布時間：2020-04-23 17:39

【摘要】：在世界范圍內(nèi),口腔癌約占全世界惡性腫瘤的3%,口腔癌中以舌癌最常見。雖然科學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展使醫(yī)療水平不斷提升,舌癌的治療手段也因此得到不斷改善,但患者的五年生存率仍然不高,術(shù)后的生存質(zhì)量也不盡如意。因此,從分子水平研究舌癌發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的分子機制,以期望實現(xiàn)舌癌的分子靶向治療、提高患者生存質(zhì)量和預(yù)后成為研究的熱門。本課題組前期通過轉(zhuǎn)錄組測序發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-10、MMP-13在舌癌組織中相對高表達(dá),與舌癌密切相關(guān)。因此,本課題擬通過研究抑制MMP-10、MMP-13基因后舌癌細(xì)胞CAL-27增殖、侵襲、遷移能力的變化,進一步明確它們在舌癌中發(fā)揮的作用,并探討其可能的機制,為舌癌的治療提供新思路。目的研究抑制MMP-10、MMP-13對舌癌細(xì)胞CAL-27增殖、侵襲遷移能力的影響,為舌癌基因靶向治療提供理論基礎(chǔ)和臨床依據(jù)。方法第一部分:篩選及進一步驗證舌癌癌及癌旁組織差異基因。由上海眾信生物技術(shù)有限公司通過對5對舌癌患者的癌組織和癌旁組織進行基于NGS的RNAseq測序,初步篩選出部分差異基因MMPs;將收集的舌癌及癌旁組織標(biāo)本應(yīng)用q RT-PCR方法對差異基因MMPs進行進一步驗證。第二部分:探討抑制MMP-10、MMP-13基因?qū)ι喟┘?xì)胞株CAL-27生物學(xué)行為的影響。用針對MMP-10和MMP-13基因序列分別設(shè)計合成相應(yīng)的si RNA,轉(zhuǎn)染CAL-27細(xì)胞,通過Realtime PCR技術(shù)檢測兩個基因在RNA水平的表達(dá)變化,篩選出兩條干擾效果較好的si RNA;采用蛋白免疫印跡法(Western blot)驗證兩個基因在蛋白水平的表達(dá)變化。運用CCK8法和平板克隆形成實驗研究MMP-10、MMP-13被干擾后CAL-27細(xì)胞增殖能力的改變;采用劃痕愈合實驗及侵襲小室法研究MMP-10、MMP-13被干擾后CAL-27細(xì)胞遷移、侵襲能力的改變。第三部分:建立動物模型觀察抑制舌癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MMP-10表達(dá)后癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)移能力的改變。構(gòu)建靶向抑制MMPs基因的慢病毒載體,感染舌癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株,建立裸鼠舌部原位癌模型,觀察及計算各組的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率。結(jié)果第一部分:RNA-seq測序結(jié)果顯示5對癌組織中MMP-10、MMP-13相對高表達(dá),應(yīng)用q RT-PCR方法進一步驗證也發(fā)現(xiàn)兩個基因在大部分舌癌組織中相對高表達(dá)。第二部分:si RNA-MMP-10/si RNA-MMP-13轉(zhuǎn)染CAL-27細(xì)胞后,Real-time PCR及Western blot結(jié)果顯示相應(yīng)的MMP-10/MMP-13在RNA水平及蛋白水平表達(dá)下調(diào);CCK8法和平板克隆形成實驗顯示si RNA-MMP-13轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖能力明顯低于陰性對照組;劃痕愈合實驗、侵襲小室結(jié)果表明,MMP-10/MMP-13表達(dá)下降后CAL-27細(xì)胞的遷移、侵襲能力也隨之下降。第三部分:慢病毒抑制穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞組1336組MMP-10蛋白較NC組表達(dá)下調(diào),遷移能力較NC組降低,我們選擇1336組穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞和NC組穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞進行動物實驗發(fā)現(xiàn)1336組裸鼠淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率較NC組下降。結(jié)論MMP-10、MMP-13在癌組織中相對高表達(dá);抑制MMP-13基因后CAL-27細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力均減弱;抑制MMP-10基因后CAL-27細(xì)胞的遷移、侵襲能力均減弱;MMP-10、MMP-13基因可能對人舌鱗癌的增殖、遷移和侵襲起到一定的促進作用。
【圖文】：

結(jié) 果 舌癌及癌旁組織收集情況收集 52 例舌癌及癌旁組織來自福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院行舌癌切除術(shù)的新鮮織標(biāo)本，每例包癌及癌旁組織，置于已經(jīng)標(biāo)記好的凍存管中，并迅速置于-80°冰箱儲存，用于組織 RNA 的提取。 RNA-seq 測序結(jié)果上海眾信生物技術(shù)有限公司對 5 對舌癌患者的癌組織和癌旁組織進行 RNA-seq序，對數(shù)據(jù)進行分析，我們發(fā)現(xiàn)與對應(yīng)的癌旁組織相比，MMP-10、MMP-13 在舌癌組織中均呈現(xiàn)高表達(dá)，其在癌與癌旁組織中的表達(dá)量均數(shù)比值分別為 319.8334 和9.0876。

表 1.5 所示為其中一次一對舌癌及癌旁組織 RNA 提取的濃度和純度，表 1.5所示 RNA 的濃度和純度，純度均在 1.80 以上，表明所提取的 RNA 達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，，可以用于逆轉(zhuǎn)錄實驗。表 1.5 RNA 濃度及純度處理組 濃度（μg/μl） OD260/OD280Tumor 0.5824 1.91Normal 0.6426 1.943.2 Real-time PCR 檢測結(jié)果用 qRT-PCR 測定 52 對舌癌組織及癌旁組織中 MMPP-10、MMP-13 的相對表達(dá)量，并計算ΔCt，作圖 1.2，如圖所示，MMP-10、MMP-13 在舌癌組織中的表達(dá)量高于癌旁組織 (P<0.0001，)，其中 90%（47/52）的舌癌組織中 MMP-10的表達(dá)量高于旁癌組織，88%（46/52）的舌癌組織中 MMP-13 的表達(dá)量高于旁癌組織。
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R739.86

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 徐以民;劉海珍;;有應(yīng)用前景的前列腺癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物[J];中華男科學(xué)雜志;2015年10期

2 王紅民;張小紅;;MMP-2、MMP-9在肺癌中的表達(dá)及其與肺癌轉(zhuǎn)移和預(yù)后關(guān)系的研究[J];中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用;2014年14期

3 鐘華;廖愛軍;劉迪群;;MMP-2、MMP-9與胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J];實用臨床醫(yī)學(xué);2012年02期

4 李海燕;鄭有光;程維剛;陳麗萍;張娜麗;;基質(zhì)金屬蛋白酶2和基質(zhì)金屬蛋白酶9、血管內(nèi)皮生長因子在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[J];中國實用醫(yī)刊;2011年18期

5 赫捷;邵康;;中國食管癌流行病學(xué)現(xiàn)狀、診療現(xiàn)狀及未來對策[J];中國癌癥雜志;2011年07期

6 張敏;雷志敏;閆國勝;高丹;;HGF/c-Met、VEGF和uPA在口腔鱗癌組織中的表達(dá)及意義[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2010年01期

7 歐陽紅娟;姜浩;黃衛(wèi)國;曾慶彪;趙強;;幽門螺旋桿菌感染、MMP-1及MMP-10蛋白表達(dá)與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2010年01期

8 岳新召;張慶憲;許愛國;邢亞恒;張福瑞;;非小細(xì)胞肺癌中基質(zhì)金屬蛋白酶10與CD105的表達(dá)及其意義[J];山東醫(yī)藥;2009年45期

9 曾聰;白嵐;;肝癌組織基質(zhì)金屬蛋白酶9與腫瘤壞死因子受體1的關(guān)系[J];山東醫(yī)藥;2009年17期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 孫博文;基于全轉(zhuǎn)錄組深度測序的垂體ACTH腺瘤mRNA及microRNA表達(dá)譜分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2016年

2 郭朋;基于RNA-seq技術(shù)的宮頸鱗癌轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

3 張春雨;整合素及血管細(xì)胞粘附分子等在非小細(xì)胞肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移中臨床標(biāo)志物作用的研究[D];吉林大學(xué);2014年

4 劉寒強;基于RNA-seq技術(shù)的肝細(xì)胞肝癌轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 李博;MMP-11和IGF-1在胃癌組織中的表達(dá)及其與浸潤轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究[D];浙江大學(xué);2009年

本文編號：2637979